Envolvimento dos receptores de TNF sobre a polarização de monócitos em gestantes portadoras de pré-eclâmpsia

Abstract

Introdução: A pré-eclâmpsia (PE) é uma síndrome específica da gestação, caracterizada por intensa resposta inflamatória sistêmica e ativação de monócitos, que se encontram polarizados para um perfil inflamatório, com produção exacerbada de citocinas pró-inflamatórias. Embora, sejam descritas concentrações elevadas de fator de necrose tumoral (TNF) e de seus receptores (TNFR1 e TNFR2) no plasma de gestantes com PE, não se conhece a distribuição desses receptores em monócitos e seu papel na patogênese da PE. Portanto, a determinação desses receptores em subpopulações de monócitos, associada à concentração plasmática de TNF e de seus receptores solúveis, poderá trazer novos conhecimentos para a compreensão da resposta inflamatória sistêmica nessa síndrome. Objetivos: Avaliar o envolvimento da expressão de receptores de TNF (TNFR1 e TNFR2) por subpopulações de monócitos na resposta inflamatória sistêmica em gestantes portadoras de PE. Métodos: Monócitos isolados de 20 gestantes com PE e de 20 gestantes normotensas (NT) foram analisados por citometria de fluxo quanto à expressão dos receptores TLR4, CD64, CD163 e CD206, utilizados para caracterizar os perfis M1-like e M2-like, respectivamente, bem como os receptores TNFR1 e TNFR2. As concentrações plasmáticas das citocinas pró-inflamatórias TNF e interleucina (IL)-1β, da citocina anti-inflamatória IL-10 e dos receptores solúveis sTNFR1 e sTNFR2 foram determinadas por ensaio imunoenzimático (ELISA). A análise estatística foi realizada por meio de testes não paramétricos, considerando-se nível de significância de 5%. Resultados: Gestantes com PE apresentaram maior expressão dos marcadores pró-inflamatórios TLR4 e CD64 em monócitos, concomitante à redução da expressão dos marcadores associados ao perfil anti-inflamatório CD163 e CD206, em comparação às gestantes NT. Observou-se aumento da percentagem de monócitos M1-like e M2-like expressando os receptores TNFR1 e TNFR2 no grupo PE. Entretanto, a mediana da intensidade de fluorescência (MIF) do TNFR2 foi significativamente menor em monócitos de gestantes com PE, quando comparada à de gestantes NT. No plasma, as concentrações de TNF, IL-1β e sTNFR1 foram significativamente maiores nas gestantes pré-eclâmpticas, enquanto os níveis de IL-10 e sTNFR2 foram reduzidos em relação ao grupo controle. Conclusão: Conclui-se que a PE está associada a uma polarização predominante dos monócitos para um perfil pró-inflamatório M1-like, concomitante à redução do perfil imunorregulador M2-like, evidenciando o papel central dessas células na inflamação exacerbada característica dessa síndrome. Esse desequilíbrio imunológico relaciona-se não apenas à ativação exacerbada do eixo TNF–TNFR1, mas também à deficiência nos mecanismos regulatórios mediados pelo TNFR2. Adicionalmente, as alterações observadas nas concentrações plasmáticas das formas solúveis desses receptores reforçam a existência de desbalanço na sinalização do TNF, favorecendo a manutenção da resposta inflamatória mediada pela imunidade inata na PE.

Introduction: Preeclampsia (PE) is a pregnancy-specific syndrome characterized by an intense systemic inflammatory response and monocyte activation, with these cells polarized toward a pro-inflammatory phenotype and exhibiting exacerbated production of pro-inflammatory cytokines. Elevated levels of tumor necrosis factor (TNF) and its receptors (TNFR1 and TNFR2) have been reported in the plasma of women with PE. However, the distribution of these receptors among monocyte subpopulations and their role in PE pathogenesis remain poorly understood. In this context, characterizing TNFR1 and TNFR2 expression in monocyte subpopulations, along with assessing plasma concentrations of TNF and its soluble receptors, may provide new insights into the systemic inflammatory response associated with this syndrome. Objectives: To evaluate the involvement of TNF receptor expression (TNFR1 and TNFR2) by monocyte subpopulations in the systemic inflammatory response of women with PE. Methods: Monocytes isolated from 20 women with PE and 20 normotensive pregnant women (NT) were analyzed by flow cytometry for the expression of TLR4, CD64 and CD163, CD206, respectively, which were used to characterize M1-like and M2-like phenotypes, as well as for the expression of TNFR1 and TNFR2. Plasma concentrations of the pro-inflammatory cytokines TNF and interleukin (IL)-1β, the anti-inflammatory cytokine IL-10, and the soluble receptors sTNFR1 and sTNFR2 were determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Statistical analyses were performed using non-parametric tests, with a significant level set at 5%. Results: Women with PE exhibited increased expression of the pro-inflammatory markers TLR4 and CD64 on monocytes, concomitant with reduced expression of the anti-inflammatory markers CD163 and CD206, compared to NT pregnant women. An increased percentage of both M1-like and M2-like monocytes expressing TNFR1 and TNFR2 was observed in the PE group. However, the median fluorescence intensity (MFI) of TNFR2 was significantly lower in these monocyte subpopulations in women with PE than in NT women. Plasma concentrations of TNF, IL-1β, and sTNFR1 were significantly higher in preeclamptic women, whereas levels of IL-10 and sTNFR2 were lower than in the control group. Conclusion: In conclusion, PE is associated with a predominant polarization of monocytes toward a pro-inflammatory M1-like profile, concomitant with a reduction in the immunoregulatory M2-like profile, highlighting the central role of these cells in the exacerbated inflammatory state characteristic of this syndrome. This immunological imbalance is related not only to the enhanced activation of the TNF–TNFR1 axis but also to a deficiency in TNFR2-mediated regulatory mechanisms. Additionally, alterations in the plasma concentrations of the soluble forms of these receptors reinforce the presence of dysregulated TNF signaling, favoring the maintenance of innate immune-mediated inflammatory responses in PE.