Teses - Medicina Veterinária - FCAV

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  • ItemTese de doutorado
    Microbiota dental associada a gengivite e periodontite em bovinos jovens
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-08-02) Vaccari, Juliana [UNESP]; Dutra, Iveraldo dos Santos [UNESP]; Júnior, Ellerson Gaetti-Jardim; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Gengivite e periodontite são doenças induzidas pelo biofilme dental polimicrobiano disbiótico e que acarreta um processo inflamatório destrutivo em hospedeiros suscetíveis. O presente estudo teve como objetivo avaliar pelo sequenciamento de nova geração a microbiota gengival de sítios dentários considerados clinicamente saudáveis (n=5) de bovinos com dentição decídua, de sítios com gengivite (n=5) e com periodontite (n=5). As análises da microbiota dental foram agrupadas em sequências únicas denominadas amplicon sequence variance (ASVs). O filo Proteobacteria, foi o mais abundante em sítios dentários saudáveis, com gengivite e periodontite, enquanto o filo Fusobacteriota, representou quase 30% de abundância nos sítios dentários com periodontite. Gêneros como Neisseria, Moraxella e Conchiformibius, foram os mais abundantes nos sítios dentários com gengivite; e Caviibacter, Moraxella e Fusobacterium, foram os mais predominantes nos sítios dentários com periodontite. A microbiota dos sítios dentários com periodontite é mais diversa do que a de sítios dentários com gengivite(p=0,04). Nos três fenótipos avaliados ocorreram diferentes ASVs de Moraxella. Na avaliação da rede de coocorrência foi observado que os filos mais importantes dentro das redes se diferiram entre as três diferentes condições clínicas avaliadas com mais interações positivas nos sítios dentárias com periodontite quando comparado aos outros fenótipos. Assim, o presente estudo contribui de forma inédita no entendimento e observação da microbiota de diferentes sítios dentários de bovinos jovens.
  • ItemTese de doutorado
    Comparação dos efeitos em cães do consumo de β-glucanos extraídos da parede celular de algas ou leveduras
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-06-07) Theodoro, Stephanie de Souza [UNESP]; Carciofi, Aulus Cavalieri; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Objetivou-se avaliar e comparar os efeitos do β-glucanos extraído da parede celular de levedura com o extraído de algas marinhas sobre a composição da microbiota intestinal, produtos de fermentação nas fezes e parâmetros imunológicos e inflamatórios de cães adultos. Para o estudo, uma dieta controle (CON) foi suplementada com B-glucano extraído de levedura (BLEV; 0,115%) ou B-glucano de algas: BA15 (dose de 0,155% de B-glucano de algas marinhas); BA31 (0,31% B-glucano de algas marinhas). Foram utilizados 32 cães, 8 por ração. Estes receberam as rações por 42 dias, sendo coletados sangue e fezes no início e final do período para análise das citocinas, produção ex vivo de intermediários reativos de oxigênio e nitrogênio, atividade fagocítica de neutrófilos e monócitos, proteína C reativa (PCR), parâmetros lipêmicos, concentração de IgA fecal e calprotectina. No meio deste período foi realizado ensaio de digestibilidade e curva pós-prandial de insulina e glicose. No tempo final, fezes frescas ainda foram coletas para avaliar produtos de fermentação. Os dados foram avaliados por análise de variância e comparados pelo teste de Tukey (P<0,05), e quando necessário, análise de covariância foi aplicada. Cães alimentados com B-A31 apresentaram menor IL-2 que B-LEV e menor fagocitose por neutrófilos que os demais tratamentos (P<0,05). Cães alimentados com B-A31 tenderam a apresentar maior IL-10 que CON (P=0,095). O consumo de B-glucano de algas aumentou a produção de óxido nítrico em cultivo celular e a PCR sérica (P<0,05). Cães alimentados com BA15 apresentaram maior digestibilidade aparente de matéria seca, matéria orgânica e energia bruta (p<0,05). Cães alimentados com BLEV tenderam a menor média de glicose e menor tempo para pico da resposta insulínica (p<0,1). A beta diversidade da microbiota fecal de cães na dieta BA31 diferiu das dietas BLEV e BA15. Concluiu-se que B-glucanos de leveduras e algas marinhas apresentaram vias de ações diferentes, pois o B-glucano de algas induziu elevação de PCR, ativação de monócitos medido pela maior produção de óxido nítrico e tendeu a elevar a citocina anti-inflamatória IL-10, sendo que a dieta BA31 apresentou maior capacidade em alterar da microbiota fecal. O β-glucano de levedura tendeu em diminuir a média da concentração de glicose e antecipar o pico da ação de insulina endógena.
