Avaliação da ação farmacológica do nebivolol e suas repercussões em modelo in vitro de pré-eclâmpsia

Abstract

A pré-eclâmpsia (PE) é marcada por disfunção endotelial significativa, onde uma redução na biodisponibilidade do óxido nítrico (NO, do inglês nitric oxide) é particularmente significativa. Este estudo teve como objetivo investigar a influência do tratamento de células endoteliais (CEs) com plasma obtido de pacientes com pré-eclâmpsia (PE), tanto na presença quanto na ausência de nebivolol. Para conduzir o estudo, as CEs foram submetidas a tensão de cisalhamento e expostos a um pool de 10% (v/v) de PE e plasma de gestantes saudáveis (HP) por 4 horas. Avaliamos a expressão proteica relativa de t-eNOS, peNOS (Ser1177) e gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) como controle; medimos os níveis de nitrito/nitrato (NOx); os níveis de espécies reativas de oxigênio (ROS) e moléculas de adesão CD54 (ICAM, molécula de adesão intracelular 1), CD106 (VCAM, molécula de adesão celular vascular 1) e CD105 [Endoglin (ENG)] foram avaliados por citometria de fluxo e capacidade antioxidante por FRAP. Encontramos uma relação peNOS (Ser1177) / t-eNOS maior nas CEs tratadas com plasma de PE em comparação com as células tratadas com HP. Paralelamente, o tratamento com nebivolol resultou numa maior fosforilação da peNOS(Ser1177) em comparação com CEs tratados apenas com plasma de PE. Além disso, as células tratadas com plasma de PE combinadas com nebivolol aumentaram os níveis de NOx total quando comparadas com o plasma sozinho. As CEs tratados com PE também demonstram maior capacidade antioxidante e níveis reduzidos de ROS em comparação com as CEs tratados com plasma de HP. Além disso, o plasma de PE diminui a expressão das moléculas de adesão ICAM-1 e VCAM-1, que desempenham papéis na adesão celular. A intervenção com nebivolol influencia a via do NO e a liberação de ROS, ao mesmo tempo que regula positivamente os marcadores de adesão. O estudo ressalta o potencial do plasma de PE em modular a função endotelial e apresenta o nebivolol como uma intervenção farmacológica importante.

Preeclampsia (PE) is characterized by significant endothelial dysfunction, where a reduction in the bioavailability of nitric oxide (NO) is particularly significant. In this context, this dissertation is divided into two chapters that address the implicati ons of the disease in an in vitro model of PE. Chapter 1 presents the article published in the journal Cells, titled "Nebivolol increases nitric oxide synthase via β3 adrenergic receptor in endothelial cells following exposure to plasma from preeclamptic patients." In this study, we explore the action of the drug nebivolol in reestablishing NO levels in endothelial cells (ECs) exposed to plasma from PE patients. We found that ECs incubated with plasma from women with PE have lower NO levels compared to the group of cells that received plasma from health y pregnant women. However, treatment with nebivolol restores these levels, and this action is partially related to the activation of β3 adrenergic receptors and endothelial nitric oxide synthase (eNOS). Our results suggest that nebivolol acts on NO synthes is through the activation of eNOS and β3 adrenergic receptors in the endothelium. However, further studies will be necessary to understand this molecule. In Chapter 2, we present an unpublished article titled "Shear Stress and nebivolol in Preeclampsia: Modulating the NO pathway." In this study, the objective was to investigate how shear stress and nebivolol can influence the NO pathway, production of react ive oxygen species (ROS), expression of adhesion molecules, and antioxidant activity. We found that PE plasma increases the phosphorylation of the eNOS enzyme at Serine1177, and treatment with nebivolol results in additional elevation of this phosphorylati on compared to the group of ECs incubated only with PE plasma. ECs treated with PE plasma also demonstrate greater antioxidant capacity and reduced levels of reactive oxygen species ROS compared to ECs treated with plasma from healthy pregnant women. Furthermore, PE plasma decreases the expression of adhesion molecules ICAM 1 and VCAM 1, hich play essential roles in cell adhesion. Nebivolol intervention influences the NO pathway and the release of ROS while positively regulating adhesion markers. The study highlights the potential of PE plasma in modulating endothelial function and underscores nebivolol as a potential pharmacological intervention. Taken together, the two studies present important results regarding endothelial dysfunction in PE and shed light on a new drug capable of modulating markers present in the disease, such as NO.