Botucatu - IBB - Instituto de Biociências

URI Permanente para esta coleçãohttps://hdl.handle.net/11449/254377

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Avaliação da inibição farmacológica e molecular do inflamassoma NLRP3 e suas consequências em modelo in vitro de pré-eclâmpsia
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-11-25) Nunes, Priscila Rezeck ; Sandrim, Valéria Cristina ; Instituto de Biociências de Botucatu ; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A pré-eclâmpsia (PE) é uma síndrome específica da gestação humana, sendo uma das principais causas de morte materna no Brasil. A fisiopatologia da PE não está totalmente esclarecida, mas sabe-se que a isquemia placentária tem fundamental importância nesse processo, já que a liberação de produtos resultantes de má perfusão na circulação materna pode levar a uma disfunção endotelial sistêmica. A inflamação persistente no endotélio estimula a secreção de vários mediadores inflamatórios, que desencadeiam um processo importante em doenças inflamatórias pela ativação de diversos padrões de sinalização. Considerando que as causas relacionadas à disfunção endotelial, estresse oxidativo e inflamação na PE ainda permanecem um desafio para a prática clínica, o emprego de fármacos e o uso de abordagens moleculares relacionadas à inibição do inflamassoma NLRP3 podem ser uma boa escolha para propor futuros tratamentos para essa doença. O presente projeto tem como objetivo: avaliar a ação farmacológica e molecular de inibidores do inflamassoma NLRP3 em modelo in vitro de PE e as relações com biomarcadores de disfunção endotelial, estresse oxidativo e inflamação. Para atingir esse objetivo serão realizados os seguintes expetimentos: 1- Avaliação do efeito do plasma de gestantes portadoras de PE e normotensas (NT) na ativação do inflamassoma NLRP3 via NF-κB em linhagem de células endoteliais, 2- Comparação da ativação do inflamassoma em células endoteliais primárias de gestantes com PE e NT submetidas ao tratamento com inibidores farmacológicos e RNA de interferência, 3- Avaliação do efeito da inibição farmacológica e molecular na função das células endoteliais incubadas com plasma através de ensaios de formação de tubos, permeabilidade, marcadores de disfunção endotelial, estresse oxidativo, autofagia e piroptose, 4- Observação do efeito dos inibidores do inflamassoma NLRP3 sobre contração e relaxamento dos vasos de gestantes por ensaio de reatividade vascular. Os resultados serão avaliados por testes paramétricos ou não paramétricos, dependendo da variabilidade, sendo adotado o nível de significância de p<0,05. Estudos sobre disfunção endotelial e sua relação com a inflamação na PE ainda permanecem um objetivo a ser mais explorado, assim, elucidar os mecanismos moleculares associados às interações entre inflamação e disfunção endotelial pode ser favorável para desenvolver novos tratamentos e terapias mais efetivas.
Caracterização histológica e histomorfométrica da esteatose hepática em perdiz (Rhynchotus rufescens Temminck, 1815)
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-10-05) Viegas, Katia Aparecida da Silva ; Filadelpho, André Luis ; Almeida-Francia, Camila Contin Diniz de ; UNESP, Instituto de Biociências, Botucatu
O presente estudo teve como objetivo caracterizar histologicamente e histomorfometricamente a lipidose hepática em fígados de perdizes (Rhynchotus rufescens) mantidas em cativeiro. A lipidose hepática, caracterizada pelo acúmulo anormal de lipídios nos hepatócitos, compromete a função hepática e pode levar a distúrbios metabólicos graves. Foram analisados fígados de 15 perdizes adultas, utilizando colorações com Hematoxilina e Eosina (H.E.) e Tricrômico de Masson, além de análises morfométricas realizadas com o software ImageJ. Os resultados mostraram vacuolização significativa dos hepatócitos, particularmente nas zonas periacinares, onde o acúmulo lipídico foi mais acentuado, em comparação com as zonas periportais, que apresentaram menor grau de vacuolização. A análise dos diâmetros dos hepatócitos revelou variações entre as regiões periportais e periacinares. As áreas periacinares apresentaram diâmetros maiores e maior quantidade de vacúolos, sugerindo um estágio mais avançado de lipidose nessa zona, associada a menor oxigenação e maior vulnerabilidade ao estresse metabólico. Em contraste, as regiões periportais mostraram hepatócitos com diâmetros menores e menos vacúolos, indicando menor comprometimento estrutural. Além disso, foi observada compressão dos sinusoides hepáticos, desorganização dos cordões de hepatócitos, e infiltrados inflamatórios em algumas regiões, o que sugere um estágio progressivo de lipidose que pode evoluir para fibrose e esteato-hepatite. A análise morfométrica confirmou a heterogeneidade do acúmulo lipídico entre as diferentes zonas hepáticas, evidenciando o impacto da lipidose na morfologia e função celular. Este estudo fornece dados importantes sobre a lipidose hepática em aves de cativeiro, ressaltando a importância de estratégias nutricionais e de manejo para prevenir a doença. Os resultados servem como base para futuras investigações e para o desenvolvimento de protocolos preventivos e terapêuticos em aves de criação.
