Avaliação do reparo ósseo de defeitos de tamanho crítico tratados com matriz óssea mineralizada de osso bovino (Bio-Oss®) e laser de baixa intensidade. Estudo histomorfométrico e imunohistoquímico em ratos

Abstract

Este estudo teve como objetivo investigar os efeitos da terapia com laser de baixa intensidade (LLLT) associada ao Bio-Oss® em defeitos de tamanho crítico de ratos. Foram utilizados 72 ratos machos adultos (Rattus norvegicus, variação albinus, Wistar), com 90 dias de idade. Foram realizados defeitos ósseos na calvária com 5 mm de diâmetro. Os animais foram divididos em 4 grupos: C-Coágulo sanguíneo, B- Bio-Oss®, L- LLLT, B+L- Bio-Oss® + LLLT. Cada grupo foi subdividido de acordo com os períodos de observação de 07, 30 e 60 dias, com 6 ratos em cada subgrupo. Para LLLT uma baixa energia GaAlAs com comprimento de onda de 660 nm, foi aplicada em 5 pontos. Foram distribuídos 4 pontos de aplicação ao longo das bordas da ferida e um ponto de aplicação localizado na região central da ferida cirúrgica. A irradiação foi liberada por 12 segundos por ponto, com uma densidade total de energia de 45 J/cm2. A irradiação com laser ocorreu de forma transcirurgica em única aplicação imediatamente após o procedimento. Em 07, 30 e em 60 dias, 6 animais de cada grupo foram eutanasiados pela aplicação de anestesia geral em dose triplicada, e após os testes de sensibilidade os animais foram decapitados. Em seguida a calvária foi removida para análises histomorfométrica e imunohistoquímica. Todos os dados histomorfométricos foram submetidos a análise por ANOVA, complementado pelo teste de Tukey. O nível de significância foi de 5%. Os resultados da imunohistoquímica foram representados por scores e porcentagem. Os grupos que apresentaram maior proporção de neoformação foram os grupos L (0,39±0,13) e C (0,37±0,97), porém os grupos B e B+L tiveram maior tamanho de defeito (C-1,75±0,40, B-3,02±0,63, L-2,45±0,53, B+L-3,23±1,01). Na imunohistoquímica, aos 60 dias, os grupos B (score 4-34%) e B+L (B+L score 4–50%) apresentaram maior scores de imunomarcação para OPG e RANKL, aos 30 dias a porcentagem de imunomarcação para TRAP aumentou em todos os grupos, sendo o L o único a apresentar espécimes com score 0 (16%). Os grupos que apresentaram maior proporção de neoformação foram os grupos L e C, no entanto, os maiores valores relacionados ao volume ósseo foram encontrados nos grupos B e B+L.Todos os grupos apresentaram menores valores referente a distância entre as bordas de osso neoformado no interior do defeito ao final do experimento.Os grupos B e B+L apresentaram os maiores scores de imunomarcação para OPG, as imunomarcações para TRAP apareceram mais tardiamente no grupo L.

This study aimed to investigate the effects of low-level laser therapy (LLLT) associated with Bio-Oss® on critical size defects in rats. 72 adult male rats (Rattus norvegicus, variation albinus, Wistar), 90 days old, were used. Bone defects were made in the calvaria with a diameter of 5 mm. The animals were divided into 4 groups: C-blood clot, B-Bio-Oss®, L-LLLT, B + L- Bio-Oss® + LLLT. Each group was subdivided according to the observation periods of 07, 30 and 60 days, with 6 rats in each subgroup. For LLLT a low GaAlAs energy with a wavelength of 660 nm was applied at 5 points. 4 points of application were distributed along the edges of the wound and one point of application located in the central region of the surgical wound. The irradiation was released for 12 seconds per point, with a total energy density of 45 J/cm2. Laser irradiation occurred in a trans-surgical form in a single application immediately after the procedure. At 07, 30 and 60 days, 6 animals from each group were euthanized by applying triple dose of general anesthesia, after the sensitivity tests the animals were beheaded. Then the calvaria was removed for histomorphometric and immunohistochemistry analysis. All histomorphometric data were analyzed statistically by ANOVA, complemented by the Tukey test. The level of significance was 5%. The results of immunohistochemistry were represented by scores and percentage. The groups that showed the highest proportion of neoformation were groups L (0,39±0,13) and C (0,37±0,97), but groups B and B + L had a larger defect size (C-1,75±0,40, B-3,02±0,63, L-2,45±0,53, B+L-3,23±1,01). In immunohistochemistry, at 60 days, groups B (score 4- 34%) and B + L (B+L score 4 - 50%) had higher immunostaining scores for OPG and RANKL, at 30 days the percentage of immunomarking for TRAP increased in all groups, group L was the only one to present specimens with a score 0 (16%). The groups with the highest proportion of neoformation were groups L and C, however, the highest values related to bone volume were found in groups B and B+L. All groups had lower values regarding the distance between the edges of newly formed bone inside the defect at the end of the experiment. Groups B and B+L had the highest immunostaining scores for OPG, immunomarkings for TRAP appear later in group L.