Efeitos dos antagonistas de receptores CB1 e CB2 nas células tronco mesenquimais caninas estimuladas com extrato rico em canabidiol

Abstract

As células-tronco mesenquimais (MSCs) possuem um potencial significativo para o tratamento de distúrbios neuroinflamatórios e degenerativos, sendo sua eficácia clínica amplamente impulsionada por mecanismos parácrinos e pela sinalização através do sistema endocanabinoide (ECS) e sua rede lipídica expandida, o endocanabinoma. Este estudo teve como objetivo avaliar como um extrato rico em canabidiol (CBD) modula os resultados do antagonismo seletivo dos receptores CB1 e CB2 em células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo canino (cAT-MSCs). As células foram condicionadas por 24 horas com um extrato rico em CBD (3 µM) isoladamente ou em combinação com antagonistas de CB1 (AM251) e CB2 (AM630) (1 µM). A morfologia celular, a viabilidade e a cicatrização de feridas foram avaliadas, juntamente com análises de RT-qPCR de citocinas inflamatórias, fatores neurotróficos e enzimas do ECS. O condicionamento experimental mostrou-se seguro, preservando plenamente a integridade celular, altas taxas de viabilidade e a capacidade migratória funcional em todos os grupos. Enquanto o bloqueio isolado de receptores induziu ampla desregulação transcriptômica e aumentou mediadores inflamatórios, o extrato rico em CBD isoladamente exerceu um efeito trófico seletivo, aumentando significativamente a expressão de GDNF, HGF e DAGLB. Em especial, a coadministração do extrato durante o antagonismo de CB1 atenuou significativamente a expressão de PTGES2, IDO, BDNF, FAAH e MGLL. Sob bloqueio de CB2, o extrato aumentou seletivamente IL-10 e reduziu os níveis de NOS2. Além disso, o fitocomplexo neutralizou com sucesso a desregulação da biossíntese endocanabinoide (NAPEPLD, DAGLA) independentemente das vias clássicas dos receptores. Em resumo, o pré-condicionamento de cAT-MSCs com um extrato rico em CBD potencializa de forma segura o seu perfil regenerativo. Esta estratégia de licenciamento farmacológico direciona as células para um fenótipo altamente terapêutico, preservando a competência fisiológica intrínseca, e impulsiona futuras pesquisas sobre a modulação do ECS para maximizar a eficácia terapêutica.

Mesenchymal stem cells (MSCs) hold significant potential for treating neuroinflammatory and degenerative disorders, with their clinical efficacy largely driven by paracrine mechanisms and signaling through the endocannabinoid system (ECS) and its expanded lipid network, the endocannabinoidome (eCBome). This study aimed to evaluate the effects of a cannabidiol (CBD)-rich extract on selective CB1 and CB2 receptor antagonism in canine adipose-derived MSCs (cAT-MSCs). Cells were primed for 24 h with a CBD-rich extract (3 µM) alone or in combination with CB1 (AM251) and CB2 (AM630) antagonists (1 µM). Cellular morphology, viability, and wound healing were assessed, along with RT-qPCR evaluations of inflammatory cytokines, neurotrophic factors, and ECS enzymes. Experimental priming was deemed safe, fully preserving cellular integrity, high viability rates, and functional migratory capacity across all groups. While isolated receptor blockade induced broad transcriptomic dysregulation and upregulated inflammatory mediators, the CBD-rich extract alone exerted a selective trophic effect, significantly upregulating GDNF, HGF, and DAGLB. Crucially, co-administration of the extract during CB1 antagonism significantly attenuated the expression of PTGES2, IDO, BDNF, FAAH, and MGLL. Under CB2 blockade, the extract selectively increased IL-10 levels and reduced NOS2 levels. Furthermore, the phytocomplex successfully buffered the dysregulation of endocannabinoid biosynthesis (NAPEPLD, DAGLA) independently of classical receptor pathways. In summary, priming cAT-MSCs with a CBD-rich extract safely potentiated their regenerative profile. This pharmacological manipulation licensing cells while preserving intrinsic physiological competence, driving future research on ECS modulation to maximize its therapeutic efficacy.