Publicação: Atividade antifúngica do extrato hidroalcoólico de Origanum vulgare L. sobre culturas planctônicas e biofilmes de Candida spp
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Data
Autores
Orientador
Domiciano, Vanessa Marques Meccatti 
Coorientador
Pós-graduação
Ciências Aplicadas à Saúde Bucal - ICT
Curso de graduação
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Dissertação de mestrado
Direito de acesso
Acesso restrito
Resumo
Resumo (português)
As leveduras de Candida spp. são comensais e podem ocasionar infecções sistêmicas com alta taxa de mortalidade em pacientes com o sistema imune debilitado. A fitoterapia tem recebido alta visibilidade, pois utiliza plantas medicinais como alternativas no combate a infecções fúngicas. O objetivo do estudo foi avaliar a atividade fitoquímica, citotoxicidade, genotoxicidade e ação antifúngica do extrato hidroalcóolico de Origanum vulgare L. (orégano) sobre cepas padrão (ATCC) de Candida albicans (ATCC 18804), Candida tropicalis (ATCC 13803) e Candida dubliniensis (ATCC MYA 646). Após o procedimento de extração do vegetal, foi realizada a quantificação de teor de sólidos solúveis, fenóis, flavonoides, atividade
antioxidante e cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). Para as análises da citotoxicidade e genotoxicidade utilizou-se a linhagem de queratinócitos humanos (HaCat). A Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Fungicida Mínima (CFM) foram determinadas pelo método de microdiluição em caldo (CLSI M7-A6). Para a formação do biofilme de 48 horas foi utilizado o caldo BHI, o tempo de contato com as concentrações pré-determinadas do extrato vegetal foi de 1h e 24h, sendo a clorexidina 0,06% o controle positivo. O teste colorimétrico MTT foi utilizado para verificar o percentual de redução. Com relação a análise estatística, se os dados apresentaram normalidade, foram analisados por ANOVA e Teste de
Tukey; caso contrário, pelo teste de Kruskal-Wallis e Teste de Dunn. Foi utilizado o programa GraphPad Prism 5.0, considerando-se um nível de significância de 5%. O valor de sólidos e solúveis foi de 3,15 mg/mL. Fenóis totais foi de 0,888 mg/mL, flavonoides de 0,076 mg/mL e atividade antioxidante de 35,64 µg/mL. Na análise por HPLC foram identificados picos de carvacrol, ácido cafeoilquínico, ácido clorogênico, vitexina, isovitexina e ácido rosmarínico. O extrato apresentou ação antifúngica sobre as culturas planctônicas de C. albicans e C. tropicalis. Em relação a erradicação do biofilme, obteve-se porcentagem de redução acima de 60% para C. albicans, C. tropicalis, em ambos os tratamentos de 1 h e 24 h (p < 0,05), C.
dubliniensis apresentou percentual de erradicação de 17,9% em 1 h e 70,9% em 24h. O extrato não apresentou citotoxicidade, pois após aplicação de diferentes concentrações, a viabilidade celular manteve-se acima de 70 % (p> 0,05). A análise de genotoxicidade apresentou poucos micronúcleos em algumas das diluições avaliadas. Diante disso, conclui-se que o extrato hidroalcóolico de O. vulgare L. apresenta importantes atividades biológicas como a ação antioxidante, antifúngica e antibiofilme contra Candida spp. e que não apresenta efeitos citotóxicos e genotóxicos na faixa de concentrações testadas.
Resumo (inglês)
Candida spp. yeasts are commensal and can cause systemic infections with a high mortality rate in patients with weakened immune systems. Phytotherapy has received high visibility, as it uses medicinal plants as alternatives in the fight against fungal infections. The aim of this study was to evaluate the phytochemical activity, cytotoxicity, genotoxicity and antifungal action of the hydroalcoholic extract of Origanum vulgare L. (oregano) on standard strains (ATCC) of Candida albicans (ATCC 18804), Candida tropicalis (ATCC 13803) and Candida dubliniensis (ATCC MYA 646). After the vegetable extraction procedure, the quantification of soluble solids, phenols, flavonoids, antioxidant activity and high-performance liquid chromatography (HPLC) was performed. For the analysis of cytotoxicity and genotoxicity, the human keratinocyte strain (HaCat) was used. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and the Minimum Fungal Concentration (MFC) were determined by the broth microdilution method (CLSI M7-A6). For the formation of the 48-hour biofilm, BHI broth was used, the contact time with the predetermined concentrations of the plant extract was 1h and 24h, with 0.06% chlorhexidine being the positive control. The MTT colorimetric test was used to verify the percentage of
reduction. Regarding the statistical analysis, if the data were normal, they were analyzed by ANOVA and Tukey's test; otherwise, by the Kruskal-Wallis test and Dunn's test. The GraphPad Prism 5.0 program was used, considering a significance level of 5%. The value of solids and solubles was 3.15 mg/mL. Total phenols were 0.888 mg/mL, flavonoids 0.076 mg/mL, and antioxidant activity was 35.64 μg/mL. In the HPLC analysis, peaks of carvacrol, caffeoylquinic acid, chlorogenic acid, vitexin, isovitexin and rosmarinic acid were identified. The extract showed antifungal action on planktonic cultures of C. albicans and C. tropicalis. Regarding the eradication of biofilm, a reduction percentage above 60% was obtained for C. albicans, C. tropicalis, in both treatments of 1 h and 24 h (p < 0.05), C. dubliniensis showed an eradication percentage of 17.9% in 1 h and 70.9% in 24 h. The extract did not present cytotoxicity, because after application of different concentrations. Cell viability remained above 70 % (p> 0.05). The genotoxicity analysis showed few micronuclei in some of the dilutions evaluated. Therefore, it is concluded that the hydroalcoholic extract of O. vulgare L. has important biological activities such as antioxidant, antifungal and antibiofilm action against Candida spp. and that it does not present cytotoxic and genotoxic effects in the range of concentrations tested.
Descrição
Palavras-chave
Fitoterapia, Fhytotherapy, Biofilmes, Biofilms, Origanum, Origanum
Idioma
Português
