MicroRNAs urinários como biomarcadores de lesão renal precoce em cães com leishmaniose visceral

Abstract

A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma zoonose sistêmica causada por Leishmania infantum, cujo principal reservatório urbano é o cão. Os cães infectados podem apresentar sinais clínicos inespecíficos e, em casos avançados, evoluir para óbito por doença renal crônica. Este estudo investigou o perfil de microRNAs (miRNAs) urinários como potenciais biomarcadores precoces de lesão renal em cães naturalmente infectados por L. infantum. Foram avaliados 15 cães: machos de 1 a 7 anos, cinco controles saudáveis e dez infectados em estágio moderado da doença, segundo o LeishVet, sem tratamento prévio. Todos os animais foram submetidos a exames clínicos, laboratoriais, ultrassonografia renal e diagnóstico sorológico e molecular da LVC. Os cães infectados apresentaram sinais clínicos típicos, como onicogrifose, linfadenomegalia, caquexia e lesões cutâneas, além de alterações laboratoriais compatíveis, incluindo hipoalbuminemia e hiperglobulinemia. A ultrassonografia abdominal revelou aumento da ecogenicidade renal e elevação do pico sistólico do rim esquerdo. As vesículas extracelulares urinárias foram isoladas para extração de RNA e sequenciamento de miRNAs (RNA-Seq), seguido de análise bioinformática. Foram identificados 23 miRNAs diferencialmente expressos nos cães doentes, sendo três com expressão fisiológica renal: miR-486 e miR-378 (up-regulados) e let-7f (down-regulado). Esses miRNAs apresentaram correlação significativa com parâmetros Doppler renais, sugerindo papel na modulação de vias relacionadas à hemodinâmica e integridade glomerular. Adicionalmente, outros miRNAs, como miR-320, miR-126, miR-151 e miR-423, também se associaram a alterações funcionais e estruturais, refletindo respostas inflamatórias, endoteliais e fibróticas renais. Esses achados indicam que os miRNAs urinários, especialmente o miR-486, miR-378 e let-7f, podem atuar como biomarcadores sensíveis e não invasivos de lesão renal inicial em cães com LVC, antecipando alterações detectáveis por métodos convencionais, enquanto o conjunto de miRNAs diferencialmente expressos fornece uma visão integrada da regulação molecular envolvida na progressão da nefropatia. Esses resultados contribuem para o avanço no diagnóstico precoce e na compreensão da fisiopatologia renal associada à LVC.

Canine visceral leishmaniasis (CVL) is a systemic zoonosis caused by Leishmania infantum, whose main urban reservoir is the dog. Infected dogs may present non-specific clinical signs and, in advanced cases, progress to death due to chronic kidney disease. This study investigated the profile of urinary microRNAs (miRNAs) as potential early biomarkers of kidney injury in dogs naturally infected with L. infantum. Fifteen dogs were evaluated: males aged 1 to 7 years, five healthy controls and ten infected dogs in a moderate stage of the disease, according to LeishVet, without prior treatment. All animals underwent clinical, laboratory, and renal ultrasonography examinations, as well as serological and molecular diagnosis of CVL. Infected dogs showed typical clinical signs, such as onychogryphosis, lymphadenomegaly, cachexia, and skin lesions, in addition to compatible laboratory alterations, including hypoalbuminemia and hyperglobulinemia. Abdominal ultrasonography revealed increased renal echogenicity and an elevation of the systolic peak of the left kidney. Urinary extracellular vesicles were isolated for RNA extraction and miRNA sequencing (RNA-Seq), followed by bioinformatic analysis. Twenty-three miRNAs were identified as differentially expressed in the diseased dogs, three of which showed renal physiological expression: miR-486 and miR-378 (up-regulated) and let-7f (down-regulated). These miRNAs showed a significant correlation with renal Doppler parameters, suggesting a role in modulating pathways related to hemodynamics and glomerular integrity. Additionally, other miRNAs, such as miR-320, miR-126, miR-151, and miR-423, were also associated with functional and structural alterations, reflecting inflammatory, endothelial, and fibrotic renal responses. These findings indicate that urinary miRNAs, especially miR-486, miR-378, and let-7f, can serve as sensitive and non-invasive biomarkers of initial kidney injury in dogs with CVL, anticipating alterations detectable by conventional methods, while the set of differentially expressed miRNAs provides an integrated view of the molecular regulation involved in the progression of nephropathy. These results contribute to the advancement in early diagnosis and the understanding of the renal pathophysiology associated with CVL.