Expressão em macrófagos de receptor antigênico quimérico (CAR) específico para Cryptococcus spp. para favorecer a fagocitose do fungo

Abstract

As infecções fúngicas acometem milhões de humanos a cada ano, e a criptococose apresenta importante relevância ao afetar indivíduos imunocomprometidos e indivíduos saudáveis. A criptococose representa uma das principais causas de morbidade e mortalidade mundial, principalmente, entre os indivíduos HIV+. O avanço no desenvolvimento de novas drogas antifúngicas para o combate da criptococose humana está deficitário ao considerar a capacidade do gênero Cryptococcus em adquirir resistência diante do tratamento de escolha disponível até o momento. Esse fator é agravado pelos eficientes mecanismos de evasão da resposta imunitária do hospedeiro desenvolvido pelo Cryptococcus spp., com destaque para a subversão da atividade fagocítica e fungicida de células da imunidade inata como os macrófagos. Diante disso, a atual proposta visou a bioengenharia de macrófagos alveolares via receptor antigênico quimérico (CAR) para promover o reconhecimento direto de leveduras de Cryptococcus spp. e, de forma concomitante, induzir uma ativação celular caracterizada por elevada atividade fungicida. Essas duas abordagens utilizaram a construção de GXMR-CAR, um CAR com porção de reconhecimento específico para GXM presente na cápsula de Cryptococcus spp. O construto GXMR-CAR foi modificado para conter as porções hinge/transmembrana e domínio de transdução de sinal oriundos do receptor FcγRI, originando a construção GXMR-FcγRI-CAR. Essa construção foi expressa em macrófagos alveolares da linhagem AMJ2-C11 através da transdução com vetor lentiviral. As células GXMR-FcγRI-CAR foram redirecionadas para a interação com leveduras de Cryptococcus spp. e com elevada capacidade de reconhecer a forma solúvel de GXM. O reconhecimento de células GXMR-FcγRI-CAR também se destacou em leveduras mutantes de Cryptococcus spp. com comprometimento da integridade da membrana plasmática, e a interação com Cryptococcus spp. deficientes para GXM foi significativamente reduzida. As células GXMR-FcγRI-CAR com maior taxa de adesão ás leveduras de Cryptococcus spp. não apresentaram uma melhora na atividade fungicida, e isso decorreu da deficiência da linhagem AMJ2-C11 em apresentar uma maquinaria eficaz na sinalização intracelular desencadeada pela porção FcγRI do GXMR-CAR. Portanto, a atual proposta evidenciou a capacidade de redirecionamento de macrófagos alveolares expressando GXMR-FcγRI-CAR para interagir com Cryptococcus spp favorecendo uma maior adesão do macrófago com a levedura.