Estudo in vitro da ação de metabólitos secundários do extrato aquoso de Phyllanthus niruri L. e de seus produtos de degradação

Abstract

Phyllanthus niruri L. (Euphorbiaceae) é uma espécie vegetal conhecida popularmente no Brasil como quebra-pedra. Muito importante na flora brasileira por ser considerada uma planta medicinal relevante no tratamento de doenças renais e hepáticas. Ensaios farmacológicos in vitro, em animais e clínicos demonstraram a ação do seu extrato aquoso na prevenção da formação de cálculos renais de oxalato de cálcio. Apesar desta ação estar bem documentada na literatura e da química de metabolismo secundário da espécie ser bastante conhecida, até o momento não foi possível concluir quais substâncias presentes no extrato aquoso de partes aéreas são responsáveis por tal efeito. Portanto, o objetivo desse trabalho foi identificar as substâncias químicas presentes no extrato aquoso de partes aéreas de P. niruri com ação na formação de cristais de oxalato de cálcio, a fim de determinar os marcadores químicos para a droga vegetal, extrato aquoso e fitoterápico à base da espécie. O extrato aquoso foi produzido a partir de 282,21 g da droga vegetal e o rendimento da extração foi de 15,8% (m/m). Foi realizada uma extração em fase sólida (EFS) com o extrato aquoso de partes aéreas de P. niruri, resultando em 14 frações, concentradas em taninos e flavonoides. Através das análises por UPLC-QToF-MS/MS e UPLC-PDA foram identificadas 18 substâncias no extrato de partes aéreas de P. niruri sendo 4 com o uso de padrões (ácido gálico, corilagina, ácido elágico e quercetina-o-ramnosídeo) e 14 tentativamente com base nos espectros de massas e UV. O extrato aquoso de P. niruri sofreu degradação em fluído gástrico simulado (FGS), conforme demonstrado pelas análises por HPLC-PDA, e UPLC-QToF-MS/MS. Os resultados da ação sobre a cristalização de oxalato de cálcio mostram que as frações F4, F5, F8, F9, F10, F11 e F12 se destacaram em relação as outras frações testadas, com diferença significativa no que se refere ao número de cristais e a área média deles. Esses resultados combinados com os resultados obtidos por HPLC-UV apontam para os flavonoides como umas das classes de metabólitos secundários responsáveis por essa ação sobre a cristalização de oxalato de cálcio.

Phyllanthus niruri L. (Euphorbiaceae) is a plant species popularly known in Brazil as a stone breaker. Very important in the Brazilian flora because it is considered a medicinal plant relevant in the treatment of renal and hepatic diseases. In vitro, in animal and clinical pharmacological studies have demonstrated the action of its aqueous extract in preventing the formation of renal calcium oxalate stones. Although this action is well documented in the literature and the secondary metabolism chemistry of the species is well known, to date it has not been possible to conclude which substances present in the aqueous extract of aerial parts are responsible for such an effect. Therefore, the objective of this work was to identify the chemical substances present in the aqueous extract of aerial parts of P. niruri with action in the formation of calcium oxalate crystals, in order to determine the chemical markers for the vegetal drug, aqueous extract and phytotherapic basis of the species. The aqueous extract was produced from 282.21 g of the plant drug and extraction yield was 15.8% (m/m) taking into account the loss by desiccation of the extract (10.8% m/m). A solid phase extraction (EFS) was performed with the aqueous extract of aerial parts of P. niruri, resulting in 14 fractions, concentrated in tannins and flavonoids. InUPLC-QToF-MS / MS and UPLC-PDA analyzes, 18 substances were identified in the extract of aerial parts of P. niruri, 4 with the use of standards (gallic acid, corilagine, ellagic acid and quercetin-O-rhamnoside) and 14 tentatively based on mass and UV spectra. The aqueous extract of P. niruri underwent degradation in simulated gastric fluid (FGS), as demonstrated by HPLC-PDA, and UPLC-QToF-MS / MS analysis. The results of the action on the crystallization of calcium oxalate show that the fractions F4, F5, F8, F9, F10, F11 and F12 stood out in relation to the other fractions tested, with significant difference in the number of crystals and their average area. These results combined with the results obtained by HPLC-UV point to the flavonoids as one of the classes of secondary metabolites responsible for this action on the crystallization of calcium oxalate.