Dissertações - Medicina Veterinária - FMVZ

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  • ItemDissertação de mestrado
    Potencial do uso de células tronco mesenquimais como modelo in vitro para a dermatosparaxia ovina
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-06-20) Oliveira, João Pedro Marmol de; Amorim, Rogério Martins [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Dermatosparaxia ovina, doença autossômica recessiva, similar à Síndrome de Ehlers-Danlos subtipo dermatosparaxia, provoca fragilidade e hiperelasticidade da pele, resultado do polimorfismo de base única (SNP) c.421G>T exon 2 no gene ADAMTS-2, resultando na produção da enzima inativa responsável pela maturação do pró-colágeno I em fibrilas de colágeno tipo I e III. Células tronco mesenquimais (CTM) podem ser utilizadas em modelos in vitro, reproduzindo o que ocorre in vivo, minimizando o uso de modelos animais. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial das CTM para o desenvolvimento de modelos in vitro de dermatosparaxia, pela avaliação qualitativa da produção de colágeno de CTM ovinas de tecido adiposo (CTM-TA) e da expressão gênica dos colágenos do tipo I e III, e ADAMTS-2. Os animais foram divididos em grupo dermatosparaxia (n=4); grupo heterozigoto (n=5) e grupo controle (n=5). As CTM-TA foram caracterizadas morfologicamente, imunofenotipicamente e pela diferenciação in vitro em linhagens condrogênica, adipogênica e osteogênica. Foi evidencianda diferença qualitativa quanto à deposição de colágeno em matriz extracelular de diferenciações condrogênicas, sendo ausente nos animais do grupo dermatosparaxia. A expressão gênica de ADAMTS-2 foi menor no grupo dermatosparaxia, sendo que este último apresentou maior expressão de colágeno do tipo I, comparado ao grupo heterozigoto, explicada pela idade dos animais. A expressão média de colágeno do tipo III no grupo dermatosparaxia foi menor que no grupo wild type. Os resultados demonstram o potencial das CTM-TA de ovinos com dermatosparaxia no desenvolvimento de modelos experimentais in vitro da doença.
  • ItemDissertação de mestrado
    Estudo comparado dos efeitos antitumorais dos extratos de cannabis sativa rico em thc e cbd em células de carcinoma prostático canino e humano
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-06-23) Calheiros, Luís Gustavo Ramos de Moraes; Laufer-Amorim, Renée; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    O carcinoma de próstata é o segundo tipo de neoplasia maligna mais comum entre os homens no Brasil, e relatado em cães entre 8 a 10 anos de idade, com rápida evolução podendo metastatizar para linfonodos regionais, pulmões e ossos. O CBD já foi relatado na literatura como agente antineoplásico em modelos in vitro de neoplasias do homem e do cão. Nós investigamos o efeito citotóxico dos extratos de dois extratos de Cannabis sativa, um rico em CBD (ERCBD) e outro rico em THC (ERTHC), em linhagens de células de carcinoma prostático canino (PC1 e PC2) e humano (LNCAP), bem como sua avaliação para a indução a apoptose de células cancerígenas. Para avaliação da citotoxicidade foi o utilizado o ensaio de MTT, com as doses 2,5µM, 5µM, 7,5µM e 10µM de ambos os compostos nas linhagens caninas e 10µM, 20µM, 30µM e 40µM de ambos os compostos na linhagem humana, As linhagens foram incubadas por 24 horas, em placas de 96 poços em condições de cultura in vitro padrão. Após esse período determinou-se o IC50 através da atividade metabólica das células. Logo após foi realizado o ensaio da Anexina-V-FITC/ Iodeto de propídio nas linhagens caninas, avaliando através da citometria de fluxo as células com apoptose mediata e tardia. Com os resultados obtidosobtiveram uma concentração inibitória média de ERCBD (3,437; 3,577) e ERTHC (4,909;4,486) em PC1 e PC2 respectivamente, e ERCBD (21,49) e ERTHC (18,69) na linhagem LNCAP. Ainda, foi realizado ensaio de apoptose nas linhagens de carcinoma prostático canino, após o tratamento. Mais estudos devem ser feitos, para avaliar o mecanismo de morte celular e seu potencial de uso in vivo.
  • ItemDissertação de mestrado
    Pythium insidiosum e pitiose: uma revisão de literatura
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-05-15) Carnaúba, Rayane Thayse Moreira dos Santos; Bosco, Sandra de Moraes Gimenes; Lucheis, Simone Baldini [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    O objetivo deste estudo foi fazer um levantamento bibliográfico sobre Pythium insidiosum (P. insidiosum) e a pitiose, para melhor compreensão do que se tem de conhecimento até o momento sobre o agente. P. insidiosum é o agente etiológico da pitiose, causador da doença em animais e humanos. A doença é caracterizada por lesões no tecido cutâneo/subcutâneo, lesões gastrointestinais, vasculares e raramente ocorrendo disseminação para órgãos internos. O diagnóstico é obtido por meio exame clínico, anamnese e métodos laboratoriais. O tratamento baseia-se na exérese cirúrgica da lesão com margens livres do patógeno e uso de medicamentos como Anfotericina B, Iodeto de Potássio e a imunoterapia como forma de modular a resposta imune do hospedeiro. A revisão é do tipo narrativa e foi realizada por meio de busca simples e avançada nas bases de dados PubMed, Scielo e Google Scholar para obter uma visão aprofundada dos estudos relevantes disponíveis. Os artigos abordados são dos últimos 40 anos, sendo priorizado os publicados nos últimos dez anos, nos idiomas inglês, português e espanhol. Foram selecionados estudos retrospectivos, artigos de revisão sistemática, relatos de caso e artigos originais. Esta revisão avaliou as pesquisas já realizadas sobre o patógeno, P. insidiosum, bem como sobre os aspectos epidemiológicos, diagnósticos e terapêuticos da pitiose. Reforça-se a necessidade de pesquisas voltadas ao diagnóstico rápido e novas abordagens terapêuticas visando melhorar o prognóstico. É importante a utilização da biologia molecular para identificação das culturas obtidas a partir dos casos clínicos, assim como mais estudos de isolamento ambiental com consequente análises filogenéticas para melhor caracterizar os clados que podem ser encontrados e mapear possíveis focos da doença nas regiões.