  • ItemTese de doutorado
    Caracterização de parâmetros de normalidade de bovinos de corte
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-06-26) Motta, Guilherme Augusto [UNESP]; Santana, Áureo Evangelista [UNESP]; Nociti, Ricardo Perecin; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    As análises hematológicas, bioquímicas séricas e de proteínas de fase aguda contribuem fundamentalmente para estudos diagnósticos, fisiológicos, patológicos e nutricionais em todas as espécies. Considerando a diversidade de variáveis ambientais e raciais é necessária a avaliação pontual de populações para determinação de valores de referência para determinada situação. O estudo objetivou a determinação de valores basais em bezerros de corte em idade de desmame dos principais tipos raciais produzidos no estado do Tocantins – Brasil e na verificação da influência etária nesses parâmetros em touros zebuínos de corte em regime de coleta de sêmen. Os grupos experimentais foram formados por bezerros Nelore, Senepol, bimestiços Nelore e Aberdeen Angus, bimestiços Nelore e Senepol e trimestiços Nelore, Aberdeen Angus e Senepol, oriundos da mesma fazenda de criação e de sistema extensivo com suplementação à pasto com idades semelhantes. Enquanto os touros foram agrupados em três grupos etários distintos dentro do mesmo ambiente de produção. Os hemogramas foram realizados em contador automático de células, as dosagens bioquímicas séricas e metabólicas determinadas por meio de kits comerciais e a dosagem de proteínas de fase aguda através da técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida, todos em apenas um momento. De modo as variáveis estudadas seguiram os padrões já descritos. Os grupos de bezerros apresentaram maior contagem total de leucócitos, atividade sérica de enzimas hepáticas e fosfatase alcalina, teores de cálcio e fósforo devido à fase de crescimento e, portanto, maior atividade metabólica. Também foi observada influência do temperamento nessas variáveis, por exemplo, animais Nelore tiveram maiores concentrações creatinica quinase e glicose sérica, ao passo que os grupos menos reativos tiveram reduções equivalentes. A infestação por parasitas grastrintestinais também mostrou, onde os grupos de maior percentual racial taurino apresentaram menor contagem de hemácias e teor de albumina plasmática. Quanto às proteínas de fase aguda, nos bezerros as diferenças foram constatadas entre os zebuínos, Nelore, e os taurinos, Senepol, sendo relacionadas à rusticidade. Os resultados observados nos touros não demonstraram efeito significativo da idade em todas as categorias analisadas, exceto pela atividade sérica da fosfatase alcalina, que mostrou-se superior nos animais mais jovens, pois possuem maior atividade metabólica óssea. De modo geral, os achados condizem com os registros prévios da literatura. Entretanto, a análise de um universo amostral mais amplo, ou seja, mais rebanhos, pode evidenciar o efeito geográfico sobre os animais. Enquanto, que para os touros, as correlações com outras análises mais detalhadas e de outros tipos, como de imagem, podem contribuir para o estudo de enfermidades crônicas para a espécie.
