Caracterização de metilação em proteínas do Vírus Respiratório Sincicial Humano e busca de suas implicações funcionais

Abstract

O Vírus Respiratório Sincicial Humano (HRSV) é um dos mais importantes patógenos que acomete o trato respiratório. Esse vírus causa doença respiratória principalmente em recém-nascidos, bebês, crianças, idosos e pacientes imunocomprometidos. Até o presente momento não há um antiviral eficiente e a custo acessível disponível em larga escala ou uma vacina aprovada. O genoma do HRSV codifica 11 proteínas, sendo de extrema importância para entender a relação vírus-hospedeiro caracterizar interações dessas proteínas com componentes celulares. Neste projeto tivemos por objetivo caracterizar metilações em proteínas virais, observadas anteriormente no laboratório, e buscar possíveis implicações funcionais durante a replicação do vírus. Obtivemos dados confirmando que ocorre metilação em N em resíduos de lisina através de reatividade com anticorpo específico para tal modificação. Esses resíduos estão localizados em posições de N envolvidas na interação com o RNA viral e com a fosfoproteína viral. Com essa evidência testou-se o efeito de inibidores de metilação em argininas e lisinas, e de um inibidor de demetilação de argininas, na sobrevivência de células após infecção pelo HRSV. Obtivemos resultados mostrando que não houve efeito de qualquer um dos inibidores isoladamente. Quando associados, em algumas das combinações observamos ligeiro aumento na sobrevida das células infectadas pelo vírus. Esse conjunto de dados indica que deve ser feito maior investimento na caracterização desse fenômeno.

The Human respiratory syncytial virus (HRSV) is one of the most important pathogens of the respiratory tract. This virus causes respiratory disease in newborns, babies, children, elderly and immunocompromised patients. Up to the present there is no antiviral effective and at affordable cost available for large-scale use, or a vaccine approved. The HRSV genome encodes 11 proteins being extremely important to understand host-virus relationship characterize their interactions with cellular components. In this project we had as objective to characterize viral protein methylations observed previously in the laboratory and look for possible functional implications during virus replication. We obtained confirmation that methylation occurs in lysine residues through reactivity with specific antibody to this modification. These residues are located in N positions involved in interaction with the viral RNA and viral phosphoprotein, indicating functional meaning. With this evidence, we tested the effect of arginine and lysine methylation and arginine de-methylation inhibitors in the survival of HRSV infected cells. We obtained results showing that there was no effect of any of the inhibitors individually. When associated, for some of the combinations we observed a slight increase on the survival of virus-infected cells. These data point to a further investment to characterize this phenomenon.