Efeito das lignanas extraídas da Piper cubeba em linhagens tumorigênicas de colo de útero

Abstract

O câncer de cérvice uterina é uma das principais neoplasias ginecológicas em todo o mundo, apresentando altas taxas de mortalidade. O seu tratamento inclui cirurgia, terapia por irradiação e quimioterapia, entretanto, estes métodos são altamente invasivos, podendo causar lesões estéticas irrecuperáveis, com um significativo comprometimento funcional. Em função disso, tratamentos fitoterápicos contra o câncer têm despertado interesse científico, e a Piper cubeba, utilizada no tratamento de diversas doenças e tumores em geral têm sido alvo de estudos devido às suas propriedades biológicas. Assim, o objetivo do trabalho foi investigar os efeitos das lignanas da Piper cubeba, além do extrato total das suas sementes em linhagens celulares tendo como controle positivo a podofilotoxina, observando seus efeitos e comparando o processo tumorigênico de cérvice uterina com células normais. As células tumorigênicas (SiHa e HeLa) e normais (HaCaT), tratadas com as lignanas, foram avaliadas nos ensaios de proliferação e citotoxicidade em tempos de 4, 24, 48 e 72 horas e concentrações de 10, 50 e 100 µg/ml, que permitiu a escolha de melhor tempo (24 horas) e concentração (100 µg/ml) para prosseguir com os ensaios de migração celular, genotoxicidade, apoptose e necrose celular e PCR quantitativa em tempo real. Observamos que as lignanas, com destaque especial para etilcubebina, hinoquinina e o extrato total da Piper cubeba atuaram sobre as linhagens HaCaT, HeLa e SiHa, influenciando positivamente no tratamento das linhagens de câncer de colo de útero sem afetar de forma agressiva as células normais. Sendo que, não alteraram a morfologia celular, diminuíram a proliferação, a migração e viabilidade, mostraram efeito genotóxico, induziram as células à morte por apoptose e interferem na cascata de genes relacionados a processos inflamatórios, diminuindo significativamente a expressão dos genes PTGEP3, PTGEP4, MMP2 e MMP9, e aumentando a expressão dos genes TIMP1 e TIMP2, indicando que as lignanas modulam a regulação desses genes. Mais estudos com a Piper cubeba são indispensáveis, dada sua imensa gama de propriedades biológicas, que são alvos potenciais para desenvolvimento de novos fármacos e terapias alternativas para o câncer.

Cancer of the uterine cervix is one of the leading gynecological neoplasms worldwide, with high mortality rates. Its treatment includes surgery, irradiation therapy and chemotherapy, however, these methods are highly invasive and can cause irrecoverable esthetic lesions with significant functional impairment. In function of this, herbal treatments against cancer have aroused scientific interest, and Piper cubeba, used in the treatment of various diseases and tumors in general have been studied because of their biological properties. The objective of this work was to investigate the effects of Piper cubeba lignans, in addition to the total extract of their seeds in cell lines with positive control of podophyllotoxin, observing its effects and comparing the tumorigenic process of uterine cervix with normal cells. Tumorigenic (SiHa and HeLa) and normal (HaCaT) cells, treated with the lignans were evaluated in the proliferation and cytotoxicity assays at times of 4, 24, 48 and 72 hours and concentrations of 10, 50 and 100 μg/ml, which allowed the choice of better time (24 hours) and concentration (100 μg / ml) to proceed with the cell migration, genotoxicity, apoptosis and cell necrosis and real-time quantitative PCR assays. We observed that lignans, with special emphasis on ethylcubebine, hinokinin which proved to be the most bioactive; and Piper cubeba total extract, acting on the HaCaT, HeLa and SiHa lines, positively influencing the treatment of cervical cancer cell lines without aggressively affecting normal cells. They did not alter cell morphology, decreased proliferation, migration and viability, showed genotoxic effect, induced the cells to apoptosis death and interfered in the cascade of genes related to inflammatory processes, significantly decreasing the expression of PTGEP3, PTGEP4, MMP2 and MMP9, and increasing the expression of the TIMP1 and TIMP2 genes, indicating that lignans modulate the regulation of these genes. Further studies with Piper cubeba are indispensable because of their immense range of biological properties that are potential targets for the development of new drugs and alternative therapies for cancer.