  • ItemTese de doutorado
    Uso da sílica nanoestruturada SBA-15 como adjuvante de vacina oral para controle de Mycoplasma hyopneumoniae na produção de suínos
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-12-10) Storino, Gabriel Yuri [UNESP]; Oliveira, Luís Guilherme de; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Mycoplasma hyopneumoniae é uma bactéria de difícil controle, uma vez que vacinas comerciais não impedem a colonização e excreção do agente. O presente estudo teve como objetivo avaliar o desempenho de uma vacina de administração oral, composta por antígenos extraídos de Mycoplasma hyopneumoniae e incorporados à sílica mesoporosa ordenada tipo SBA-15, que possui função adjuvante-carreador, visando potencializar a ação da vacina intramuscular comercial. A vacina oral foi administrada em leitões nascidos de fêmeas nulíparas desafiadas com M. hyopneumoniae, com o propósito de promover um incremento na resposta imune contra o patógeno a partir do estímulo do tecido linfoide associado às mucosas (MALT), com início na mucosa intestinal. No total 60 leitões foram divididos em 4 grupos (n=15) submetidos a diferentes protocolos vacinais da seguinte forma, Grupo 1: SBA15 pela via oral + vacina comercial aos 24 dias no desmame, G2: vacina oral ao terceiro dia de vida + vacina comercial aos 24 dias, G3: vacina comercial aos 24 dias e G4: vacina comercial + vacina oral aos 24 dias. No primeiro dia, os leitões foram pesados e a partir do 3º dia, submetidos a colheitas de sangue, para detecção e quantificação de IgG anti Mycoplasma hyopneumoniae, bem como suabes nasais, para o monitoramento de IgA por ELISA, e de suabe orofaríngeo para avaliação da carga bacteriana por qPCR. As colheitas de amostras biológicas foram realizadas periodicamente até o 73º dia a partir do terceiro dia de vida. Aos 41 dias de vida, 15 indivíduos de mesma idade, experimentalmente desafiados com inóculo contendo M. hyopenumoniae foram inseridos na baia dos animais dos grupos (1 a 4) de forma a elevar a pressão de infecção durante período de creche. Ao final do estudo, aos 73 dias, todos os leitões foram eutanasiados e necropsiados para avaliação dos pulmões e colheita de amostras para estimativa de carga bacteriana por qPCR, e para a avaliação histopatológica. Também foram colhidas amostras de lavado traqueobrônquico, submetidas ao teste de qPCR. Os dados quantitativos obtidos nos exames clínicos, físicos e laboratoriais foram submetidos a avaliação dos pressupostos de normalidade e homocedasticidade pelos testes de Shapiro-Wilk e Bartlett, previamente à realização de testes estatísticos paramétricos ou não paramétricos.
  • ItemTese de doutorado
    Avaliação cardíaca de equinos submetidos ao condicionamento em esteira guiado pela concentração de lactato
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-05-08) Santos, Maíra Moreira [UNESP]; Neto, José Corrêa de Lacerda [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    O remodelamento cardíaco que ocorre com o treinamento físico pode ser identificado pela ecocardiografia, a qual permite avaliar a morfologia e a função cardíaca. Objetivou-se avaliar em equinos, o efeito do condicionamento na velocidade correspondente à concentração de 2 mmol/L de lactato, sobre variáveis ecocardiográficas. Foram treinados durante seis semanas em esteira, 12 potros Puro Sangue Árabe (09 fêmeas e 03 machos castrados), com idade de 28,42 ± 3,75 meses e peso corporal de 312,17 ± 17,37 kg, com base na velocidade em que a concentração do lactato plasmático foi igual 2 mmol/L (V2), determinada em teste de exercício incremental (TEI). No mesmo teste, determinou-se a velocidade em que o lactato sanguíneo atingiu 4 mmol/L (V4). Foram realizadas ecocardiografias em repouso nos modos-B e M, Doppler pulsátil de fluxo e Doppler tecidual. A partir de medidas do modo M, foram calculadas a espessura média (EMP) e relativa (ERP) da parede livre do ventrículo esquerdo (VE), massa do VE (mVE), e as frações de encurtamento (FE) e de ejeção (FEj) do VE. As ecocardiografias foram realizadas antes (AT) e depois (DT) do período de treinamento físico, assim como o TEI para a determinação do nível de condicionamento. Empregaram-se o teste t para a comparação ao nível de 5% de significância e a análise por componentes principais (ACP). Todos os animais completaram o programa de condicionamento sem intercorrências. Houve aumento na V2 (AT: 5,2 ± 0,3; DT: 6,7 ± 0,4 m/s) e V4 (AT: 5,8 ± 0,4; DT: 7,6 ± 0,5 m/s) (p < 0,001). O diâmetro diastólico (AT: 9,11 ± 0,72; DT: 9,87 ± 0,75 cm) (p = 0,007), a massa (AT: 1.690,86 ± 372,64; DT: 1.886,90 ± 269,57 g) (p = 0,011) e o volume ejetado (VEj) (AT: 444,60 ± 129,62; DT: 538,40 ± 100,43 mL) (p = 0,042) do ventrículo esquerdo se elevaram. A parede livre do VE em diástole (PLVEd) (AT: 1,87 ± 0,27; DT: 1,84 ± 0,30 cm) e em sístole (PLVEs) (AT: 3,36 ± 0,22; DT: 3,40 ± 0,24 cm) não se modificou (p = 0,654) e (p = 0,617), respectivamente. A ACP reduziu a dimensionalidade de 24 variáveis selecionadas em sete componentes, os quais explicam 84% da variabilidade total. No componente um, o qual explica 22% da variabilidade total, as variáveis que apresentaram maior contribuição foram: átrio esquerdo (AE), débito cardíaco (DC), diâmetro interno do VE em diástole (DIVEd) e sístole (DIVEs), EMP, PLVEd, mVE, espessura do septo interventricular em diástole (SIVd), VEj, FEj, FE, velocidade máxima do enchimento ventricular inicial do fluxo transmitral (Emáx) e sua relação com a velocidade final (E:A). O protocolo de condicionamento empregado foi eficiente, pois melhorou a capacidade aeróbia dos animais. Ocorreu remodelamento cardíaco induzido principalmente pelo treinamento físico, com aumento da massa ventricular e do volume ejetado.
  • ItemTese de doutorado
    Diversidade genética de agentes transmitidos por vetores em quatis (Nasua nasua) em área periurbana no centro-oeste brasileiro
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-03-10) Perles, Livia [UNESP]; Rogério, Andre Marcos; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    - Quatis (Nasua nasua) são procionídeos amplamente distribuídos na América do Sul que se adaptam facilmente a ambientes antropizados, vivendo em contato próximo com animais domésticos e humanos. O presente estudo teve como objetivo investigar a diversidade de ectoparasitas e a ocorrência de agentes transmitidos por vetores (Anaplasmataceae, Mycoplasmataceae, Bartonellaceae, Rickettsiaceae Babesiidae/Theileriidae, Hepatozoidae e Onchocercidae) em quatis e/ou ectoparasitas amostrados em duas áreas urbanas de Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brasil. Entre 2018 e 2019, dos 97 quatis capturados/recapturados foram coletados 2.242 carrapatos (838 larvas de Amblyomma, com maior infestação em janeiro, abril e maio; 1241 ninfas de Amblyomma sculptum e 150 ninfas de Amblyomma dubitatum, com maior infestação em julho, agosto, outubro e novembro; 13 adultos, dentre três machos e cinco fêmeas de A. sculptum; e dois machos e três fêmeas de Amblyomma ovale). Cinquenta e nove piolhos [Neotrichodectes (Nasuicolla) pallidus] foram coletados de 25,7% quatis, representando um novo registro da espécie no centro-oeste do Brasil, com a primeira contribuição morfológica dos estágios de ninfa e ovos e caracterização molecular utilizando os genes 18S rRNA e cox1. Dos 97 quatis amostrados, 77% mostraram-se positivos para Hepatozoon procyonis (gene 18S rRNA); 15,1% para Ehrlichia sp. (gene dsb); 3,6% para Anaplasma sp. (gene 16S rRNA); 89,6% para hemoplasmas (gene 16S rRNA) e 3,6% para Neorickettsia sp. Nenhuma amostra de sangue foi positiva para Bartonella spp. em cultura ou na qPCR e piroplasmídeos na nPCR (nested PCR). Ao analisar os esfregaços sanguíneos e capa leucocitária, 33% e 80%, respectivamente, das amostras apresentaram pelo menos uma microfilária de Mansonella sp. (molecularmente caracterizada com base nos genes cox1, myoHC and hsp70). Hepatozoon procyonis foi detectado em alta prevalência em quatis do centro-oeste do Brasil, com parasitemia flutuando entre as recapturas e aparentemente sem influência nos parâmetros hematológicos e clínicos