Estudos in vitro de citotoxicidade, interação farmacológica e atividade intramacrofágica de compostos benzofuroxanos

Abstract

O Mycobacterium tuberculosis (M. tb) é o agente etiológico da segunda doença infecciosa mais mortal do mundo atualmente, a tuberculose (TB), perdendo apenas para a COVID-19 nos últimos 2 anos. O tratamento da doença é considerado longo, totalizando 6 meses de terapia, o que dificulta a adesão do paciente. Como forma de resistência, o M. tb é capaz de sobreviver e se multiplicar dentro de macrófagos, método de escape do sistema imunológico, fator importante para sua patogenicidade. Os compostos avaliados são da classe dos benzofuroxanos, e foram determinadas a concentração inibitória mínima (CIM90) frente ao M. tb e a citotoxicidade (IC50) frente macrófagos murinos (J774A.1) das 19 novas moléculas, por onde se determinou o primeiro corte dos compostos que seriam avaliados quanto à atividade intramacrofágica, sendo eles: TB 04, TB 05, TB 10, TB 11, TB 13, TB 14, TB 16, TB 18, TB 19, TB 20, e TB 29, respeitando-se valores de CIM90 < 5 uM e IC50 > 100. Todos os compostos apresentaram atividade intracelular superior aos atuais fármacos da terapia, com valores de inibição intramacrofágica que chegaram até 3,0 log10. Ao avaliar os resultados dos 3 experimentos em conjunto, o TB 10 e o TB 13 se destacaram dos demais e foram selecionados para realização do teste de atividade combinatória com a rifampicina, ambos apresentando efeito sinérgico. Por apresentar segurança in vitro, valor de CIM significativamente baixo, atividade intramacrofágica satisfatória, efeito sinérgico com a rifampicina, além de apresentar atividade frente a isolados clínicos resistentes e estreito espectro de ação, o TB 10 foi o composto selecionado para as próximas etapas de estudo.

Mycobacterium tuberculosis (M. tb) is the etiologic agent of the second deadliest infectious disease in the world today, tuberculosis (TB), prolonged only for the disease COVID-19 in the last 2 years. The disease treatment is considered long, totaling 6 months of therapy, which makes the patient's adherence a difficult process. As a form of resistance, M. tb can survive and multiply within macrophages, an escape method for the immune system, an important factor for its pathogenicity. The compounds belong to the benzofuroxane class, it was evaluated the minimum inhibitory concentration (MIC90) against M. tb and the cytotoxicity (IC50) against murine macrophages (J774A.1) of the 19 benzofuroxans and the first cut of for compounds that will undergo intramacrophagic analisys is determined, being them the first: TB4, TB 05, TB 10, TB11, TB 14, TB 16, TB 18, TB 19, TB 20 , and TB 29 respecting results of MIC < 5 uM and IC50 > 100. The intracellular activities of all compounds were superior to the therapy drugs, with intramacrophage values up to 3.0 log10. When evaluating the results of the 3 experiments together, TB 10 and TB 13 were selected from the others and were selected to perform the activity test with a rifampicin, showing a synergic effect. Due to its in vitro safety, significantly low MIC value, satisfactory intramacrophagic activity, synergistic effect with rifampicin, in addition to having activity against resistant clinical isolates and a narrow spectrum of action, TB 10 was the compound selected for the next stages of the study.