  • ItemDissertação de mestrado
    Etiologia polimicrobiana nas infecções urinárias em cães identificada por proteômica e multirresistência dos isolados aos antimicrobianos
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-05-31) Paschoal, Natália Rodrigues [UNESP]; Ribeiro, Marcio Garcia [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    As infecções urinárias em cães apresentam etiologia complexa e representam afecção frequente na rotina de atendimento de animais de companhia. No entanto, o diagnóstico dos micro-organismos comumente tem sido baseado em testes fenotípicos clássicos ou restrito em nível de gênero. Ainda, por vezes, os animais são tratados sem o respaldo de testes in vitro dos isolados aos antimicrobianos. Neste cenário, 170 amostras de urina de cães com sinais de infecção do trato urinário, colhidas por cistocentese, foram submetidas ao cultivo microbiológico nos meios de ágar sangue bovino e ágar MacConkey, e os isolados ao teste de sensibilidade microbiana in vitro pelo método de difusão com discos. Os micro-organismos foram identificados em nível de espécie pela espectrometria de massas (Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time-of-fly - MALDI-TOF MS). Foram isoladas 26 espécies diferentes de micro-organismos, totalizando 190 micro-organismos, dos quais 98,42% (187/190) de origem bacteriana e 1,58% (3/190) fungos/leveduras. Os principais grupos de patógenos identificados foram enterobactérias (114/190=60%), enterococos (26/190=13,7%), estafilococos (24/190=12,6%), estreptococos (13/190=6,8%), e espécies dos gêneros Pseudomonas (5/190=2,6%) e Candida (3/190=1,6%). Os principais micro-organismos isolados em cultura pura foram: E. coli (58/147=39,5%), Proteus mirabilis (15/147=10,2%), Klebsiella pneumoniae (10/147=6,8%), Staphylococcus pseudintermedius (10/147=6,8%), Enterococcus faecium (8/147=5,4%), Staphylococcus intermedius (8/147=5,4%), Streptococcus canis (7/147=4,8%) e Pseudomonas aeruginosa (5/147=3,4%). Em associação foram identificados principalmente E. coli + Enterococcus faecalis (5/21=23,8%), e E. coli + Streptococcus canis (4/21=19%). O antimicrobiano com maior efetividade diante dos principais grupos/micro-organismos isolados foi amoxicilina/ácido clavulânico (≥70%), com efetividade moderada foram amicacina (≥60%) e marbofloxacino (≥60%). Em contraste, elevada resistência in vitro (40-100%) foi observada para os grupos/micro-organismos isolados, particularmente para enterococos (cefalexina 80,8%, ceftriaxona 73,1%, ciprofloxacino 65,4%), enterobactérias (cefalexina 40,4%), estafilococos (sulfametoxazole/trimetoprim 54,2%), estreptococos (ciprofloxacino 61,5%, enrofloxacino 76,9%, marbofloxacino 53,9%) e Pseudomonas aeruginosa (cloranfenicol 80%, enrofloxacino 40%). Resistência simultânea ≥3 grupos de antimicrobianos foi identificada em 21,9% (41/187) dos isolados, considerados multirresistentes. Infere-se a natureza polimicrobiana nas infecções urinárias em cães identificadas por proteômica, bem como elevada multirresistência dos isolados bacterianos diante de antimicrobianos de uso no tratamento de infecções urinárias em cães (sulfonamidas, derivados beta-lactâmicos e aminoglicosídeos). O presente estudo contribui com a investigação da etiologia das infecções urinárias em cães e com a vigilância da multirresistência bacteriana aos antimicrobianos.
  • ItemDissertação de mestrado
    Pesquisa de Plasmodium sp em Callithrix jacchus no Nodeste brasileiro
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-05-08) Silva, Lais Dario Belaz da; Megid, Jane [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A malária é a protozoose de maior impacto no mundo e distribui-se por extensas regiões tropicais e subtropicais, sobretudo nas nações em desenvolvimento e subdesenvolvidas. O Brasil é o país que concentra o maior número de casos no continente americano. Os primatas da família Cebidae são considerados como hospedeiros ou reservatórios de parasitos com potencial risco biológico, dentre eles se encontra o sagüi de tufo branco (Callithrix jacchus). Estes se extendem por vasta área do territorio nacional e podem conviver em áreas urbanas, falicitando a transmissão de patógenos. São animais usados como modelos experimentais para o Plasmodium, apresentando diagnostico e sinais clínicos semelhantes aos humanos. Foram analisadas 125 amostras de C. jacchus oriundos do nordeste brasileiro, com a técnica de nested PCR para Plasmodium vivax e P. falciparum, obtendo-se somente resultados negativos. A pesquisa por plasmódios humanos em primatas se faz necessário devido possibilidade de atuarem como reservatório/sentinelas e pela ausência de literatura abrangente sobre o assunto. Caracteriza-se, também, como uma ferramenta importante para controle e vigilância epidemiológica, impactando nos planos de redução de morbimortalidade e de eliminação da doença no país. A não positividade para Plasmodium em sagüis do tufo branco reflete a situação epidemiológica da população humana, em que se observam casos isolados, porém ainda são necessários estudos para e identificação ou não desses animais como fontes de infecção, visto que tem potencial para serem reservatórios.
