Terapia cell free como abordagem terapêutica da Doença do Olho Seco

Abstract

O meio condicionado (MC) é o secretoma das células-tronco durante o processo de cultura celular, sendo um meio com fatores de crescimento, citocinas e moléculas sinalizadoras livres e vesículas extracelulares, que progressivamente se tornam relevante, tanto para diagnóstico como para terapêutica. Neste campo, identificamos a Doença do Olho Seco (DOS) que impacta profundamente a qualidade de vida das pessoas, cujo tratamento consiste no uso de colírios. O Laboratório de Biologia Celular tem desenvolvido como produto para esses pacientes o autocolírio de soro de sangue, porém existem pacientes com impossibilidade de acesso venoso, ou com sorologias reagentes para doenças infecciosas que são impedidos de utilizar o produto. Também, tendo em vista uma produção sem a necessidade de doador para a produção do tratamento, o projeto teve como objetivo a produção de meios condicionados de células-tronco de diferentes origens, como de cordão umbilical (CTMcup), polpa dentária (CTMPD), tecido adiposo (CTMTA) e límbica (CTL). As células-tronco foram cultivadas em meio DMEM F-12 aditivado e com 10% de soro fetal bovino para caracterização imunofenotípica por citometria de fluxo com marcadores específicos. As células foram cultivadas até atingirem 70% de confluência, momento em que sofreram wash out, uma etapa de lavagem para a retirada do soro fetal bovino (SFB) e receberam o meio DMEM F-12 aditivado xeno free por 48 horas. Após esse período, o secretoma foi coletado, centrifugado e armazenado para posterior uso. Os meios condicionados foram caracterizados utilizando kit Multiplex que permite análise simultânea de vários biomarcadores de citocinas e quimiocinas. Os fatores dosados foram EGF, Eotaxin/ CCL11, IL-1α, IL-1β, IL-1RA, IL-2, IL-6, IL- 8/ CXCL8, IL9, FGF-2/ FGF-basic, IFNα, VEGF, IFNγ, MCP-1/ CCL2 e TNFα. Após a caracterização, pode-se considerar os resultados dos marcadores IFNY, IL2, IL-8 e VEGF. Enquanto o restante, deverá ser reavaliado, mas acredita-se que o MC tenha potencial para tratamento da DOS pelas células produzirem fatores de crescimento e citocinas que estimulam a regeneração de diferentes tecidos.

Conditioned medium (CM) is the secretome of stem cells during the cell culture process, being a medium with growth factors, cytokines and free signaling molecules and extracellular vesicles, which progressively become relevant, both for diagnosis and therapy. In this field, we identify Dry Eye Disease that has a profound impact on people's quality of life, the treatment of which consists of the use of eye drops. The Cellular Biology Laboratory has developed blood serum self-eye drops as a product for these patients, however there are patients who cannot have venous access, or with reactive serologies for infectious diseases who are prevented from using the product. Also, with a view to production without the need for a donor to produce the treatment, the project aimed to produce conditioned media from stem cells of different origins, such as from umbilical cord), dental sparing, adipose tissue and limbic tissue. The stem cells were cultivated in DMEM F-12 supplemented medium with 10% fetal bovine serum for immunophenotypic characterization by flow cytometry with specific markers. The cells were cultivated until they reached 70% confluence, at which point they underwent wash out, a washing step to remove fetal bovine serum (FBS) and received DMEM F-12 medium with xeno free additives for 48 hours. After this period, the secretome was collected, centrifuged and stored for later use. The conditioned media were characterized using a Multiplex kit that allows simultaneous analysis of several cytokine and chemokine biomarkers. The factors measured were EGF, Eotaxin/ CCL11, IL-1α, IL-1β, IL-1RA, IL-2, IL-6, IL-8/ CXCL8, IL9, FGF-2/ FGF-basic, IFNα, VEGF, IFNγ, MCP-1/CCL2 and TNFα. After characterization, the results of the IFNY, IL2, IL-8 and VEGF markers can be considered. While the rest must be reevaluated, but it is believed that CM has a potencial to treat DOS because cells produce growth factors and cytokines thate stimulate the regeneration of fifferent tissues