Ocorrência, variabilidade toxigênica e ribotipos de Clostridioides difficile isolados em amostras de fezes de potros

Abstract

A bactéria Clostridioides difficile é um dos principais agentes etiológicos responsáveis por doenças gastrointestinais em humanos e animais. A importância deste microorganismo em potros é bem reconhecida, mas no Brasil os dados são escassos. O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência, os perfis toxigênicos e a diversidade de ribotipos de C. difficile isolados longitudinalmente de fezes de potros. Foram coletadas amostras fecais de 102 potros aos 7, 30 e 60 dias de idade, provenientes de dez propriedades rurais, e foram submetidas a isolamento bacteriano pelo cultivo em condições de anaerobiose (10% CO2, 5% H2 e 85% N2). As colônias com as características morfológicas da espécie (vidro fosco, halo amarelo, planas, cheiro de para-cresol), foram submetidas à extração de DNA e à PCR para detecção do gene 16S RNA como método de triagem. E em casos positivos, as amostras foram submetidas a multiplex PCR para detecção dos genes tcdA, tcdB, cdtA e cdtB, e ribotipadas. A prevalência geral foi de 17,9% (55/306), diminuindo significativamente com a idade, com potros aos 7 dias apresentando maiores taxas de isolamento de C. difficile em comparação com aqueles aos 60 dias (OR = 21,3; p < 0,05). Nenhuma associação estatística foi encontrada entre o isolamento bacteriano e as variáveis epidemilógicas. Foram identificados sete ribotipos (010, RT 009, 126, AI-60, 066/2, 557, 078/4), com perfis recém-descritos no Brasil. Potros são fonte de cepas toxigênicas, e os ribotipos RT 078 e RT 126, são associadas à infecção por C. difficile adquirida na comunidade e cepas hipervirulentas em humanos. Esses achados ampliam a compreensão da epidemiologia de C. difficile em cavalos jovens e reforçam a necessidade de vigilância contínua de linhagens toxigênicas emergentes.

Clostridioides difficile is one of the main etiological agents responsible for gastrointestinal diseases in humans and animals. The importance of this microorganism in foals is well recognized; however, data from Brazil remain scarce. The aim of this study was to evaluate the occurrence, toxigenic profiles, and ribotype diversity of C. difficile isolated longitudinally from foal feces. Fecal samples were collected from 102 foals at 7, 30, and 60 days of age, originating from ten farms, and were subjected to bacterial isolation by culture under anaerobic conditions (10% CO₂, 5% H₂, and 85% N₂). Colonies presenting morphological characteristics consistent with the species (ground-glass appearance, yellowish halo, flat morphology, and p-cresol odor) were subjected to DNA extraction and PCR targeting the 16S rRNA gene as a screening method. Positive samples were subsequently analyzed by multiplex PCR for the detection of the tcdA, tcdB, cdtA, and cdtB genes and were further characterized by ribotyping. The overall prevalence was 17.9% (55/306), decreasing significantly with age, with foals at 7 days showing higher isolation rates compared to those at 60 days (OR = 21.3; p < 0.05). No statistically significant association was found between bacterial isolation and the evaluated epidemiological variables. Seven ribotypes were identified (010, RT 009, 126, AI-60, 066/2, 557, 078/4), including profiles recently described in Brazil. Foals represent a source of toxigenic strains, and ribotypes RT 078 and RT 126 are associated with community-acquired C. difficile infection and hypervirulent strains in humans. These findings expand the understanding of the epidemiology of C. difficile in young horses and reinforce the need for continuous surveillance of emerging toxigenic lineages