Criopreservação de embriões de Astyanax altiparanae: influência dos ácidos graxos poli-insaturados na resistência dos embriões ao frio, aos crioprotetores e a vitrificação.

Abstract

O objetivo deste trabalho a incorporação de ácidos graxos essenciais nas membranas dos embriões de Astyanax altiparanae, visando a determinação de protocolos para a crioconservação de embriões desta espécie de peixe neotropical.Para realização do experimento foram selecionados 2400 espécimes deA. altiparanae. Um grupo foi alimentado com ração comum, denominado de Ração Comercial (RC), e outro alimentado com ração comum acrescida de 5% de óleo de peixe marinho, denominado de Ração Comercial com Óleo de peixe marinho (RC+O). No Capítulo I, foi realizado análise de ácidos graxos no fígado, gônada e embrião. E verificado a mobilização destes ácidos graxos e sua influência. No Capítulo IIverificamos a permeabilização do córion nos embriões quando expostos a solução de pronase-E 25mg/mL, por períodos de 10, 20, 30s. Também foi analisado a sensibilidade dos embriões RC e RC+O aos crioprotetores. Os embriões foram expostos a soluções de propileno glicol, metanol, dimetil sulfóxido, dimetil, formamida, dimetil acetamida e glicerol, por 20 minutos. Verificou-se a taxa de eclosão e viabilidade das larvas após a eclosão. No Capítulo III os embriões do grupo RC e RC+O foram vitrificados em solução de propileno glicol 5M, na fase de seis somitos.No capítulo IV buscou-se o resfriamento dos embriões de RC e RC+O a tempeturas de 15°C, 5°C e 0°C, por um período de 12h. Os embriões foram expostos a soluções sem crioprotetor, com propileno glicol 1M e 2M.

The objective of this work was the incorporation of essential fatty acids in the membranes of the embryos of Astyanax altiparanae, aiming the determination of protocols for the cryopreservation of embryos of this neotropical fish species. For the experiment, 2400 specimens of A. altiparanae were selected. One group was fed with common ration, called Commercial Ration (CR), and the other was fed with common ration plus 5% of marine fish oil, called Commercial Ration with Marine Fish Oil (CR + O). In Chapter I, analysis of fatty acids in the liver, gonad and embryo was performed. And we verified the mobilization of these fatty acids and their influence. In Chapter II we verified the permeabilization of the chorion in the embryos when exposed to 25mg / mL pronase-E solution, for periods of 10, 20, 30s. The sensitivity of the CR and CR + O embryos to the cryoprotectants was also analyzed. The embryos were exposed to solutions of propylene glycol, methanol, dimethyl sulfoxide, dimethyl, formamide, dimethyl acetamide and glycerol for 20 minutes. The hatch rate and viability of the larvae after hatching were checked. In Chapter III the embryos of the CR and CR + O group were vitrified in 5M propylene glycol solution in the six somites phase. In Chapter IV, the cooling of the CR and CR + O embryos was sought at temperatures of 15 ° C, 5 ° C and 0 ° C for a period of 12 hours. The embryos were exposed to cryoprotectant solutions with 1M and 2M propylene glycol.