Investigação do tratamento com melatonina em células de câncer de ovário: avaliação dos filamentos de actina por fluorescência

Abstract

O câncer de ovário (CO) é a quinta maior causa de mortes por câncer entre as mulheres e a neoplasia ginecológica mais letal, dado sua detecção tardia, recorrência e metástase. Recentemente tem sido demonstrado que a melatonina, um hormônio secretado pela glândula pineal e pelas mitocôndrias das células, incluindo as células do CO, pode atuar como uma potencial terapia contra o câncer devido às suas funções antioxidantes, imunomodulatórias, antiangiogênicas e pró-apoptóticas em modelos in vitro e in vivo. Portanto, o objetivo do presente estudo é investigar as concentrações de melatonina sobre a inibição do crescimento celular em duas linhagens de células de câncer de ovário (SKOV-3 e OVCAR-3) e quantificar e qualificar os filamentos de actina dessas células por fluorescência. Para isso, foram conduzidos estudos in vitro para caracterização dos ensaios de MTT, a fim de avaliar a melhor concentração capaz de inibir o crescimento em 50% (IC₅₀) das células tumorais, utilizando diferentes concentrações e períodos de exposição com melatonina, padronização do protocolo para investigação dos filamentos de actina por fluorescência e, finalmente, avaliação quantitativa e qualitativa desses filamentos após os tratamentos. Os níveis de melatonina também foram quantificados, considerando que sua concentração costuma estar reduzida em determinadas células tumorais. Por meio dessas análises, buscou-se avaliar o potencial terapêutico da melatonina na inibição do crescimento das células de câncer de ovário e na modulação da organização dos filamentos de actina. Os resultados demonstraram que a melatonina promove uma redução concentração-dependente na viabilidade das linhagens OVCAR-3 e SKOV-3, com valores de IC₅₀ de 5,47 mM e 6,42 mM, respectivamente. O ensaio de ELISA indicou um aumento significativo dos níveis intracelulares de melatonina após 24 horas de exposição a 3 mM. A microscopia de fluorescência evidenciou desorganização progressiva dos filamentos de actina e alterações morfológicas associadas à retração celular, perda de adesão e possível indução de morte celular. Assim, conclui-se que a melatonina exerce um efeito citotóxico e pró-apoptótico nas células de câncer de ovário, reforçando seu potencial como agente antitumoral promissor e destacando sua relevância para o desenvolvimento de terapias complementares contra o câncer de ovário.

Ovarian cancer (OC) is the fifth leading cause of cancer-related deaths among women and the most lethal gynecological malignancy, due to its late detection, recurrence, and metastasis. Recently, it has been demonstrated that melatonin, a hormone secreted by the pineal gland and by the mitochondria of cells, including OC cells, may act as a potential anticancer therapy due to its antioxidant, immunomodulatory, antiangiogenic, and pro-apoptotic properties in in vitro and in vivo models. Therefore, the present study aims to investigate the effects of different melatonin concentrations on the inhibition of cell growth in two OC cell lines (SKOV-3 and OVCAR-3) and to quantify and characterize the actin filaments of these cells by fluorescence microscopy. For this purpose, in vitro studies were conducted to characterize MTT assays in order to determine the concentration capable of inhibiting 50% of tumor cell growth (IC₅₀), using different melatonin concentrations and exposure times, standardizing the protocol for actin filament investigation by fluorescence, and finally performing quantitative and qualitative evaluation of actin filaments after treatment. Melatonin levels were also quantified, considering that its concentration is often reduced in certain tumor cells. Through these analyses, the study sought to evaluate the therapeutic potential of melatonin in inhibiting OC cell growth and modulating actin filament organization. The results demonstrated that melatonin promotes a concentration-dependent reduction in the viability of OVCAR-3 and SKOV-3 cell lines, with IC₅₀ values of 5.47 mM and 6.42 mM, respectively. The ELISA assay indicated a significant increase in intracellular melatonin levels after 24 hours of exposure to 3 mM. Fluorescence microscopy revealed progressive disorganization of actin filaments and morphological alterations associated with cell retraction, loss of adhesion, and possible induction of cell death. Thus, we concluded that melatonin exerts cytotoxic and pro-apoptotic effects on OC cells, reinforcing its potential as a promising antitumor agent and highlighting its relevance for the development of complementary therapies against OC.