Dinâmica dos fatores angiogênicos em corpos lúteos de cadelas gestantes e pseudogestantes

Abstract

O objetivo desse estudo é obter conhecimentos mais profundos sobre os mecanismos regulatórios da manutenção e principalmente do término da função lútea em cadelas gestantes e não gestantes. O perfil de P4 é muito semelhante em cadelas gestantes e não gestantes, porém começa a divergir aproximadamente no dia 60 da fase lútea. Nesse momento, evidencia-se um declínio abrupto de P4 nas cadelas gestantes, sinalizando a luteólise pré-parto,com aumento da PGF2α e grande atividade apoptótica no interior do corpo lúteo (CL). Diferente do mecanismo de cadelas não gestantes, em que a regressão lútea é passiva e pré-programada. No presente trabalho foi validada a expressão dos seguintes fatores angiogênicos - VEGFA, IGFBP5, Endotelina, THBS2 e TGFB1 em CLs de cadelas cíclicas e gestantes. Para tal, foi realizado o acompanhamento do ciclo estral de fêmeas em diestro cíclico (n=20) e as fêmeas do grupo gestante foram inseminadas artificialmente (n=20). Todas as fêmeas foram submetidas a ovariohisterectomia (OSH) nos dias 10, 20, 40 e 60 após a onda pré-ovulatória de LH. Os CLs coletados foram submetidos às técnicas de qRT-PCR e imunofluorescência. Para análise estatística, aplicou-se o teste t de student, sendo os dados analisados pelo programa GraphPadPrism 6 e considerado significativo quando p<0,05. Os resultados mostraram que os fatores angiogênicos selecionados foram diferencialmente expressos nos dias 40 e 60, especialmente no grupo das cadelas gestantes. Nos outros momentos avaliados não apresentaram diferenças. Os fatores anti-angiogênicos THBS2, TGFB1, VEGFA e IGFBP5 apresentaram acentuada expressão no momento 60 dias de gestação. A endotelina foi mais expressa no dia 60, no grupo das cadelas pesudogestantes. Esses resultados reforçam a hipótese que os mecanismos associados a luteólise são diferentes nas cadelas gestantes e pseudogestantes.

The objective of this study is to obtain a deeper understanding of regulatory mechanisms of maintenance and especially of the end of the luteal function in pregnant and non-pregnant bitches. The profile of P4 is very similar in pregnant and non-pregnant bitches, but it begins to diverge approximately on day 60 of the luteal phase. At this moment, an abrupt decline of P4 is evidenced in the pregnant bitches, signaling the prepartum luteolysis: associated to an increase of the PGF2α and great apoptotic activity inside the corpus luteum (CL). Differently from non-pregnant bitches, where luteal regression is passive and preprogrammed. In the present work, it was validated the expression of the main angiogenic factors - VEGFA, IGFBP5, Endothelin, THBS2 and TGFB1 in CLs of cyclic and pregnant bitches. For this, the estral cycle of females in cyclic diestrus (n = 20) was monitored and the females of the pregnant group were artificially inseminated (n = 20). All females were submitted to ovariohysterectomy (OSH) on days 10, 20, 40 and 60 after the preovulatory LH surge. The collected CLs were submitted to qRT-PCR and immunofluorescence techniques. For statistical analysis, the student's t-test was applied, the data analyzed by the program GraphPadPrism 6 and it was considered significant when p <0.05. The results showed that the selected angiogenic factors were differentially expressed on days 40 and 60, especially in the group of pregnant bitches. No differences were observed in the other moments evaluated. The anti-angiogenic factors THBS2, TGFB1, VEGFA and IGFBP5 presented marked expression at the time 60 days of gestational diestrus. Endothelin was most expressed on day 60 in the group of pseudopregnants. These results reinforce the hypothesis that the mechanisms associated with luteolysis are different in pregnant and pseudopregnant