Aplicação da técnica de imunofluorescência direta para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina em aspirado de linfonodo

Abstract

Recentemente, foco de leishmaniose visceral canina (CVL) foi descrito na região noroeste do Estado de São Paulo - Brasil. O Hospital Veterinário - UNESP - Araçatuba, no ano de 2.000, desenvolveu 60 testes citopatológicos de casos suspeitos de leishmaniose usando aspirado por agulha fina (FNA). Os esfregaços de linfonodo foram corados pelo método de Romanowsky (Diff-Quik®) e observados em microscopia de luz. Os casos positivos mostraram formas amastigotas típicas de Leishmania livres ou em vacúolos de macrófagos. Sinais citopatológicos de reatividade do sistema linfo-histiocitário com ausência de parasitos foram também observados. Com o objetivo de implementar o diagnóstico da CVL, detectando parasitos e material antigênico nos esfregaços, aplicou-se a reação de imunofluorescência direta (IFD) usando anticorpo policlonal anti-Leishmania produzido em camundongo. Comparamos o método de IFD com a pesquisa direta do parasito em esfregaços corados pelo método de Romanowsky. Dos 60 cães com sinais clínicos da doença, o exame direto foi positivo em 50% (n=30), duvidoso em 36,7% (n=22) e negativo com reatividade do linfonodo em 13,3% (n=8). Quando os linfonodos foram submetidos a reação de IFD observamos reação positiva em 93,3% (n=56) e reação negativa em 6,7% (n=4). Nossos resultados mostraram que a reação de IFD apresentou alta sensibilidade quando comparada a pesquisa direta do parasito pela coloração de Romanowsky. A reação de IFD pode ser um método útil para confirmar os casos duvidosos da doença, onde as formas amastigotas não são identificadas com facilidade.

Recently, canine visceral leishmaniasis (CVL) was detected in the northwest of São Paulo State - Brazil. The Veterinary Hospital - UNESP - Araçatuba, in 2.000, carried out 60 cytopathological test of suspected cases of leishmaniasis using the fine-needle aspiration (FNA). The smears of the FNA popliteal lymph nodes were stained by the Romanowsky stain (Diff-Quik®) and observed using a light microscope. The positive cases showed typical amastigotes forms of Leishmania either free or in macrophage vacuoles. Cytopathological signs of reactivity of the lymph-hystiocitary system with the absence of parasites were also detected. In order to improve the diagnosis of CVL, looking for parasites and antigenic material detection in smears, we standardized the direct immunofluorescence assay (IFD) using mouse anti-Leishmania policlonal antibodies. We compared the IFD assay with the direct search of parasites in smears stained by Romanowsky stain. From the 60 dogs with clinical signs of the disease, the direct exam was positive in 50% (n=30), uncertain in 36,7% (n=22) and negative with lymph node reativity in 13,3% (n=8). When the lymph node smears were submitted to IFD assay we observed positive reaction in 93,3% (n=56) and negative reaction in 6,7% (n=4). Our results showed that IFD assay presented a high sensibility compared to parasite direct search by Romanowsky stain. The IFD assay could be useful method to confirm the uncertain cases of the disease, where amastigotes forms were not clearly identified.