VALIDAÇÃO DOS PROCESSOS PRÉ-ANALÍTICOS DE AMOSTRAS DE SANGUE DE DOADORES PARA O TESTE NAT: CENTRIFUGAÇÃO E TRANSPORTE

Abstract

Objetivo Promover a validação da centrifugação e transporte de amostras de doadores do Hemocentro de Botucatu e suas unidades associadas para a realização do Teste NAT no Hemocentro de Campinas. Materiais e métodos Dois protocolos de centrifugação foram testados para a validação em centrífuga Excelsa i2206. Durante 10 dias da rotina de coleta de sangue dos doadores, 20 tubos aleatórios, sendo 10 do início da rotina e 10 do fim da rotina para os primeiros 5 dias, foram centrifugados sob tempo de 10 minutos e velocidade de 2200g (3400 rpm), conforme o protocolo KIT NAT PLUS HIV/HCV/HBV/MALÁRIA. Mais 20 tubos aleatórios, sendo 10 do início da rotina e 10 do fim da rotina para os demais 5 dias, foram centrifugados sob tempo de 15 minutos e mesma velocidade. Os resultados obtidos através do equipamento Architect I2000, que utiliza o método de quimioluminescência, foram coletados para análise estatística. Para o transporte, utilizou-se a caixa padronizada fornecida pela empresa de logística contratada. Posicionou-se 1000g do material refrigerante (gelo reciclável) na parede inferior da caixa de isopor, seguido da acomodação de 500g na parede lateral posterior da mesma embalagem. Colocou-se cinco sensores dos termômetros digitais em seu interior e sem estar em contato com o material refrigerante até que o marco de 2°C fosse atingido por todos, sendo eles observados a cada 10 minutos. Após 1h30 minutos, acomodou-se a estante plástica com a presença de amostras sorológicas e ordenou-se os sensores dos termômetros de forma a representar todo o ambiente das amostras. A cada 30 minutos durante o restante do período mínimo de 8 horas, as temperaturas foram observadas e após 24 horas do início do processo de validação. Todo esse processo foi realizado durante quatro dias, sendo dois dias para 90 tubos e dois para 45. Todos os dados foram adicionados em planilha para o cálculo da média, desvio-padrão e produção de gráficos e tabelas pelo programa Excel 2019. Resultados As médias e desvios-padrão da centrifugação durante 10 e 15 minutos, respectivamente, foram 0,138±0,053 vs. 0,135 ±0,069 para HIV, 0,110±0,081 vs. 0,0945±0,026 para HCV e 0,132±0,155 vs. 0,212±0,766 para HBV, enquanto as temperaturas de transporte apresentaram valores, em °C, de 15,25±2,73 no 1º dia, 12,17±4,73 no 2º, 14,49±3,02 no dia 3º e 13,77±3,20 no 4º. Discussão Em relação à centrifugação, ambos os tempos (10 e 15 minutos), apresentaram resultados satisfatórios e dentro dos valores de referência do Laboratório de Sorologia para HIV, HBV e HCV, possibilitando a utilização do protocolo de 15 minutos conforme o requerido pela Bio-Manguinhos (executor do teste NAT), tendo em vista melhor detecção de ácidos nucleicos para Malária sob esse tempo e a continuidade da qualidade de detecção para os demais parâmetros em nosso laboratório. Em relação à padronização da temperatura, todas as observadas durante os quatro dias de experimentação se mantiveram dentro do recomendado pelo KIT NAT PLUS, concernente aos valores entre 2°C e 25°C. Conclusão Padroniza-se a centrifugação de amostras NAT por 15 minutos a 2200g (3400 rpm pela centrífuga Excelsa i2206) e a utilização do material refrigerante de 1000g na parede inferior da caixa de isopor, seguido da acomodação de 500g na parede lateral posterior e ambos recobertos com material absorvente.