Construção de um modelo preditivo para o prognóstico de pacientes com neuroblastoma baseado em assinaturas transcricionais
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-12-22) Molan, André Luiz ; Rybarczyk Filho, José Luiz ; Instituto de Biociências de Botucatu
A tireoide é uma glândula endócrina que desempenha diferentes papéis relacionados tanto ao desenvolvimento de órgãos quanto ao controle homeostático de mecanismos fisiológicos relacionados ao crescimento e consumo de energia em todos os vertebrados. A incidência do câncer de tireoide, de forma global, vem aumentando gradativamente. Nos últimos 30 anos, países como os Estados Unidos tiveram o número de casos quase triplicado. O câncer de tireoide é a malignidade mais comum em órgãos endócrinos. A maioria de seus tumores são derivados de células epiteliais foliculares, enquanto 3-5% tem origem parafolicular ou células C (carcinoma medular). Normalmente, ocorrem em nódulos tireoidianos e são detectados por exames de toque ou imagem. Os nódulos, tipicamente, são unilaterais e indolores. Devido à grande maioria dos nódulos serem benignos, o desafio clı́nico consiste em identificar de forma rápida e precisa os nódulos que realmente abrigam o câncer. A amostragem de nódulos através da biópsia com agulha fina de aspiração (FNA) guiada por ultrassom, seguido de uma análise citológica das células coletadas, são os métodos mais utilizados e que melhores resultados apre- sentam. Um método alternativo à aspiração citológica é a mini biópsia trucut. Ela permite ao patologista ter acesso ao núcleo do tecido tireoidiano. Sua realização consiste no uso de uma agulha trucut 18G acompanhado de anestesia local e uso de ultrassom, e normalmente é aplicado quando a técnica com FNA mostra resultados não diagnóstico ou suspeitos de malignidade. Contudo, ambos os métodos são passíveis de falhas. Experimentos utilizando tecnologia de sequenciamento NGS (Next Generation Sequence) se tornaram uma grande ferramenta para a melhoria de acurácia nos diagnósticos de câncer de tireoide. Na prática clínica, experimentos NGS tem sido usados, ainda, no diagnóstico de nódulos tireoidianos com citologia indeterminada. Diante deste cenário, com uma grande oferta de dados e grandes avanços tecnológicos, técnicas estatísticas e modelos computacionais se tornaram ferramentas indispensáveis para a análise genômica e transcriptômica tumoral. Com isso, destacamos o aprendizado de máquina, um ramo da inteligência artificial composto por algoritmos capazes de buscar por padrões ou tendências em um dado conjunto de dados e utilizar o conhecimento adquirido para a realização de predições e busca por novos insights.
