Citotoxicidade, genotoxicidade e efeito antimicrobiano dos extratos de própolis verde e casca de romã isolados e combinados frente cepas multirresistentes de Acinetobacter baumannii e Pseudomonas Aeruginosa
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Data
Autores
Orientador
Oliveira, Luciane Dias de 
Coorientador
Pós-graduação
Ciências Aplicadas à Saúde Bucal - ICT
Curso de graduação
Título da Revista
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Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Tese de doutorado
Direito de acesso
Acesso restrito
Resumo
Resumo (português)
Acinetobacter baumannii e Pseudomonas aeruginosa são bactérias Gram-negativas que têm grande resistência aos principais antimicrobianos. Extratos de plantas têm sido estudados como alternativa ao tratamento. Diante do exposto, o presente estudo teve como objetivo: I) produzir e avaliar fitoquimicamente os extratos de própolis verde (EHP) e romã (EHR); II) Avaliar a ação antimicrobiana e antibiofilme isoladamente e em combinação sobre cepas de A. baumannii e P. aeruginosa; III) avaliar a citotoxicidade e genotoxicidade dos extratos em linhagem de queratinócitos humanos (HaCaT). Para tanto, os extratos foram preparados e caracterizados fitoquimicamente por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC-DAD), a ação antioxidante foi
avaliada e o teor de flavonoides e fenóis determinados. A atividade antimicrobiana foi analisada pelo teste de microdiluição em caldo (CLSI – M7-A9) para determinar concentração bactericida mínima (CBM). Para avaliar a combinação dos extratos foi utilizada a técnica “checkerboard” e adotado o Índice de Concentração Bactericida Fracionária (ICBF). As concentrações que se apresentaram sinérgicas e aditivas foram analisadas sobre biofilmes monotípicos utilizando o teste de MTT. Os resultados foram analisados estatisticamente por ANOVA e Teste de Tukey (p<0,05). Os queratinócitos humanos da linhagem HaCaT foram utilizados para avaliação de citotoxicidade e genotoxicidade, a partir do teste colorimétrico de Rezasurina e micronúcleos, respectivamente. A análise cromatográfica de EHR mostrou picos de punicalagina e em EHP mostrou ácido artepillin C. Para eliminar 50% dos radicais livres é necessário 8,66 µg/mL de EHR e 11,73 µg/mL de EHP. O teor de sólidos solúveis foi de 6,02% (EHR) e 8,04% (EHP), a concentração de flavonoides foi de 0,256 mg/mL (EHR) e 0,337 mg/mL (EHP), de fenóis foi de 1,227 mg/mL (EHR) e 1,130 mg/mL (EHP). Os extratos apresentaram ação bactericida sendo a CBM de EHR variando de 0,1% a 1,5% e a CBM de EHP variou de 0,2% a 2,01% para todas as cepas testadas. Os extratos em combinação apresentaram diferentes concentrações com efeito aditivo e sinérgico bem como apresentaram ação antibiofilme para todas as cepas testadas demonstrando semelhança ao digluconato de clorexidina (p<0,5). Os extratos não foram citotóxicos e nem produziram alteração no material genético dos queratinócitos. Portanto é possível concluir que os extratos hidroalcoólicos de casca de romã e própolis verde brasileira possuem ação antimicrobiana e antibiofilme sobre P. aeruginosa e A. baumannii, possui boa ação antioxidante e não é citotóxico, nem genotóxico para queratinócitos humanos (HaCaT).
Resumo (inglês)
Acinetobacter baumannii and Pseudomonas aeruginosa are Gram-negative bacteria highly resistant to major antimicrobials. Plant extracts have been studied as alternative treatments. Therefore, the present study aimed to: I) produce and phytochemically evaluate green propolis (EHP) and pomegranate (EHR) extracts; II) evaluate their antimicrobial and antibiofilm action, alone and in combination, on A. baumannii and P. aeruginosa strains; III) evaluate the cytotoxicity and genotoxicity of the extracts in a human keratinocyte cell line (HaCaT). Therefore, the extracts were prepared and phytochemically characterized by high-performance liquid chromatography (HPLCDAD), their antioxidant activity was evaluated, and their flavonoid and phenol contents were determined. Antimicrobial activity was analyzed by the broth microdilution test (CLSI – M7-A9) to determine the minimum bactericidal concentration (MBC). The checkerboard technique was used to evaluate the combination of extracts, and the Fractional Bactericidal Concentration Index (FCI) was adopted. Concentrations that were synergistic and additive were analyzed on monotypic biofilms using the MTT test. The results were statistically analyzed by ANOVA and Tukey's test (p<0.05). Human keratinocytes of the HaCaT lineage were used to evaluate cytotoxicity and genotoxicity, based on the colorimetric Rezasurin and micronucleus tests, respectively. Chromatographic analysis of EHR showed punicalagin peaks and in EHP it showed artepillin C acid. To eliminate 50% of the free radicals, 8.66 µg/mL of EHR and 11.73 µg/mL of EHP are required. The soluble solids content was 6.02% (EHR) and 8.04% (EHP), the flavonoid concentration was 0.256 mg/mL (EHR) and 0.337 mg/mL (EHP), and the phenol concentration was 1.227 mg/mL (EHR) and 1.130 mg/mL (EHP). The extracts showed bactericidal action, with the MBC of EHR ranging from 0.1% to 1.5% and the MBC of EHP ranging from 0.2% to 2.01% for all tested strains. The combined extracts showed additive and synergistic concentrations. They showed antibiofilm action for all tested strains, demonstrating similarity to chlorhexidine digluconate (p<0.5). The extracts were not cytotoxic and did not produce alterations in the genetic material of keratinocytes. Therefore, it is possible to conclude that the hydroalcoholic extracts of pomegranate peel and Brazilian green propolis have antimicrobial and antibiofilm action on P. aeruginosa and A. baumannii, have good antioxidant action and are not cytotoxic or genotoxic to human keratinocytes (HaCaT).
Descrição
Palavras-chave
Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Biofilms, Biofilmes, Genotoxicity, Genotoxicidade, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa
Idioma
Português
