Atividade antibacteriana de Galatos de Alquila acetilados sobre Xanthomonas citri subsp. citri

Abstract

O agente etiológico do cancro cítrico, Xanthomonas citri subsp. citri (X.citri), infecta todas as variedades de citros de interesse econômico ao redor do mundo. Sem controle químico eficaz, a única forma aconselhada de se evitar a propagação da doença é a erradicação de plantas. Essa prática, porém, não é aceita pelos citricultores e demanda grandes investimentos em inspeção de pomares por pessoal treinado no reconhecimento da doença. Nos últimos anos, a legislação para controle do cancro cítrico tem sofrido afrouxamentos que resultaram em um progressivo aumento da doença no maior produtor mundial de laranja, o estado de São Paulo. Esta pesquisa teve como objetivo estender um projeto que vem sendo realizado em nosso grupo que é o desenvolvimento de substâncias inibidoras de crescimento de X. citri (galatos de alquila). No presente trabalho, quatro novas moléculas, originadas a partir de galatos de alquila – galatos de alquila acetilados – demonstraram inibir o crescimento de X.citri de modo similar ao da canamicina (controle positivo), observado pelo ensaio Resazurin Microtiter Assay Plate (REMA). Em observações com microscopia de fluorescência e utilizando-se uma linhagem de X.citri com septo marcado, a localização da proteína GFP-ZapA foi rapidamente perturbada após o tratamento, sugerindo que as substâncias poderiam ter a maquinaria de divisão celular como alvo. Entretanto, em ensaios bioquímicos com FtsZ purificada de X. citri na presença dos galatos de alquila acetilados, verificou-se que essas drogas têm pouca ou nenhuma ação na sedimentação e na inibição da atividade GTPásica de FtsZ, e provavelmente atuem dissipando o potencial de membrana.

Xanthomonas citri subsp. citri (X.citri) is the etiological agent of citrus canker, a disease that affects all the varieties of citrus of economic importance around the world. Currently, eradication of infected trees constitutes the only effective practice to control the spread of X. citri. This disease has enormous social and economic impact in the orange juice production industry, especially concerning the difficulties to inspect plantations and to persuade growers to eliminate foci of the disease. Regarding this, recent relaxations in the policies of eradication within the state of São Paulo, the main orange producer in the world, indicate that citrus canker may become endemic in this area. The current proposal aims to extend the work that is being done in our research group, developing inhibitors of X. citri growth (alkyl gallates). In this study, four new molecules originated from alkyl gallates – acetylated alkyl gallates – were able to inhibit the X.citri growth, similarly to kanamycin (positive control), assessed by Resazurin Microtiter Plate Assay (REMA). In fluorescent microscopy assay, using a mutant strain of X. citri labeled with green fluorescent protein (GFP) in ZapA, the drugs were able to disrupt the location of septa, suggesting that the substances may have the cell division machinery as a target. However, in biochemical assays using FtsZ purified from X. citri in the presence of the drugs, the drugs showed low or no effect on the sedimentation or GTPase activity of FtsZ. Instead of this, they showed reasonable effect on membrane permeability and probably these drugs acts by dissipating the membrane potential.