Acesso Aberto (Open Access)
Papel do TERRA na regulação da manutenção dos telômeros e na senecência replicativa em Leishmania major
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-03-31) Assis, Luiz Henrique de Castro ; Cano, Maria Isabel Nogueira ; Universidade Estadual Paulista (UNESP)
Leishmaniases affect millions nowadays. It is caused by more than twenty species of parasites of the Leishmania genus. Due to the lack of efficient treatment and disease control, many efforts have been made to uncover the parasite's biological peculiarities. Telomeres have been considered antiparasitic drug targets since they are crucial for genome maintenance and cell survival. In several eukaryotes, telomeres are transcribed in long ncRNA's, such as TERRA, which is likely to affect telomere regulation. In Leishmania, TERRA transcription seems to be controlled by the modified thymine Base J, which is 98% concentrated at telomeres. Base J blocks restriction enzyme digestion and is an epigenetic signal for RNA polymerase II transcription termination. Therefore, Base J can interfere with TERRA and telomere homeostasis. We created L. major cell lines depleted of base J by editing the genes encoding JBP1 and JBP2, which are involved in Base J synthesis. Although the double knockout of JBP1 (JBP1-/-) was lethal to the parasites, the double knockout of JBP2 (JBP2-/-) was successfully generated. JBP2-/- cells presented growth ratios different from wild-type parasites during continuous in vitro passages. Also, cell cycle analyses showed that JBP2-/- initially presented arresting in G2/M phases. After several passages, JBP2-/- cells changed their proliferation profile, returning to the control level and accumulating in the S phase of the cell cycle. When examined by optical microscopy, JBP2-/- cells in P7 did not show morphological differences. However, ultrastructural alterations such as intense cytosolic vacuolization, autophagosomes, blebs in the flagellum or flagellar pocket, and concentric membranal structures within the mitochondrion were detected by transmission electron microscopy. RTqPCR detected quantitative differences in TERRA mRNA expression in JBP2-/- cells that grew up to P21. They also showed down-regulation of mRNAs involved in DNA and telomere replication and damage repair, probably due to base J depletion, which triggers a readthrough of RNA pol II transcription termination. In addition, JBP2-/- cells also showed increased telomere length after a few passages, suggesting a new role for JBP2 in the parasite's telomere maintenance.
Acesso Aberto (Open Access)
Acurácia e precisão da análise isotópica na autenticidade de sucos de frutas
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-07-31) Denadai, Juliana Célia ; Costa, Vladimir Eliodoro
A qualidade de alimentos e bebidas tornou-se um problema mundial e é cada vez mais importante detectar a introdução, no mercado, de produtos adulterados e de qualidade inferior. A autenticação de alimentos envolve a maioria dos gêneros alimentícios, em particular produtos a base de frutas. O desenvolvimento de diferentes técnicas para a autenticação de alimentos e bebidas tem aumentado significativamente com a crescente consciência do consumidor, bem como é de interesse de empresas que não desejam a competição injusta com empresários sem escrúpulos que ganham vantagens econômicas através de práticas fraudulentas observadas nas indústrias. Diante do exposto, medições da razão isotópica têm se mostrado úteis na autenticidade de alimentos e bebidas, especialmente em casos em que a composição de alimentos e bebidas baseia-se em misturas de compostos produzidos a partir de plantas do ciclo fotossintético C3 e C4. A formação de um banco de dados das matérias-primas e dos possíveis adulterantes se faz necessário. Este relatório apresenta os resultados dos valores de açúcares de diferentes tipos e marcas encontrados nos mercados brasileiros, em dois anos consecutivos e nas diferentes origens geográficas da produção dos mesmos e resultados das análises das amostras de água de coco e sucos enviadas ao Centro de Isótopos Estáveis Dr. Carlos Ducatti, do IBB/UNESP nos anos de 2020, 2021, 2022 e 2023. Com essas análises, temos um banco de dados atualizado do valor médio do δ13C do açúcar e produtos, proporcionando maior segurança para futuras análises de autenticidade de alimentos e bebidas que usam esses valores como base. Este projeto se encontra em expansão com novos estudos em maçã, caju, mel e água de coco, com a finalidade de melhorar a dispersão dos resultados, com financiamento de bolsa pela FUNDIBIO/IBB/UNESP.
Acesso Aberto (Open Access)
Aplicação de carvão ativado funcionalizado para adsorção de espécies metálicas de amostra de álcool combustível
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-08-02) Silva, Adrielli Cristina Peres da ; Pedrosa, Valber de Albuquerque ; Instituto de Biociências de Botucatu
A pesquisa em remoção de espécies metálicas de amostras de álcool combustível tem sido uma área de interesse significativo devido aos crescentes problemas de poluição ambiental e de saúde pública decorrentes da exposição a esses contaminantes. Este projeto abordou a utilização de um material adsorvente funcionalizado com melamina para efetuar a remoção dessas espécies, visando mitigar os impactos adversos no meio ambiente e na saúde humana. A funcionalização do carvão ativado com melamina é uma abordagem que busca melhorar a capacidade de adsorção do material, tornando-o mais eficiente na remoção de metais presentes no álcool combustível (TEIXEIRA et al., 2006; SKERFVING et al., 1998). A preocupação com a presença de metais em emissões veiculares, especialmente em áreas urbanas, tem motivado o desenvolvimento de tecnologias para reduzir esses contaminantes. Neste contexto, a adsorção surge como um método promissor devido à sua eficácia e menor custo em comparação a outros processos de remoção. A interação entre os átomos do ligante presente na superfície do material adsorvente e as espécies metálicas permite a complexação e consequente remoção desses contaminantes. Sendo assim, uma sequência de análises de caractetização do material foi realizada, nas quais utilizaram-se técnicas como espectroscopia vibracional em infravermelho, titulação pelo método de Boehm, determinação do ponto de carga zero, análise elementar de nitrogênio, espectroscopia de fotoelétrons excitados por raios X e microscopia eletrônica de varredura. Adicionalmente, foram realizados estudos de adsorção para determinar parâmetros importantes, como o tempo mínimo de contato, pH favorável para adsorção e capacidade máxima de adsorção da espécie metálica em estudo. A análise dos resultados obtidos permitiu avaliar as propriedades adsortivas do material e seu potencial para aplicação na filtração de espécies metálicas em amostras de álcool combustível, contribuindo assim para a redução do impacto ambiental e proteção da saúde pública.