  • ItemDissertação de mestrado
    Análise da cobertura vacinal contra a raiva de cães e gatos no Brasil, no período de 2015 a 2021.
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-05-02) Marulli, Enrico Badini; Victória, Cassiano [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Devido a sua letalidade, a raiva é considerada a zoonose mais importante e seu controle é essencial para a saúde humana e animal. Estima-se que essa doença cause cerca de 59 mil mortes anuais, sendo que aproximadamente 50% da população mundial vive em áreas endêmicas para a raiva, presente em todos os continentes com exceção da Oceania e Antártica. O presente estudo teve por objetivo realizar uma análise das coberturas vacinais contra a raiva canina e felina, através de exploração dos dados oficiais do Programa Nacional de Imunizações (SI-PNI), comparando os períodos de 2015 a 2018 (pré-pandemia) e 2020 e 2021 (pandemia), com a finalidade de se avaliar possíveis falhas na cobertura vacinal destas espécies, o que poderia contribuir para o recrudescimento da raiva em áreas já controladas pela vacinação, bem como, aumento do número de casos da doença nos seres humanos. Foram analisados os dados sobre a cobertura vacinal de cães e gatos disponíveis na plataforma online do SI-PNI e dados complementares cedidos pelo Ministério da Saúde através da Plataforma Integrada de Ouvidoria e Acesso à Informação. A partir desses dados foram realizadas as análises de estatística descritiva e os testes de Wilcoxon e Wilcoxon Pareado. Também foram elaborados mapas utilizando o software QGIS. O presente estudo constatou que houve diferença estatística entre o índice de vacinações e a cobertura vacinal de cães antes e depois da pandemia, enquanto não houve diferença entre as mesmas variáveis para felinos. Durante a realização do presente trabalho, foram constatadas inconsistências nos bancos dados disponíveis oficialmente, não sendo possível nenhuma análise conclusiva, sem prévia correção e ajuste dos dados.
  • ItemDissertação de mestrado
    Avaliação molecular para Fasciola hepatica em bovinos abatidos em frigorífico do centro-oeste paulista e análise espacial
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-04-28) Gomes, Andresa Xavier Frade; Lucheis, Simone Baldini [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Fasciola hepatica (F. hepatica) é um parasita trematoda que afeta os tecidos de animais e humanos. Este parasita se aloja principalmente no fígado de seus hospedeiros, e seu ciclo de transmissão envolve um hospedeiro intermediário, o caramujo do gênero Lymnaea. Há eliminação de ovos do parasita nas fezes de animais infectados, contaminando locais úmidos. Para o diagnóstico, realizou-se a prova molecular de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), com a utilização de dois pares de primers para F.hepatica; e o exame de PCR em tempo real (qPCR), com um par de primers. Foram utilizadas 140 amostras de fígado de bovinos abatidos em um frigorífico da região Centro Oeste Paulista. Verificou-se que, à PCR , para os dois primers, nove das 140 amostras (6,4%) foram positivas, sendo duas (1,4%) com o par de primers FhC01, e sete (5%) com o par de primers COX1. Pela técnica de qPCR, com os primers SSCPFaF e SSCPFaR, sessenta e quatro (45,7%) amostras mostraram-se positivas para Fasciola hepatica. Foi possivel observar amostras positivas procedentes das cidades de Vargem e Lençóis Paulista, com positividade de 80%, respectivamente. Quatro municípios apresentaram todas as amostras negativas para a detecção de Fasciola hepatica. A utilização das provas moleculares, em especial a qPCR, possibilitou o conhecimento de dados epidemiológicos sobre a fasciolíase no universo amostral estudado e sugerem um alerta para implementação de programas sanitários em busca da melhoria da sanidade do rebanho de bovinos de corte das propriedades avaliadas.
  • ItemDissertação de mestrado
    Avaliação microbiológica em unidade de nutrição e alimentação hospitalar antes e após intervenção nas Boas Práticas de Fabricação
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-04-28) Silva, Dionice Capistrano da; Pereira, Juliano Gonçalves [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Doenças veiculadas por alimentos podem agravar o quadro clínico de pacientes. O objetivo do estudo foi avaliar a capacidade da Unidade de Alimentação e Nutrição Hospitalar (UANH) em reduzir contagens bacterianas e garantir a inocuidade dos alimentos através das Boas Práticas de Fabricação (BPF). Em seis meses, dois checklist de BPF seguidos de amostragens microbiológicas foram realizados. Falhas de limpeza e de higiene foram constatadas em todas as áreas. Após a aplicação do plano de ação, as conformidades em BPF aumentou de 55,55% para 69,63%. As contagens de Microrganismos Aeróbios Mesófilos (AMC), bactérias da família Enterobacteriaceae (EB), e a detecção de Listeria monocytogenes (LM) sorotipos 4b, 1/2a e 1/2b revelaram que superfícies de manipulação de matérias primas foram as mais preocupantes. A melhoria nas BPF reduziu significativamente as contagens de AMC (p<0,05), que variaram de 2,61 a 4,69 log UFC/superfície antes, e de 0,48 a 2,55 log UFC/superfície após a intervenção. Ar, água, matérias primas e insumos, alimentos, e mãos também foram analisados, e, apesar de alguns resultados terem se mostrado não-conformes, todos os alimentos prontos para o consumo estavam inócuos. Após treinamentos, os manipuladores demonstraram higienização satisfatória das mãos. As comparações antes e depois da intervenção revelaram que houve redução significativa nas contagens bacterianas dos microrganismos indicadores de higiene. Conclui-se que a avaliação sistemática das BPF associada com a caracterização microbiológica das áreas de produção da cozinha hospitalar são ferramentas fundamentais na constatação dos perigos biológicos que estão envolvidos em cada processo dentro da UANH.