dos quatis parasitados. Análises filogenéticas baseadas no gene 16S rRNA e ITS posicionaram as sequências de Anaplasma sp. detectadas no presente estudo em um grande clado com outras sequências Anaplasma spp. previamente detectadas em carrapatos e animais silvestres e em um clado com ‘Candidatus Anaplasma brasiliensis’, respectivamente. Com base em seis marcadores moleculares distintos, o presente trabalho descreveu um novo agente Anaplasmataceae, nomeado ‘Candidatus Ehrlichia dumleri’. A filogenia baseada nos genes 16S rRNA e 23S rRNA e qPCR baseado no gene 16S rRNA indicaram a presença de dois genótipos de hemoplasmas em quatis. A estimativa da carga bacteriana de hemoplasmas não mostrou associação com indicadores hematológicos de anemia. Embora as amostras positivas do presente estudo tenham apresentado >99% de identidade com Neorickettsia risticii disponível no GenBank, a real identidade da bactéria detectada em quatis deve ser melhor investigada por meio de isolamento e sequenciamento do genoma completo. O presente estudo mostrou uma alta prevalência de Mansonella sp., sugerindo que quatis podem atuar como hospedeiros de uma nova espécie de Mansonella sp. ainda não descrita dentro da família Onchocercidae. Em relação aos carrapatos, 25,4% das amostras de DNA de carrapatos foram positivas para H. procyonis, 10% para ‘Candidatus Mycoplasma haematonasua', 1,6% para Bartonella spp., 2% para piroplasmídeos [sendo duas sequências diferentes, uma com identidade para Babesia sp. previamente detectada em capivaras (Hydrochoerus hydrochaeris), e outra com identidade para Babesia sp., detectado em gambás (Didelphis albiventris) e carrapatos associados A. dubitatum] e 0,8% para Rickettsia spp. (do Grupo Febre Maculosa [GFM] e Rickettsia belli). Nenhum piolho mostrou-se positivo para os agentes acima mencionados. Carnívoros são considerados importante fonte de infecções humanas com agentes zoonóticos transmitidos por vetores. A detecção de Rickettsia sp. de SFG destaca a importância de estudos de vigilância em fragmentos florestais urbanos. A detecção de piroplasmas em carrapatos de animais negativos pode indicar a importância de Amblyomma spp. na transmissão transovariana/transestadial de Babesia spp. em animais silvestres.
  • ItemTese de doutorado
    Estudo de endoparasitos e ectoparasitos em gatos domésticos de área urbana
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-03-10) Reginaldo, Gisele Moraes dos Santos; Cadioli, Fabiano Antonio [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Atualmente, os animais de estimação têm apresentado uma estreita relação no âmbito familiar. Os felinos domésticos, com seu jeito encantador, são considerados os mascotes mais populares do mundo, com importante papel na sociedade. Estes “pets” são criados para companhia, colaboram no desenvolvimento emocional, social e físico de pessoas, e a opção de escolha pelos felinos está cada vez mais selecionada por conta do estilo de vida moderno, facilidade no manejo e por serem emocionalmente tranquilos. Com isto surge as preocupações em relação a Saúde Pública, pois os gatos podem ser hospedeiros de vários parasitos que apresentam potencial zoonótico, sendo que podem ser transmitidos aos humanos. Os endoparasitos em geral apresentam complicações clínicas para estes animais, como anemia, diarreia, cansaço e também dificuldade respiratória. Adicionalmente, os ectoparasitos podem causar desconforto, prurido generalizado e lesões de pele, com consequentes infecções bacterianas secundárias, diminuindo a saúde e o bem estar destes animais. Foram colhidas amostras de 61 gatos domiciliados que vieram a óbito ou que foram entregues no Centro de Controle de Zoonoses. Com auxílio de um pente fino, foi feita a escovação para coleta dos ectoparasitos. A necropsia parasitológica foi executada para obtenção dos helmintos adultos. Em seguida, uma amostra de fezes foi colhida diretamente da ampola retal, com finalidade de processar a técnica de Sulfato de Zinco e a Técnica de sedimentação Hoffman. Foi realizada a morfologia, morfometria e