Efeito da adição de Trolox® e catalase ao meio glicina-gema-leite sobre o sêmen caprino refrigerado por 24 ou 48 horas em sistema Equitainer®

Abstract

Objetivou-se determinar in vitro o efeito da adição de antioxidantes Trolox® e Catalase ao diluidor Glicina-Gema-Leite com 5% de gema de ovo, utilizado na refrigeração do sêmen caprino em sistema de Equitainer® por 24 ou 48 horas, avaliando-se a motilidade espermática determinada no sistema computadorizado (CASA), a integridade de membrana plasmática pela combinação dos corantes fluorescente iodeto de propídio e diacetato de carboxifluoresceína (IP+DIC), patologia espermática em câmara úmida em solução de gluteraldeído e após a refrigeração ao teste de exaustão em banho-maria (37ºC até 240 minutos). Para isso foi utilizado o sêmen em duplicata (12 amostras) de 6 caprinos Boer, coletados com vagina artificial e diluído na concentração final de 400x106 espermatozóides/mL em meio Glicose-Leite (GL) e nos diluidores Glicina-Gema-Leite com (GGLtc) e sem (GGL) antioxidantes Trolox® e Catalase. As análises foram realizadas no sêmen fresco, após diluição (pré-refrigeração), 24 e 48 horas pós-refrigeração no sistema Equitainer®, e durante o teste de exaustão nos tempos 30, 60, 120 e 240 minutos de incubação em banho-maria. Foi demonstrado que o diluidor GGLtc demonstrou melhor eficiência na proteção de acrossomo entre os diluidores. A adição de antioxidante ao diluidor GGL com 5% de gema de ovo foi capaz de manter baixo percentual de acrossomo lesado durante a refrigeração de até 48 horas e o sistema Equitainer® eficiente durante a refrigeração até 48 horas

The objetive was to determine in vitro the effect of adding antioxidant Trolox® and Catalase in the extender Glycine-Yolk-Milk with 5% of egg yolk, used in the goat semen cooling in Equitainer® system for 24 or 48 hours, evaluating sperm motility determined by the computerized semen analysis (CASA), the integrity of the plasma membrane by a combination of fluorescent carboxyfluorescein diacetato(DIC) and propidium iodide(IP), sperm pathology in the humid chamber in gluteraldehyde solution and after cooling to the exhaustion test in a water bath (37°C up to 240 minutes). For the semen that was used in duplicate (12 samples) for six Boer goats, collected with artificial vagina and diluted at a final concentration of 400x106 sperm/mL using extenders Glucose-Milk (GL) and Glycine-Yolk-Milk (GGLtc) and without (GGL) antioxidant Trolox® and Catalase. Analyses were performed in fresh semen, after diluition (pre-cooling) and 24 or 48 hours post cooling in Equitainer® system, and during the exhaustion test incubation in a water bath for 30, 60, 120 and 240 minutes. It has been shown that the extender GGLtc showed better efficiency in protection acrossome between the extenders. The addition of antioxidant in the GGL with 5% egg yolk (GGLtc) was able to maintain a low percentage of damaged acrossome during cooling up to 48 hours and the Equitainer® system during the cooling efficiency up to 48 hours