  • ItemDissertação de mestrado
    Estudo do perfil arritmogênico em cães com Ehrlichiose Monocítica Aguda e Crônica
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-04-27) Latini, Carolina Dragone [UNESP]; Lourenço, Maria Lucia Gomes [UNESP]; Machado, Luiz Henrique de Araújo [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A erliquiose monocítica canina (EMC) é uma enfermidade de ocorrência mundial, transmitida pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus e causada pela bactéria gram-negativa Ehrlichia spp. Após o período de incubação de oito a 20 dias no hospedeiro, a infecção é subdividida, conforme a progressão da doença, em aguda, subclínica e crônica. Além de alterações hematológicas, o sistema cardiovascular é um dos mais acometidos pelas consequências hemodinâmicas da doença, uma vez que a anemia persistente pode resultar em hipóxia do miocárdio e ativação de mecanismos inflamatórios, tornando-se um potencial causador de miocardite. Sabe-se que em cães infectados por Ehrlichia canis, há maior ocorrência de arritmias e predomínio da atividade simpática. O presente estudo avaliou parâmetros arritmogênicos, como dispersão de onda P (dP), dispersão (dQT) e instabilidade de QT, além da análise da VFC a partir do estudo do Holter de 24 horas em cães infectados naturalmente na fase aguda (10), crônica (10), comparados ao grupo controle (10). Os valores de dP e dQT foram inferiores no grupo controle, confirmando caráter arritmogênico em cães infectados. Os parâmetros de instabilidade foram superiores nos animais doentes, porém não foi observado piora na fase crônica. Todos os parâmetros de VFC no domínio tempo foram superiores no controle, o que comprova equilíbrio da atividade simpatovagal ao longo do dia em cães saudáveis. Além disso, parâmetros associados à atividade parassimpática (rMSSD e pNN50) foram inferiores nos grupos doentes, o que confirma o predomínio da atividade simpática. Conclui-se que a EMC possui atividade arritmogênica, com piora dos parâmetros preditivos de arritmias ventriculares e maior atividade do sistema nervoso autônomo simpático no coração, possivelmente secundária à miocardite.
  • ItemDissertação de mestrado
    Etiologia polimicrobiana na otite externa canina identificada pela espectrometria de massas e multirresistência bacteriana aos antimicrobianos
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-04-19) Almeida, Beatriz Oliveira de; Ribeiro, Márcio Garcia [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    As otopatias infecciosas em cães são uma das afecções mais frequentes no atendimento de rotina de animais de companhia. A doença é caracterizada por etiologia polimicrobiana, causada predominantemente por bactérias e leveduras requerendo, portanto, diagnóstico laboratorial. No entanto, em condições de rotina, o diagnóstico etiológico é baseado comumente em métodos fenotípicos tradicionais. Ainda, devido à patogenicidade de certos agentes e a evolução para casos crônicos, muitos animais necessitam do uso frequente de antimicrobianos, fato que pode aumentar a pressão seletiva para bactérias multirresistentes. Neste cenário, o presente estudo investigou a etiologia da otite externa bilateral em 157 cães, diagnosticada por técnicas convencionais de cultivo microbiano (infecção > 5 unidades formadoras de colônias) e por espectrometria de massas (Matrix assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry - MALDI-TOF MS). Ainda, foram avaliados o perfil de sensibilidade/resistência in vitro dos isolados e aspectos epidemiológicos dos casos (idade, sexo, raça e período do ano de ocorrência). A otite predominou em cães sem raça definida (61/157=38,9%), com ocorrência equivalente entre fêmeas e machos. Foi observada ampla variação de idade (2 meses e 16 anos, com média de 6,4 anos), com associação significante (p=0,0008) entre o isolamento dos patógenos e animais > 7 anos (56/132=42,4%), bem como associação significante (p<0,0001) entre o isolamento de patógenos e período de verão, particularmente para agentes de origem ambiental. Foram identificados 352 isolados pertencentes a 26 espécies, dos quais 77,3% (272/352) e 22,7% (80/352) foram isolados, respectivamente, em cultura pura ou em associação. Os micro-organismos mais frequentemente isolados (em cultura pura ou em associação) foram Staphylococcus pseudintermedius (117/352=33,2%), Staphylococcus schleiferi (54/352=15,3%), Staphylococcus intermedius (47/352=13,4%), Malassezia pachydermatis (31/352=8,8%), Pseudomonas aeruginosa (23/352=6,5%), Proteus mirabilis (19/352=5,4%) e Escherichia coli (11/352=3,1%). Em 95,5% (150/157) dos cães foram isolados micro-organismos em ambos os condutos auditivos. Os isolados foram sensíveis in vitro principalmente para florfenicol (284/317=89,6%), amicacina (274/317=86,4%) e amoxicilina/ácido clavulânico (274/317=86,4%), enquanto apresentaram elevada resistência para sulfametoxazole/trimetoprim (152/317=48,0%). Multirresistência foi observada em 17,0% dos isolados (54/317), principalmente para Pseudomonas aeruginosa (22/54=40,7%) e Staphylococcus pseudintermedius (10/54=18,5%). Ainda, na literatura consultada, Acinetobacter iwoffii, Kerstersia gyiorum, Streptococcus halichoeri e Staphylococcus caprae são descritos pela primeira vez como agentes de otite externa em cães. Grande complexidade de micro-organismos identificada por MALDI-TOF MS e ocorrência de multirresistência bacteriana foi observada no presente estudo, reforçando a complexidade etiológica da otite externa canina, a relevância da introdução de técnicas moleculares no diagnóstico em nível de espécies dos isolados e a necessidade do uso racional de antimicrobianos no tratamento de animais domésticos. O presente estudo contribuiu na identificação etiológica de casos de otite externa em cães com base em proteômica, no perfil de sensibilidade in vitro dos isolados e na vigilância da multirresistência bacteriana.
