Um novo modelo de camundongo transgênico CRISPR/Cas9 para estudos in vivo sobre a proteína espermática EPPIN, um alvo para contracepção masculina

Abstract

O desenvolvimento de novas estratégias contraceptivas masculinas é fundamental para ampliar a participação dos homens no planejamento familiar e para promover o compartilhamento do ônus contraceptivo com as mulheres. A proteína espermática EPPIN (inibidor de protease epididimária, WFDC7) constitui um alvo promissor para drogas contraceptivas masculinas não hormonais sob demanda, devido ao seu papel como sítio de ligação na superfície do espermatozoide para proteínas do plasma seminal, como o SEMG1 humano e seu ortólogo murino SVS2, resultando na inibição transitória da capacidade fertilizante do espermatozoide. Embora variantes genéticas em EPPIN estejam associadas à infertilidade masculina idiopática, pouco se sabe sobre a necessidade fisiológica dessa proteína para a reprodução de mamíferos in vivo. Considerando a conservação funcional entre EPPIN humano e murino, este projeto teve como hipótese que a deleção direcionada do gene Eppin em camundongos causaria infertilidade ou subfertilidade devido a alterações na motilidade espermática e na interação proteína-proteína mediada por EPPIN. O objetivo principal foi gerar camundongos Eppin-KO utilizando a tecnologia CRISPR-Cas9 e caracterizar seu fenótipo reprodutivo, incluindo análise do desempenho reprodutivo, níveis hormonais, parâmetros quantitativos e funcionais de espermatozoides, e histologia testicular e epididimária. Durante o período de 01-05-2023 a 30-04-2025, o projeto promoveu avanços metodológicos significativos, como a padronização de protocolos de microinjeção, eletroporação e transferência embrionária, além da implementação de ferramentas avançadas de genotipagem e sequenciamento, em colaboração com centros especializados. Iniciamos com a estratégia de posicionar as guias nos exóns 1 e 3, e posteriormente com novas guias flanqueando o exon 2. Apesar da deleção do gene Eppin não ter sido alcançada in vivo ou in vitro, os esforços permitiram consolidar protocolos experimentais, capacitar a equipe em técnicas de biotecnologia de ponta e identificar limitações técnicas críticas, incluindo baixa eficiência de clivagem das guias CRISPR e interferência de mecanismos endógenos de reparo do DNA. Em resposta a esses desafios, foi iniciada a aquisição de camundongos Eppin-KO já estabelecidos junto à empresa GemPharmatech, garantindo a continuidade do projeto e permitindo a execução imediata de experimentos de caracterização fenotípica e funcional. Essa estratégia assegura a obtenção de dados robustos sobre a função de EPPIN na fertilidade masculina, otimiza os recursos investidos e reforça o compromisso da equipe em concluir integralmente os objetivos do projeto, mesmo após a finalização do período de bolsa. Em síntese, o projeto consolidou uma base metodológica e conceitual sólida para futuras investigações sobre contracepção masculina, fornecendo insights sobre o papel da EPPIN na fertilidade e estabelecendo um caminho estratégico para o desenvolvimento de abordagens contraceptivas seguras, reversíveis e não hormonais.