Identificação de Candida spp. em pacientes usuários de próteses utilizando reação em cadeia de polimerase por polimorfismo no comprimento do fragmento de restrição

Abstract

A candidíase oral é uma infecção fúngica muito comum nos pacientes usuários de próteses removíveis, sendo conhecida também como estomatite protética, essa condição pode ocorrer por diferentes fatores, como a má higienização da prótese, usos contínuos da prótese por períodos prolongados, principalmente durante o sono, onde a boca permanece fechada por várias horas e isso propicia a proliferação bacteriana e fúngica, podendo levar a um quadro de sepse ou candidemia. A candidemia é uma infecção fúngica que atinge a corrente sanguínea, trazendo várias complicações para o hospedeiro, a sepse provoca uma reação exagerado do corpo, como febres altas, calafrios, arritmias, tonturas e até mesmo o óbito se não tratada, por isso a importância de um diagnóstico precoce e eficaz na identificação das espécies presentes no quadro infeccioso. O presente estudo busca testar a viabilidade de um método de identificação das espécies fúngicas pela técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e Polimorfismo de Comprimento de Fragmento de Restrição (RFLP), onde o DNA fúngico é amplificado, formando os amplicons, após essa etapa é feita a purificação das amostras com o QIAquick PCR Purification e os amplicons são clivados em regiões especificas utilizando a enzima Mspl do kit FastDigest Mspl, com isso, o material passa por mais um procedimento laboratorial, que é a eletroforese, onde o material genético corre por um gel de agarose 1% para assim poder diferenciar as espécies pela a diferença da formação das bandas no próprio gel. A identificação de algumas espécies de Candida spp. foram expressivas na conclusão da pesquisa, como a Candida glabrata e Candida tropicalis, porém, não foi possível a identificação das demais espécies com precisão.

Oral candidiasis is a very common fungal infection in patients who wear removable dentures, and is also known as denture stomatitis. This condition can occur due to different factors, such as poor hygiene of the denture, continuous use of the denture for prolonged periods, especially during sleep, when the mouth remains closed for several hours, which encourages bacterial and fungal proliferation, which can lead to sepsis or candidemia. Candidemia is a fungal infection that reaches the bloodstream, causing several complications for the host. Sepsis causes an exaggerated reaction of the body, such as high fevers, chills, arrhythmias, dizziness, and even death if left untreated. This is why early and effective diagnosis is so important in identifying the species present in the infectious condition. This study aims to test the viability of a method for identifying fungal species using the Polymerase Chain Reaction (PCR) and Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) techniques, where fungal DNA is amplified, forming amplicons. After this step, the samples are purified using QIAquick PCR Purification and the amplicons are cleaved in specific regions using the Mspl enzyme from the FastDigest Mspl kit. The material then undergoes another laboratory procedure, electrophoresis, where the genetic material runs through a 1% agarose gel to differentiate the species based on the difference in band formation on the gel itself. The identification of some Candida spp. species was significant in the conclusion of the research, such as Candida glabrata and Candida tropicalis. However, it was not possible to identify the other species accurately.