  • ItemDissertação de mestrado
    Potencial antibacteriano dos óleos essenciais de Melaleuca alternifolia, Mentha piperita e Rosmarinus officinalis em isolados de Staphylococcus pseudintermedius
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-04-25) Meira, Júlia; Machado, Luiz Henrique de Araujo [UNESP]; Okamoto, Adriano Sakai [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A bactéria Staphylococcus pseudintermedius é um agente oportunista relacionado à piodermite canina e está presente em folículos pilosos. Além disso, é considerada a principal causa da uso de antibióticos em pequenos animais. O isolamento de S. pseudintermedius resistente à meticilina (MRSP) vêm sendo relatado frequentemente na rotina clínica veterinária de pequenos animais e o uso de óleos essenciais (OEs) tornou-se uma alternativa terapêutica. O objetivo deste estudo foi avaliar se óleos essenciais possuem efeito antibacteriano sobre isolados de S. pseudintermedius resistente e suscetível à meticilina, originados de animais com piodermite canina. Foi utilizada a técnica de microdiluição seriada para obter a concentração inibitória mínima (MIC). Diferentes concentrações foram utilizadas (31.25 to 64000 μg/mL). Os valores de MIC dos OEs de Melaleuca alternifolia, Mentha piperita e Rosmarinus officinalis sobre o isolado MRSP foram 10667 μg/mL, 32000 μg/mL e 42666 μg/mL, respectivamente. Dentre os OEs, o de M. piperita mostrou o menor valor de MIC (5333 μg/mL) e o OE de M. alternifolia o maior valor de MIC (37333 μg/mL) sobre o isolado MSSP. Os OEs apresentaram atividade antibacteriana in vitro e podem ser considerados como alternativas terapêuticas, porém devem ser realizados mais estudos em condições in vitro e in vivo.
  • ItemDissertação de mestrado
    Avaliação da expressão gênica de citocinas e fatores neurotróficos em células tronco mesenquimais caninas pré-condicionadas com extrato de canabis rico em canabidiol
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-05-24) Perino, Vinicius Skau; Amorim, Rogerio Martins; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    As células-tronco mesenquimais (MSCs) são caracterizadas como um tipo de célula-tronco multipotente conhecidas por possuir a capacidade de diferenciação em diversas linhagens celulares, modulação da secreção de moléculas bioativas (fatores neurotróficos, citocinas, entre outros), atua na reparação e regeneração tecidual, características que permitem sua aplicação em doenças degenerativas, imunomediadas e expressa seu enorme potencial dentro da medicina regenerativa. O uso terapêutico da canabis tem experimentado um crescimento significativo ao longo dos anos, em grande parte devido aos efeitos benéficos dos fitocanabinóides, como o canabidiol (CBD) e o Δ9-tetrahidrocannabinol (THC), dentre outros componentes da planta como os terpenos e flavonóides. Estudos têm demonstrado que o sistema endocanabinoide é responsável por funções biológicas cruciais, como neuroproteção, imunomodulação, modulação da dor e inflamação. O pré-condicionamento das células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo canino (cAT-MSCs) utilizando extrato de canabis rico em CBD é uma área emergente de pesquisa que explora os potenciais efeitos dos fitocanabinóides de aprimorar suas propriedades terapêuticas (imunomodulação/ efeitos anti-inflamatórios/ viabilidade e sobrevivência celular/ diferenciação e potencial Regenerativo). O CBD e o THC são os componentes mais estudados e desempenham um importante papel na proliferação, migração, diferenciação e modulação de citocinas e fatores neurotróficos das MSCs in vitro. O objetivo deste estudo in vitro foi avaliar a morfologia e viabilidade celular, assim como a expressão gênica de fatores neurotróficos (BDNF, GDNF e HGF) e citocinas (IL-10, IDO, TNF-α, INF-ɣ e PTGE2) após a estimulação das cAT-MSCs com extrato de canabis rico em CBD. Cinco amostras diferentes de cAT-MSCs, previamente isoladas, caracterizadas imunofenotipicamente (CD44+, CD90+, CD105+, CD34-, CD45-, MHC-II) e diferenciadas (osteogênica, adipogênica e condrogênica), foram pré-condicionadas com concentrações altas (2,25 µM) e baixas (225 nM) do extrato de cannabis rico em CBD por 24 horas. As cAT-MSCs estimuladas com baixa e alta concentração de CBD não apresentaram alterações na morfologia ou na atividade metabólica. O presente trabalho sugere que o perfil de expressão dos fatores neurotróficos (HGF e BDNF) das cAT-MSCs pode ser modulado pelos fitocanabinóides presentes no extrato de canabis rico em CBD, no entanto, o pré-condicionamento das cAT-MSCs com extrato de canabis rico em CBD é uma área de pesquisa relativamente nova, sendo necessário a realização de novos estudos para uma melhor análise do comportamento das cAT-MSCs frente a diferentes extratos, doses e tempo de estimulação in vitro.
