Efeito de compostos naturais bioativos sobre o metabolismo lipídico e a produção de estresse oxidativo durante a replicação do vírus da hepatite C em cultura celular – VHCcc

Abstract

Introdução: As complicações relacionadas à cronicidade de hepatite C estão associadas com o aumento do estresse oxidativo promovido pelo Vírus da Hepatite C (VHC), que causa danos ao DNA, alterações na peroxidação lipídica e está associadada a morte celular. O resvetrarol (RVT) apresenta ampla ação antioxidante, e potencial de síntese de derivados. O f-resveratrol, derivado RVT com a adição de uma molécula de fluor apresenta atividade antioxidante promissora. A taurina (TAU) destaca-se pala ação que desempenha na estabilidade da membrama plasmatica, a reprodução, a imunidade. Objetivo: Avaliar o efeito do RVT, do F-RVT e da TAU sobre o perfil de morte celular e a replicação do VHC. Métodos: Trabalho desenvolvido utilizando células Huh-7.5 e células Huh-7.5 expressando estavelmente o replicon subgenômico SGR-JFH1. Os CNBs analisados foram o RVT, F-RVT e TAU. A viabilidade células foi analisada por meio do ensaio colorimétrico de MTT. O mecanismo de apoptose e necrose foi analizado por citometria de fluxo. A quantificação de RNA do VHC, nas células SGR-JFH1 sem tratamento e pós-tratamento, foi realizada por ensaio de PCR em tempo real. Aplicou-se o modelo de análise de variância. Foi aplicado d.m.s. do teste de Tukey a nível de 5% de probabilidade. Resultados: O controle positivo (H2O2) apresentou expressiva citotoxicidade, morte celular de aproximadamente 80% nas células SGR-JFH1 e de 95% nas células Huh-7.5. Os compostos apresentaram tendência de indução de apoptose precoce pelos tratamentos com os CNBs nas células Huh-7.5 e nas SGR-JFH1 para as concentrações testadas. Houve ausência de influencia dos tratamentos com os CNBs sob o padrão de necrose das células Huh-7.5 e nas SGR-JFH1 para as concentrações testadas. Verificou-se ainda redução da carga viral intracelular como efeitos dos tratamentos com RVT, F-RVT e TAU em 1 dia em tratamentos. Conclusão: Os compostos estudados apresentaram efeito sobre a indução de apoptose precoce e sobre a redução da carga viral intracelular do VHC.

Introduction: Complications related to the chronicity of hepatitis C are associated with increased oxidative stress promoted by the Hepatitis C Virus (HCV), which causes DNA damage, changes in lipid peroxidation and is associated with cell death. Resvetrarol (RVT) has a broad antioxidant action and derivatives synthesis potential. The f-resveratrol derivative RVT with the addition of a fluoride molecule presents promising antioxidant activity. Taurine (TAU) stands out for the action it plays on the stability of the plasma membrane, reproduction, immunity. Objective: To evaluate the effect of RVT, F-RVT and TAU on cell death profile and HCV replication. Methods: The study was developed using Huh-7.5 cells and Huh-7.5 cells expressing the SGR-JFH1 subgenomic replicon. The viability analysis of the cells was analyzed by means of the MTT colorimetric assay. Apoptosis and necrosis mechanism analysis was performed by flow cytometry. The quantification of HCV RNA was performed in SGR-JFH1 cells without treatment and after treatment. The variance analysis model was applied. The contrast between means was done by the d.m.s. of the Tukey test at 5% probability level. Results: The positive control (H2O2) presented expressive cytotoxicity, cellular death approximately 80% in SGR-JFH1 cells and 95% in Huh-7.5 cells. The compounds presented the tendency to induction of early apoptosis by the treatments with NBCs in the Huh-7.5 cells and in the SGR-JFH1 for the concentrations tested. There was no influence of the treatments with the NBCs under the necrosis pattern in the Huh-7.5 cells and in the SGR-JFH1 for the concentrations tested. There was also a reduction of intracellular viral load as effects of treatments with RVT, F-RVT and TAU in 1 day in treatments and absence of influence on extracellular viral load in the same period. Conclusion: The compounds studied had an effect on the induction of apoptosis Precose in Huh-7.5 cells and SGR-JFH1 cells and on the reduction of intracellular viral load of HCV.