Análise de dois sorovares de leptospiras após exposição a diferentes protocolos de congelamento

Abstract

A adequada preservação de qualquer micro-organismo implica em sua manutenção correta, mantendo as cepas vivas e geneticamente estáveis. As bactérias pertencentes ao gênero Leptospira são mantidas em laboratório através de métodos tradicionais, por repiques em meio de cultivo específicos, no entanto, estas são técnicas trabalhosas, caras, e que podem acarretar em perdas nas características genéticas. O presente estudo tem como objetivo comparar duas técnicas de congelamento de dois sorovares (Hardjo e Copenhageni), congelados em nitrogênio líquido e freezer a – 70°C, utilizando como agentes crioprotetores o DSMO 5% e o glicerol 10%. A viabilidade bacteriana das cepas foi avaliada antes e depois do congelamento (1, 3, 7, 15, 30 e 60 dias). As associações das variáveis (concentração e motilidade) com o reagente criopreservador, tempo de descongelamento e método de congelamento foram realizadas pelo método de Qui-quadrado (2) para todas as amostras. A técnica de preservação com o DMSO a 5% assegurou uma alta taxa de recuperação da viabilidade dos dois sorovares testados, enquanto que o glicerol a 10% gerou uma diminuição na viabilidade final das cepas. Não houve alterações significativas nos resultados quando comparados os métodos de congelamento. O método de criopreservação mostrou-se, portanto, ser a melhor técnica de conservação a longo prazo quando comparada com na manutenção tradicional realizada por cultivos periódicos.

The proper preservation of any microorganism implies in its correct maintenance, keeping the strains alive and genetically stable. The bacterias belonging to the genus Leptospira are kept in laboratory by tradicional methods, raises in specific culture medium, however these techniques are laborious, expensive and often can cause lost of the genetic traits. The present study aims to compare two freezing techniques of two serovars (Copenhageni e Hardjo), freezed in liquid nitrogen and freezer 70°C, by using as crioprotectants, DMSO 5% and Glicerol 10%. The viability of bacterial strains was checked after and before freezing (1, 3, 7, 15, 30 and 60 days). The associations of the variables (concentration and motility), with the cryopreserved reagent, time of thawing and freezing method were perfomed by using Chi-square for all samples. The preservation technique with DMSO 5% ensured a higher recovery viability rate of the two serovars tested, while glycerol 10% created a decrease in final results of viability of the strains. There were no significant changes in results when comparing the freezing methods. The cryopreservation has been, therefore, the best technique for long-term conservation when compared with to the tradicional maintenance performed by regular cultivation. Key