  • ItemDissertação de mestrado
    Anatomia patológica comparada – viabilidade da utilização da classificação anatomopatológica humana de osteossarcoma apendicular em caninos (canis familiaris).
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-03-31) Gomes, Marcela da Costa; Hataka, Alessandre; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    O osteossarcoma (OSA) representa de 80 a 85% dos tumores malignos ósseos de cães, sendo uma das neoplasias com comportamento de maior agressividade na espécie, semelhante ao que ocorre nos seres humanos em crianças e adolescentes. Os sistemas de classificação e graduação histopatológicos humanos de tumores ósseos, no entanto, estão mais amplamente consolidados do que os veterinários. O objetivo geral do trabalho foi realizar a comparação entre os sistemas de classificação e graduação histopatológicos estabelecidos pela Organização Mundial da Saúde tanto humanos quanto veterinários, e assim verificar as diferenças e as semelhanças anatomopatológicas da neoplasia nas duas espécies. O marcador anti Ki-67 determinou o índice de proliferação celular. Foi realizada pesquisa retrospectiva e prospectiva em peças cirúrgicas de tumores ósseos em membros apendiculares caninos do Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia/ UNESP, campus de Botucatu, São Paulo. Os diagnósticos obtidos através das classificações e graduações humana e animal foram transformados em proporções dividindo-se a quantia individual pela quantia total e comparadas com teste Chi-quadrado, pelo programa Bioestat. A graduação de osteossarcoma pelo sistema humano resultou em grau I (20,8%), grau II (39,6%), grau III (22,6%) e grau IV (17,0%). Já a graduação pelo sistema veterinário resultou em grau I (90,6%) e grau II (9,4%). Foram comparadas as tabelas de tipificação histológica humana e veterinária pelo teste Chi-quadrado, resultando em p=0,7373, ou seja, não houve diferença estatística significante. Também foram comparadas as tabelas de graduação tumoral humana e veterinária, resultando em p<0,001, ou seja, havendo diferença estatística significante. A princípio, não há, para esta amostra, aplicabilidade da graduação tumoral humana nos tumores ósseos apendiculares primários caninos.
  • ItemDissertação de mestrado
    Priming com INF-Ƴ e TNF-α aumenta potencial imunomodulador de células tronco mesenquimais caninas in vitro
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-03-23) Chimenes, Natielly Dias; Amorim, Rogério Martins [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A meningoencefalite de origem desconhecida (MUO) é uma enfermidade neuroimune em cães, com grande potencial de se tornar um modelo animal natural para a esclerose múltipla. O priming in vitro das células tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo canino (cAd-MSCs) é uma estratégia para potencializar a ação imunomodulatória e imunossupressora das cAd-MSCs. O objetivo deste trabalho foi avaliar o priming com IFN-Ƴ e TNF-α, LCR e soro de cães com MUO nas cAd-MSCs. Para tanto, foi realizado o priming in vitro por 72 horas das cAd-MSCs (P3-P4) em seis grupos: controle (C), com IFN-Ƴ em associação com TNF-α (IFN-Ƴ+ TNF-α), soro controle (C-S), soro de cães com MUO (MUO-S), LCR controle (C-LCR) e LCR de cães com MUO (MUO-LCR) e avaliada a expressão gênica para BDNF, GNDF, HGF, IDO, PTGE2, IL-10, IFN-Ƴ e TNF-α por qPCR e quantificação proteica de GM-CSF, IL-10, IL-2, IL-8 e MCP-1 por ensaio multiplexado. Comparando todos os grupos com o grupo C, o IFN-Ƴ+ TNF-α apresentou aumento de HGF, IDO e TNF-α e IL-8 (p= <0,001), nos grupos C-LCR e MUO-LCR houve aumento de IFN-Ƴ e TNF-α e redução de BDNF e GNDF (p= <0,001), os grupos C-S e MUO-S apresentaram redução na quantificação proteica de IL-10 (p= <0,001), e o grupo C-S teve redução de BDNF e GNDF (p= <0,001) e o grupo MUO-S teve redução de HGF (p= <0,001). Diante dos resultados, a técnica priming IFN-Ƴ + TNF-α demonstrou maior potencial de perfil imunomodulatório com tendência anti-inflamatória em comparação com os demais grupos.
  • ItemDissertação de mestrado
    Investigação sorológica e molecular de Brucella spp. em humanos e cães de ilhas oceânicas e litoral continental
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-04-26) Barros, Noelia Layslla Costa; Appolinário, Camila Michele; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Embora Brucella abortus, Brucella suis e Brucella canis possam infectar humanos e cães, até o momento, nenhum estudo avaliou a circulação dessas espécies em humanos e seus cães, em ilhas e litoral continental. Para atingir este objetivo, este estudo utilizou testes sorológicos (teste de aglutinação em microplacas com 2-mercaptoetanol, ensaio imunocromatográfico e antígeno acidificado tamponado) e um ensaio de reação em cadeia da polimerase (PCR) gênero-específico para a detecção do DNA bacteriano. Nenhuma soropositividade para B. abortus e B. suis foi detectada em soros humanos ou caninos. A soropositividade para B. canis foi observada em 3/148 (2,0%) dos cães avaliados, mas nenhuma das amostras humanas foi positiva para B. canis. Além disso, todas as amostras, de ambas as espécies, foram negativas no ensaio de PCR gênero-específico para Brucella. Os cães soropositivos residiam no litoral continental (município de Guaraqueçaba-PR), porém não eram relacionados. A ausência de soropositividade nas ilhas e a baixa soropositividade no litoral continental pode ser reflexo do isolamento geográfico e sugere o baixo impacto da doença na região. Apesar da ausência de tutores sororreagentes, a presença de cães soropositivos indica a necessidade de medidas preventivas para evitar a transmissão antropozoonótica do patógeno.
