Avaliação citogenética de uma espécie do gênero Anthopleura (Cnidaria; Anthozoa) no estado de São Paulo

Abstract

Os estudos citogenéticos em cnidários tropicais permanecem escassos, dificultando análises comparativas e a compreensão da evolução cromossômica em Anthozoa. Com o objetivo de suprir essa lacuna, este estudo buscou desenvolver e otimizar metodologias para a preparação cromossômica da anêmona-do-mar Anthopleura cascaia, espécie sugerida como endêmica da costa brasileira e sem registros citogenéticos prévios. Para contornar a ausência de material embrionário, tecidos regenerativos da coluna e dos tentáculos foram utilizados como fontes celulares alternativas, explorando sua elevada atividade mitótica. Foram avaliados diferentes protocolos, incluindo cultura rápida e cultura celular com cinco e sete dias de incubação, sob distintas temperaturas e concentrações de colchicina. Entre as abordagens testadas, o protocolo de cultura celular de cinco dias apresentou a melhor combinação entre atividade mitótica, preservação nuclear e baixa deterioração celular. A espécie mostrou sensibilidade ao antimitótico, sendo o tratamento de 30’ o mais eficiente para obtenção de metáfases sem induzir danos celulares. Além disso, tecidos da coluna apresentaram maior estabilidade e qualidade citogenética, reforçando a importância da escolha do tipo de amostra. Embora a definição completa do cariótipo não tenha sido alcançada, foram obtidas estruturas cromossômicas preliminares e identificados os principais entraves técnicos, como contaminação microbiana, contratilidade tecidual e interferência de simbiontes. Os resultados fornecem uma base metodológica inédita para A. cascaia, contribuindo para o avanço da citogenética de cnidários tropicais. A integração futura com técnicas moleculares, como FISH e hibridação genômica comparativa, poderá aprofundar a compreensão da organização cromossômica e dos processos evolutivos dentro do gênero Anthopleura e da ordem Actiniaria.

Cytogenetic studies on tropical cnidarians remain scarce, hindering comparative analyses and understanding of chromosomal evolution in Anthozoa. To fill this gap, this study sought to develop and optimize methodologies for chromosome preparation in the sea anemone Anthopleura cascaia, a species suggested to be endemic to the Brazilian coast and without previous cytogenetic records. To circumvent the absence of embryonic material, regenerative tissues from the column and tentacles were used as alternative cell sources, exploiting their high mitotic activity. Different protocols were evaluated, including rapid culture and cell culture with five and seven days of incubation, under different temperatures and colchicine concentrations. Among the approaches tested, the five-day cell culture protocol presented the best combination of mitotic activity, nuclear preservation, and low cell deterioration. The species showed sensitivity to the antimitotic agent, with the 30-minute treatment being the most efficient for obtaining metaphases without inducing cell damage. In addition, column tissues showed greater stability and cytogenetic quality, reinforcing the importance of sample type selection. Although complete karyotype definition was not achieved, preliminary chromosome structures were obtained and the main technical obstacles were identified, such as microbial contamination, tissue contractility, and symbiont interference. The results provide an unprecedented methodological basis for A. cascaia, contributing to the advancement of tropical cnidarian cytogenetics. Future integration with molecular techniques, such as FISH and comparative genomic hybridization, may deepen the understanding of chromosomal organization and evolutionary processes within the genus Anthopleura and the order Actiniaria