Avaliação bioquímica e enzimática do potencial inibitório de diferentes heparinas contra o veneno de Bothrops jararaca

Abstract

Os acidentes com serpentes representam um problema de saúde pública no Brasil, cerca de 25 mil pessoas são afetadas por ano, sendo que o gênero Bothrops, conhecido como “jararacas”, é responsável por mais de 70% dos acidentes e estes estão relacionados com alta morbimortalidade em regiões com maior vulnerabilidade econômica, política e social. O veneno é composto principalmente por proteínas, destacam-se as metaloproteases de venenos de serpentes (SVMPs), fosfolipases A2 (PLA2) e serinoproteases de venenos de serpentes (SVSPs), associadas com os principais efeitos locais e sistêmicos do envenenamento botrópico. As manifestações clínicas incluem efeitos locais, como edema, equimose, dor e inflamação intensa, mionecrose e hemorragia local; e sistêmicos, como coagulopatia, tromboinflamação, hipotensão e hemorragia. O único tratamento disponível, o antiveneno específico, possui algumas limitações de administração e de neutralização, visto que deve ser administrado em um hospital e o acesso é precário em comunidades mais distantes; e relacionado à neutralização, já que o antiveneno não neutraliza totalmente os efeitos locais, sendo necessária a utilização de terapias complementares, além disso, toxinas de serpentes que não estão no pool podem ser fracamente inibidas. Nesse sentido, aplicando-se o conceito de reposicionamento de drogas, o objetivo deste estudo é avaliar o potencial inibitório de diferentes heparinas contra o veneno de Bothrops jararaca, para isso, adotamos estratégias bioquímicas, com uso de eletroforese e cromatografia; e testes enzimáticos, como atividade de coagulação e proteolítica. As estratégias bioquímicas foram utilizadas para avaliar se havia interação da heparina com o veneno. Foi feito gel de poliacrialamida 10,5% SDSPAGE em condições redutoras e desnaturantes com as seguintes amostras: 1) padrão; 2) veneno bruto; 3) veneno pré-incubado com heparina comercial; 4) veneno pré-incubado com heparina patenteada, que foi corado com Comassie Brilhant Blue G ou Prata. Além disso, utilizamos RP-HPLC para obter os perfis cromatográficos dos grupos citados e entre as diferentes heparinas. Os resultados sugerem que as heparinas foram capazes de interagir de forma semelhante com o veneno de Bothrops jararaca, que provavelmente ocorreu com metaloproteases, visto que possuem um perfil de eluição prolongado. O teste de atividade proteolítica corroborou a interação com metaloproteases, já que houve redução da degradação quando o veneno foi pré-incubado. Além disso, o teste de coagulação mostrou que a heparina é capaz de retardar este processo, pois prolongou o tempo de formação do coágulo em 30 segundos utilizando o veneno pré-incubado com heparina comercial, e 50 s com a patenteada, encorajando novas pesquisas.