Caracterização pan-câncer da intercomunicação de células únicas do microambiente tumoral
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-08-02) Cury, Sarah Santiloni ; Carvalho, Robson Francisco
O microambiente tumoral (MAT) facilita as interações celulares no câncer através de contato direto ou por fatores secretados (secretoma). Evidências destacam o papel central das células do MAT na secreção de fatores que modulam a infiltração e a função das células tumorais. A caquexia do câncer exemplifica as repercussões dessa interação complexa dentro do MAT. Esta síndrome complexa, marcada por declínio funcional e mortalidade, é desencadeada. Principalmente, for fatores do secretoma do MAT. No entanto, nenhum estudo foi conduzido para caracterizar o repertório global do secretoma das células individuais do MAT e seu perfil de interação induzido usando sequenciamento de RNA de célula única (scRNA-Seq) em vários tipos de tumor com prevalência variável de caquexia. Reanalisamos os dados de scRNA-Seq no banco de dados Cancer Curated Cell Atlas (3CA). Usando o pacote Seurat v.4.0.6, caracterizamos os perfis de expressão gênica do secretoma em 12 tipos de tumor. Isso envolveu a análise de cada população de células dentro do MAT, somando 245 amostras tumorais e 829.984 células únicas. Os genes de cada tipo celular foram filtrados usando a lista de genes do secretoma humano do banco de dados The Human Protein Atlas. Identificamos também interações cruciais secretoma-receptor correlacionadas com a caquexia do câncer usando o CellChat v.1.6.0. Selecionamos células malignas, células T, células B, macrófagos, fibroblastos, células dendríticas e células endoteliais para análise, considerando que foram encontradas na maioria dos tipos de câncer (> 8 tipos). Análises de comunicação célula-célula baseadas no secretoma demonstraram que a alta prevalência de caquexia se correlaciona com interações aumentadas promovidas por fibroblastos, macrófagos e células malignas. Essas interações também indicam o papel essencial do secretoma dos fibroblastos em cânceres com alta prevalência de caquexia, com o câncer pancreático, impactando o maior número de vias de comunicação célula-célula. Entre as probabilidades de interação, MDK expresso por fibroblastos e seu receptor SDC4, expressos por células malignas, correlacionam-se positivamente (0,89; p=0,003) com a prevalência de caquexia. Nosso estudo fornece uma abordagem pan-câncer para entender comunicações celulares promovidas pelo secretoma tumoral na caquexia associada ao câncer a nível de célula única. Ao caracterizar perfis de expressão específicos de célula e interações ligante-receptor cruciais, identificamos os fibroblastos como principal mediador, particularmente no câncer pancreático. Esses resultados podem guiar o desenvolvimento de terapias mais direcionadas para as interações relevantes no MAT de tipos de câncer altamente associados à síndrome.