  • ItemDissertação de mestrado
    Correção da hipoglicemia neonatal com suplemento hipercalórico em cães nascidos por cesariana
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-04-19) Fuchs, Kárita da Mata; Lourenço, Maria Lucia Gomes [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Estima-se que 20% dos neonatos caninos venham à óbito no período perinatal, cujas causas estão relacionadas a hipoglicemia. Sendo assim, objetivou-se avaliar a eficácia de um suplemento hipercalórico com vitaminas e aminoácidos em neonatos hipoglicêmicos ao nascimento. Noventa e nove filhotes foram divididos em quatro grupos: cesariana normoglicêmicos (CNORMO), cesariana hipoglicêmicos suplementados com hipercalórico (CSUPL), cesariana hipoglicêmicos suplementados com glicose (CGLIC) e parto eutócico controle (EUT). Foram avaliados glicemia, escore Apgar, reflexos neurológicos e temperatura dos neonatos aos cinco, 30 e 60 minutos após o nascimento. Cerca de 73,3% (22/30) das fêmeas submetidas a cesariana foram braquicefálicas. A glicemia média dos filhotes representou cerca de 90% da glicemia materna. No total, 15,1% (14/99) dos neonatos apresentaram hipoglicemia (< 90mg/dL) em M0 e 46,5% (44/99) em M2. Apenas quatro neonatos apresentaram glicemia abaixo de 40 mg/dL no M2, mas sem sinais clínicos. O jejum do filhote enquanto aguardava o período transoperatório e a recuperação anestésica da mãe foi considerado um fator de risco para hipoglicemia. Não houve diferença significativa nas médias de glicemia ou nos padrões de vitalidade entre os grupos tratados com suplemento ou glicose. O uso do suplemento hipercalórico pode ser utilizado para reposição glicêmica, substituindo a glicose, e pode trazer benefícios nutricionais ao filhote, desde que é composto por vitaminas e minerais . A determinação da glicemia materna no pré-parto e a correção desse parâmetro, caso necessário, reduzem as chances do filhote nascer com hipoglicemia; e a correção da glicemia do neonato até 30 minutos após o parto pode contribuir para sua sobrevivência.
  • ItemDissertação de mestrado
    Modulação autonômica cardíaca em felinos domesticos com doença do trato urinário inferior obstrutiva
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-12-15) Molina, Mary Marlene Tarazona; Lourenço, Maria Lucia Gomes [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A doença obstrutiva do trato urinário inferior felino (DTUIFO) causa alterações metabólicas e eletrolíticas que podem alterar o funcionamento do sistema nervoso autônomo (SNA). A variabilidade da frequência cardíaca (VFC) provê dados relevantes sobre o estado do SNA nas diversas afecções. Sendo o objetivo do estudo descrever os padrões característicos da VFC em curto prazo, em gatos com DTUIFO, a fim de se investigar a influência da modulação autonômica na fisiopatologia da doença. Foram utilizados 65 gatos machos divididos em dois grupos, sendo 25 como grupo controle (GC) e 40 com DTUIFO (GO), os gatos do GO foram avaliados quantos a variabilidade da frequência cardíaca (VFC) e pressão arterial sistêmica (PAS) em quatro diferentes momentos a partir da obstrução (M0, M1 M2 e M3). Nos gatos do GC apenas uma avaliação da VFC foi realizada. Na comparação da VFC do GC versus GO (M0), observou-se diferença significativa, dos parâmetros SDNN (tônus simpático e parassimpático), rMSSD (tônus parassimpático), e PAS, sendo maiores no GC. Na comparação de VFC e PAS do GC versus GO nos diferentes momentos se observou diferença significativa em nos parâmetros SDNN (M3), rMSSD (M1) e PAS (M3), sendo maiores no GO em seus diferentes momentos. Concluiu-se que a avaliação da VFC em curto prazo demostrou predominância simpática no GO, observando-se menor VFC, em comparação ao GC.
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    Identificação por espectrometria de massas (MALDI-TOF MS) e efeito in vitro do quaternário de amônio em isolados de Prototheca obtidos de mastite bovina.
