Estudo do efeito de compostos naturais bioativos no metabolismo lipídico de células Huh-7.5 e sua interação com o ciclo de replicação do vírus da hepatite C em células expressando o SGR-JFH1

Abstract

A hepatite C é uma doença inflamatória crônica, causada pelo vírus da hepatite C (HCV), que constitui um grave problema de saúde pública, pois acomete milhares de pessoas no mundo todo, podendo evoluir para cirrose hepática ou carcinoma hepatocelular. Os tratamentos atualmente disponíveis podem não ser eficientes para todos os genótipos ou situação clínica associada ao grau de fibrose hepática, e podem induzir importantes efeitos colaterais. Neste contexto, a análise de compostos naturais bioativos (CNBs) representa uma via importante para complementar os tratamentos já estabelecidos, potencializando os resultados terapêuticos. O objetivo deste estudo foi caracterizar as etapas finais da biossíntese do HCV, concomitante ao metabolismo lipídico celular associado à formação e secreção das lipopartículas virais, e, analisar os mecanismos moleculares em culturas celulares, quando submetidas a diferentes tratamentos com os CNBs: curcumina, piperina, naringenina e nobiletina. Estes CNBs foram avaliados quanto a diversos efeitos sobre células infectadas ou não com o HCV, por meio de ensaios de viabilidade celular, atividade enzimática por fluorescência, apoptose pela avaliação da ligação de anexina V por citometria de fluxo e determinação de níveis de expressão de proteínas por western blotting. Os resultados demonstraram efeito de inibição da replicação ou liberação da partícula viral em diferentes condições de tratamento, indução de apoptose nas células infectadas com o HCV, discreta inibição da atividade de MTTP (principalmente nas células não-infectadas), e diferentes padrões de inibição ou estimulação da expressão de proteínas, indicando que os tratamentos podem atuar sobre vias diferentes de sinalização celular. A análise do desempenho dos CNBs, considerando a inibição da carga viral, a indução da apoptose e a inibição da enzima MTTP, indicou que a combinação CL/PP teve melhor performance dentre os compostos testados. Desta forma, os CNBs estudados apresentaram efeitos potencialmente vantajosos para utilização como terapia complementar ao tratamento alopático da hepatite C.

Hepatitis C is a chronic inflammatory disease caused by hepatitis C virus (HCV). It constitutes a serious public health issue, affecting millions of people worldwide, and it can progress to liver cirrhosis or hepatocellular carcinoma. The available treatment regimen might not be efficient to all genotypes or clinical status associated to the degree of hepatic fibrosis, and it can induce the development of important collateral effects. In this context, the analysis of natural bioactive compounds (NBCs) represents an important pathway to supplement the already established treatments, enhancing the therapeutic outcome. The aim of this study was to characterize the final stages of HCV biosynthesis, concomitant with the cellular lipid metabolism, associated with the formation and secretion of viral lipoviral particles, and analyze molecular mechanisms in cell cultures, when submitted to different treatments with the NBCs: curcumin, piperine, naringenin, and nobiletin. These NBCs were evaluated based on distinct effects on infected with HCV or non-infected cells, through viability assays, fluorescence enzymatic activity, apoptosis analysis through the evaluation of annexin V binding by flow cytometry, and protein expression level detection by western blotting. The results demonstrate inhibition of replication or release of the viral particle under different treatment conditions, induction of apoptosis on HCV infected cells, discrete inhibition of MTTP activity (mainly on non-infected cells), and different patterns of inhibition or stimulation of protein expression, indicating that the treatments act over different cell signaling pathways. Considering the results of viral load inhibition, apoptosis induction and MTTP enzyme inhibition, the NBCs performance analysis indicated that the combination CL/PP achieved the best results amongst the tested compounds. Therefore, the studied NBCs presented effects potentially advantageous to be applied as complementary therapy to the allopathic treatment of hepatitis C infection.