Acesso Aberto (Open Access)
Seleção natural de Jacaranda cuspidifolia (Mart.) em uma área resiliente de cerrado
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-01-30) Silvestre, Marcela Aparecida de Moraes ; Marino, Celso Luis
O processo de recuperação de uma área degradada requer a seleção e identificação de espécies arbóreas nativas adaptadas às condições edáficas que permite a revegetação, estruturação e formação dos horizontes mais superficiais do solo exposto. Entretanto, a coleta de sementes deve ser feita adequadamente para reter tamanho efetivo suficiente para garantir a sobrevivência a longo prazo. Nesse sentido, o objetivo da presente proposta é investigar os mecanismos adaptativos de Jacaranda cuspidifolia, em plantio há 24 anos em uma área altamente degradada. Entre os indivíduos sobreviventes, apenas alguns apresentaram florescimento, no qual fez a coleta de sementes e instalação de um teste de progênies. Dessa forma pretende-se: i) determinar a variação genética para os caracteres de crescimento e adaptação; ii) quantificar os macros e micronutrientes do solo; iii) desenvolver bibliotecas e validar os marcadores SNPs (Single Nucleotide Polymorphism) relacionados ao florescimento e crescimento; iv) investigar a diversidade genética e a estrutura genética de populações via marcadores SNPs; v) relacionar os caracteres silviculturais com as características do solo por análise multivariada. Inicialmente foi instalado um experimento em uma área de empréstimo, conhecido por população base (POP BAS), composto por 17 tratamentos (espécies) no espaçamento de 3,0 m x 1,0 m, localizado na Fazenda de Ensino, Pesquisa e Extensão – FEPE/UNESP, em Selvíria-MS. Após 20 anos, apenas a espécie J. cuspidifolia sobreviveu, e no total de 980 árvores plantadas restaram apenas 167 (17,04%), nos quais 31 apresentaram florescimento e frutificação. Nesta época foram coletadas sementes e instalado um teste de progênies (TP-JACA), com delineamento experimental de blocos casualizados, constituído de 31 progênies, 29 repetições, com uma planta por parcela, com espaçamento de 3,0 x 2,0 m, em uma área não degradada, da FEPE/UNESP. A presença de variabilidade genética foi confirmada por estimativas quantitativas e diversidade genética via marcadores SNPs. Estes marcadores também possibilitaram identificar alelos exclusivos para as árvores que F em relação as que NF. A análise de PCA não apresentou um agrupamento exclusivo de indivíduos que F ou NF. A distância genética sugere que existe diferença entre os pares das árvores que foram coletadas, porém não houve uma separação clara entre os dois grupos de florescimento. A seleção natural propiciou o estreitamento da base genética da POP-BAS, fixando determinados alelos para adaptação ao ambiente. Este estudo utilizou uma metodologia inovadora, no qual é escasso na literatura, fornecendo informações inéditas sobre a espécie. O J. cuspidifolia mostrou ser é uma espécie promissora, capaz de sobreviver a uma “área de empréstimo” e completar seu ciclo de vida produzindo bons descendentes, podendo ser recomendada em projetos de recuperação de áreas degradadas.
Determinação de aminoácidos e aminas biogênicas aplicada à tipificação de méis florais produzidos no estado de São Paulo
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-06-30) Monteiro, Gean Charles ; Lima, Giuseppina Pace Pereira
O mel e seus produtos derivados estão se tornando substâncias naturais valorizadas pelas suas propriedades biológicas. A composição química do mel é afetada por vários fatores, incluindo espécies de abelhas, a planta a partir da qual foi coletado néctar (específico para cada estação), sazonalidade e a área geográfica. Dada a diversidade de tipos de méis no mercado e à demanda crescente deste alimento, métodos analíticos precisos e robustos são requeridos à padronização de procedimentos e critérios que garantam a autenticidade e a origem dos méis, aspectos de interesse mútuo de produtores idôneos e consumidores. Estas análises químicas de composição, além de serem importantes para a identificação de compostos com atividades farmacológicas, também são fundamentais para uso como marcadores na determinação de origem botânica e verificação de possíveis adulterações. Sendo assim, a presente proposta enfoca a determinação do perfil bioquímico, com ênfase na composição de aminoácidos (i.e., triptofano e 5-hidroxitriptofano) e aminas biogênicas em méis de diferentes regiões e sazonalidades no estado de São Paulo, visando a identificação de compostos com atividades farmacológicas, indicadores de qualidade nutricional e/ou funcional. Além disso, essas análises propiciam a utilização destes compostos supracitados como marcadores bioquímicos para a determinação de origem das amostras analisadas. Dessa forma, compostos biologicamente ativos relevantes foram investigados como possíveis marcadores bioquímicos para determinar a origem geográfica das amostras analisadas. Os resultados da proposta permitiram identificar amostras de mel com base em diversas características de qualidade, incluindo sua região de produção, época de colheita e constituintes biologicamente ativos.

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