Investigação das proteínas do plasma seminal, fluído epididimário e células espermáticas de cães: a busca de uma proteína contraceptiva

Abstract

Vacinas contraceptivas têm sido propostas como uma forma mais rápida e menos invasiva para esterilização de cães. Este estudo objetivou descrever a relação entre as proteínas das células espermáticas ejaculadas e do epidídimo, do plasma seminal e do fluído epididimário, produzindo base experimental para o design destas vacinas. Para isso, utilizou-se 5 cães (n = 5), dos quais foram obtidos o ejaculado e, após a orquiectomia, o produto da recuperação da cauda do epidídimo. As amostras foram submetidas a avaliação da concentração, morfologia, cinética espermática, citometria de fluxo e teste de ligação em membrana perivitelínica de ovo, sendo separadas em 4 grupos: plasma seminal (PS), fluido epididimário (FE), espermatozoides do ejaculado (EJAC) e do epidídimo (EPID). Para análise proteômica a digestão das proteínas dos 4 grupos foi feita in gel e avaliadas em espectrômetro de massas Q-Tof. Os parâmetros de motilidade progressiva, retilinearidade, linearidade, coeficiente de oscilação, produção de H2O2 e percentagem de membrana plasmática íntegra e acrossomal lesada foram mais expressivos (P< 0,01) no grupo EJAC do que no EPID. Foram encontradas 177 proteínas entre EJAC e PS (16 up-regulated no EJAC e 14 no PS); 241 proteínas entre EPID e FE (27 up-regulated no EPID e 14 no FE); e 210 proteínas entre EJAC e EPID (3 up-regulated no EJAC e 17 no EPID).

Contraceptive vaccines has been proposed as a faster and less invasive way to sterilize dogs. This study aimed to describe the relation between proteins of ejaculated sperm cells and epididymis, seminal plasma and epididymal fluid, producing an experimental basis for designing these vaccines. For this, 5 dogs (n = 5) were used, from which the semen and, after orchiectomy, the epididymis tail recovery product was obtained. Samples were submitted to concentration, morphology, sperm kinetics, flow cytometry and egg perivitellin membrane binding test analisys, and separated into 4 groups: seminal plasma (PS), epididymal fluid (EF), ejaculate spermatozoa (EJAC) and epididymis spermatozoa (EPID). For proteomic analysis the protein digestion of the 4 groups was performed in gel and evaluated by Q-Tof mass spectrometer. The parameters of progressive motility, rectilinearity, linearity, wobble, H2O2 production and percentage of plasma membrane integrity and damaged acrosomal membrane were more expressive (p <0.01) in the EJAC group than in EPID group. 177 proteins were found between EJAC and PS (16 up-regulated in EJAC and 14 in PS); 241 proteins between EPID and FE (27 up-regulated in EPID and 14 in FE); and 210 proteins between EJAC and EPID (3 up-regulated in EJAC and 17 in EPID).