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-01-28) Arabe Filho, Marcelo Fagali; Ribeiro, Marcio Garcia [UNESP]; Mioni, Mateus de Souza Riberio; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A mastite bovina causada por algas do gênero Prototheca causa prejuízos significativos aos produtores devido a redução na produção e qualidade do leite, e necessidade de segregação, descarte e reposição de animais infectados pois, até o momento, não existe tratamento eficaz contra o agente; fato que tem motivado ensaios in vitro com diferentes fármacos com efeito algicida em isolados de Prototheca obtidos de vacas com mastite. Ainda, métodos moleculares têm possibilitado o diagnóstico rápido e fidedigno de espécies da alga, em virtude das dificuldades da especiação por métodos fenotípicos. Neste cenário, 4.275 amostras de leite de vacas com mastite clínica amostradas em dez fazendas de alta produção leiteira foram submetidas ao cultivo microbiológico. Os casos clínicos foram classificados quanto a gravidade em leves, moderados e graves. Isolados compatíveis com o gênero Prototheca foram submetidos à identificação a nível de espécies por espectrometria de massas (Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry - MALDI-TOF MS) e a concentração algicida mínima (CAM) in vitro diante do quaternário de amônio (15%). Foram isoladas 44 prototecas (44/4.275=1,02%) de vacas diferentes, das quais 88,6% (39/44) foram diagnosticadas como P. bovis, enquanto 11,3% (5/44) apresentaram identificação somente em nível de gênero (Prototheca sp.) pelo MALDI-TOF MS. Os escores de gravidade clínica 1 e 2 disponíveis em 33 vacas foram observados em 78,8% (26/33) e 21,2% (7/33) das infecções mamárias, respectivamente, com nenhum animal apresentando escore grave ou sinais sistêmicos. O quaternário de amônio apresentou efeito in vitro em 100% (44/44) dos isolados obtidos das vacas, em diferentes concentrações, bem como em três cepas de referência (i.e., P. bovis, P. blaschkeae e P. ciferrii). Nas concentrações de 35ppm, 17ppm e 8ppm ocorreu efeito algicida do quaternário de amônio em 20,4% (9/44), 36,4% (16/44) e 43,2% (19/44) nos 44 isolados obtidos das vacas, respectivamente. Infere-se o predomínio da espécie P. bovis na mastite clínica em vacas, em grandes fazendas de leite, e o efeito algicida do quaternário de amônio em baixas concentrações, indicando a possibilidade de uso deste sanitizante no ambiente de ordenha ou como solução de pré e pós-dipping na profilaxia/controle da alga nas fazendas. Resultados do presente estudo contribuem com a identificação molecular de espécies de Prototheca, com a classificação da gravidade clínica dos casos, e com o efeito algicida do quaternário de amônio, utilizado pela primeira vez em estudo in vitro diante de isolados da alga obtidos de vacas com mastite clínica.
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    Detecção dos Equus caballus papillomavirus em amostras de placa aural equina
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-01-27) Bomberger, Cristiana Raach; Oliveira-Filho, José Paes de; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A placa aural é uma doença cosmopolita, caracterizada por lesões nodulares na pele que raramente regridem espontaneamente. Foram descritos nove Equus caballus papillomavirus (EcPVs), desses, apenas os EcPVs 1, 3, 4, 5 e 6 foram associados à placa aural no Brasil, ocorrendo de forma isolada ou em coinfecção. Os EcPVs 8 e 9 foram os últimos papilomavírus equinos identificados, por isso há poucas descrições sobre suas características de manifestação clínica e sua associação à placa aural não foi avaliada. O objetivo desse estudo foi verificar a presença do DNA dos EcPV 8 e 9, por PCR, em amostras de placa aural de equinos de diferentes regiões do Brasil. No total, 137 amostras foram utilizadas, das quais 108 foram previamente avaliadas quanto a presença do DNA dos EcPVs 1 – 7 (Mira et al., 2018). As demais amostras, foram coletadas para este estudo (n = 29), e avaliadas quanto a presença dos EcPVs 1 - 9. Foram utilizados primers previamente descritos para as PCRs dos EcPVs 1 – 8, enquanto para o EcPV 9, foram sintetizados primers específicos. Para os EcPVs não detectados em nossas amostras, foram sintetizados mini-genes e utilizados como controle positivo nas reações de PCR. À histopatologia, hiperqueratose, hipomelanose e hiperplasia epidémica foram os principais achados. O DNA dos EcPVs 2, 7, 8 e 9 não foi detectado nas amostras avaliadas. Das amostras testadas para os EcPVs 1 – 9, foram identificados os EcPVs 1, 3, 4, 5 e 6, presentes de forma isolada ou em coinfecção, o EcPV 6 foi o tipo viral mais prevalente nas amostras. Não foi observada relação entre o tipo viral detectado e as características clínicas das lesões. Concluímos que os EcPVs 2, 7, 8 e 9 não tiveram associação com lesões de placa aural analisadas e, podem não estar relacionados à etiologia desta enfermidade no Brasil. A utilização de mini-genes foi fundamental para validar as técnicas de PCR e a sensibilidade dos primers utilizados.
  • ItemDissertação de mestrado
    Detecção de Clostridioides difficile em fezes de animais silvestres
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-12-21) Lima, Maiara Caldas; Borges, Alexandre Secorun [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Clostridioides difficile é uma bactéria estritamente anaeróbica e formadora de esporos. Este patógeno está associado a quadros de diarreia (CDI) especialmente em seres humanos com histórico prévio da utilização de antimicrobianos. Sua presença em animais com problemas entéricos já foi descrita em equinos, cães, suínos e bovinos. Isolamentos em animais selvagens são descritos de forma escassa na literatura. Da mesma maneira estes podem atuar como reservatórios e/ou carreadores. O objetivo do presente trabalho foi determinar a ocorrência de C. difficile nas fezes de animais selvagens e comparar duas técnicas de detecção. Foram colhidas amostras de 100 animais de 34 espécies diferentes entre répteis e mamíferos. Estas foram submetidas à qPCR para a detecção da presença do agente (16S) e de suas toxinas (tcdA e tcdB), e ao isolamento bacteriano anaeróbico e multiplex para detecção do perfil toxigênico das colônias. Na qPCR observou-se 61% dos animais a presença do C. difficile, dessas uma foi positiva para tcdA, três para tcdB e 17 para ambas as toxinas. Foi possível o isolamento anaeróbico de 16% das amostras, sendo três isolados positivos para TcdA e TcdB. O C. difficile foi observado em diversas espécies de animais selvagens, assim como a presença de cepas toxigênicas. A técnica de qPCR apresentou maior positividade comparada ao isolamento bacteriano e a presença deste agente infeccioso nas fezes dos animais selvagens ressalta a importância destes como possíveis carreadores de infecção para animais de produção ou humanos.