análise molecular dos helmintos do estudo. O teste do Qui-quadrado ou teste exato de Fisher foram utilizados para as análises estatísticas. Quanto aos resultados, foi possível observar que os felinos domésticos estavam sendo parasitados, por meio das técnicas coproparasitológicas e necrópsia parasitológica, por Ancylostoma spp; Toxocara spp.; Cystoisospora spp.; Giardia spp.; Platynosomun illiciens; Dipylidium caninum, e que as fêmeas tiveram uma maior prevalência (40%) do parasito digenético (Platynossomun illiciens) comparativamente aos do que os machos (11,1%). A utilização das técnicas moleculares auxiliam na identificação da espécie dos helmintos, como houve positividade para Ancylostoma caminum e Platynossomun illiciens do estudo. Sendo assim, concluímos que em ambas as técnicas, coproparasitológicas, necrópsia parasitológica e análise molecular foi possível encontrar positividade para os helmintos e sendo interessante em alguns casos a associação das mesmas, podendo notar que alguns parasitos apresentam potencial zoonótico visto que estes felinos eram considerados domiciliados.
  • ItemTese de doutorado
    Caracterização molecular de Sarcocystis spp. em gambás (Didelphis spp.) e detecção de anticorpos anti-Sarcocystis spp. em equinos das regiões Sudeste e Centro-oeste do Brasil
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-02-24) Santi, Mariele De [UNESP]; Machado, Rosangela Zacarias [UNESP]; Werther, Karin [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Gambás (Didelphis spp.) são hospedeiros definitivos de Sarcocystis neurona, Sarcocystis speeri, Sarcocystis lindsayi e Sarcocystis falcatula. No Brasil, diversos estudos vêm demonstrando a alta frequência de Sarcocystis falcatula-like em esporocistos recuperados dos intestinos de gambás, com grande diversidade nos genes codificadores de antígenos de superfície (SAGs). Neste estudo, a diversidade genética de Sarcocystis spp. oriundos de Didelphis albiventris e Didelphis aurita capturados nos municípios de Campo Grande e São Paulo, foi acessada por meio do sequenciamento de SAG2, SAG3 e SAG4, da primeira região espaçadora interna transcrita (ITS-1) e da subunidade I da citocromo c oxidase (cox1). Adicionalmente, reação de imunofluorescência indireta (RIFI) foi empregada para detecção de anticorpos (IgG) contra S. falcatula-like (Dal-CG23) e S. neurona (SN138) no soro de 342 equinos amostrados nos mesmos municípios. Identificação molecular foi realizada em 16 amostras de DNA obtidas de esporocistos recuperados do intestino de gambás ou merozoítos derivados de cultivo in vitro de Sarcocystis spp. Os fragmentos de ITS-1, cox1, e SAG3 foram clonados, enquanto SAG2 e SAG4 foram sequenciados diretamente dos produtos de PCR. Vinte e sete alelos foram observados em ITS-1, todos filogeneticamente relacionados à S. falcatula-like previamente detectado em aves e/ou em gambás no Brasil. Sarcocystis sp. filogeneticamente relacionado à Sarcocystis rileyi foi evidenciado por cox1 em três gambás. Vinte e um novos alelos SAGs foram descritos, sendo quatro em SAG2 (n=4), 13 em SAG3 (n=13) e quatro em SAG4 (n=7). Nos Imunoensaios utilizando RIFI com ponto de corte de 1:25, anticorpos IgG anti-S. falcatula-like foram detectados em 177/342 amostras de soro equino (51.75%), e anticorpos IgG anti-S. neurona foram detectados em 239/342 amostras (69.88%). Anticorpos IgG contra ambos os isolados foram observados no soro de 132 equinos (38,59%). Ausência de reatividade foi verificada em 16.95% (58/342) animais. A elevada soroprevalência observada neste estudo pode estar relacionada ao baixo ponte de corte utilizado e à presença de gambás infectados com Sarcocystis falcatula-like e Sarcocystis spp. nas áreas onde os equinos foram IX amostrados. Devido à similaridade entre antígenos de superfície detectados nos imunoensaios, relatos de soropositividade contra S. neurona no Brasil podem resultar da exposição dos equinos à outras espécies de Sarcocystis. O papel de outras espécies de Sarcocystis como causa de doença neurológica nos equinos em Brasil permanece incerto.
