Caracterização do período de diferenciação sexual e expressão de genes relacionados a esse mecanismo em piracanjuba Brycon orbignyanus

Abstract

A piracanjuba é uma espécie em perigo de extinção classificada como (EN) A2c no Livro vermelho da fauna brasileira ameaçada de extinção e, portanto, tem sido alvo de estudos e de programas de repovoamento. No entanto, tem sido observado que a criação desta espécie em ambiente artificial altera a proporção sexual dos descendentes, sendo a maioria machos. Esta alteração é indesejada para o uso destes animais como reforço de estoque em ambiente natural, podendo afetar a reprodução dos mesmos no ambiente natural. Visando compreender o motivo de tais alterações na proporção sexual, este trabalho teve como objetivos estudar os aspectos básicos de diferenciação sexual desta espécie, tal como caracterizar o período de diferenciação sexual, avaliar a expressão de genes relacionados a diferenciação, bem como verificar uma possível influência do canibalismo no período larval como um fator para alteração da proporção sexual. A análise da expressão gênica foi realizada em oócitos, larvas de 8 dias pós-fertilização, juvenis e adultos para os genes sox9, dmrt1, foxl2, cyp19a, ddx20 e ddx4. Foi feita a extração de RNA e síntese de cDNA de todas as amostras, seguida da PCR convencional e os produtos de amplificação analisados em gel de eletroforese. Gônadas de juvenis de 6 a 12 meses foram processadas para histologia para caracterização do período de diferenciação sexual e a relação com a expressão dos genes. Lavas do terceiro dia pós-fertilização foram submetidas a dois tratamentos de criação até o sétimo dia, sendo realizado com larvas individualizadas e em grupo. Após 12 meses, foram coletadas as gônadas e analisadas por meio de histologia e PCR para analisar a proporção sexual entre os diferentes tratamentos. Os resultados da expressão gênica indicaram que ddx4 e dmrt1 são específicos das gônadas, os demais, também foram expressos em outros tecidos. Os genes dmrt1, foxl2 e sox9 apresentaram expressão dimórfica em gônada de macho e fêmea por meio da análise de eletroforese, sendo eleitos bons genes para análise quantitativa. Em larvas não foi detectada apenas a expressão de dmrt1, sendo os demais genes expressos, porém de difícil relação com diferenciação sexual. Em juvenis, a identificação de ovário foi realizada a partir do sexto mês e de testículos ao décimo mês por meio da histologia. Na análise histológica deste período de desenvolvimento gonadal foi observada a presença de indivíduos intersexo. Na análise de proporção sexual nos tratamentos de criação em grupo e individualizados não houve desvio de proporção, sendo a mesma de 1:1. Os resultados obtidos forneceram conhecimentos importantes para estudos futuros visando a compreensão do processo de diferenciação sexual nesta espécie.