  • ItemTese de doutorado
    Relationships of prepubertal somatic development and morphological/ultrasonographic attributes of the reproductive organs in nellore heifers with timing of the first calving
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-10-10) Rodrigues, Naiara Nantes [UNESP]; Oliveira, Maria Emilia Franco [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A determinação de potenciais preditores de fertilidade em fêmeas bovinas pode favorecer a seleção de fêmeas mais férteis nos rebanhos. O presente estudo avaliou parâmetros reprodutivos como a contagem de folículos antrais (CFA), biometria ovariana e uterina, características ecotexturais do tecido uterino, área de vascularização do pedículo ovariano e morfometria vulvar, que poderiam predizer se novilhas Nelore pré-púberes terão melhor eficiência reprodutiva nas estações reprodutivas subsequentes. Trinta e nove novilhas Nelore pré-púberes de 22,5 ±0,2 meses de idade foram avaliadas quanto ao peso, escore corporal, morfometria vulvar, biometria uterina e ovariana, ecogenicidade uterina e parâmetros de ecotextura, contagem de folículos antrais (CFA) e diâmetro do folículo dominante em cinco diferentes fases aleatórias da onda folicular. Após a puberdade, as novilhas foram introduzidas em uma estação de monta natural e todas as variáveis avaliadas na pré-puberdade foram comparadas entre novilhas que pariram e aquelas que não pariram durante as duas primeiras estações de monta após a puberdade, bem como entre novilhas que pariram durante a primeira estação reprodutiva, durante a segunda estação reprodutiva e novilhas que não pariram em nenhuma estação reprodutiva. A análise estatística foi realizada usando variância unidirecional (ANOVA) e todos os procedimentos de comparação múltipla aos pares (método Holm-Sidak) para valores médios com efeitos principais significativos ou interações de efeitos principais. Todos os animais que pariram apresentaram maior peso corporal no início (294,2 ± 6,4 kg) e no final do período de estudo (284,9 ± 6,0 kg). Além disso, fêmeas que pariram na primeira estação reprodutiva apresentaram maior peso corporal (304,8 ± 5,9 kg) em relação às fêmeas que não pariram em nenhum momento (273,5 ± 7,2 kg). Ao comparar os parâmetros reprodutivos como potenciais preditores de fertilidade em novilhas que pariram ou não pariram, observamos que características como a contagem de folículos antrais (CFA) diferiu entre os grupos avaliados (P=0,003), de modo que as novilhas que pariram tiveram maior CFA quando comparadas às novilhas que não pariram. No entanto, quando a CFA foi observada nos grupos de novilhas que pariram na primeira estação, segunda estação ou que não pariram, notou-se que novilhas que pariram na primeira estação reprodutiva e novilhas que não pariram em nenhuma estação apresentaram menor CFA do que novilhas que pariram na segunda estação reprodutiva. O diâmetro ovariano foi maior (P=0,03) em novilhas que pariram em uma das duas estações. A área dos vasos sanguíneos do pedículo ovariano também diferiu entre os grupos de novilhas (P=0,03). Já a largura vulvar foi menor nas novilhas que não pariram em nenhuma estação reprodutiva (P= 0,005), demonstrando que este pode ser um bom preditor para a seleção de fêmeas potencialmente mais férteis. As características de ecogenicidade e ecotextura uterina não diferiu entre grupos avaliados, mas foi diferente entre os dias de avaliação. Nossos resultados demonstram que as características avaliadas como possíveis preditores de fertilidade para a seleção de novilhas Nelore mais férteis ainda na vida pré-púbere da fêmea e no momento aleatório da onda folicular são influenciadas por fatores possivelmente relacionados ao momento da onda, necessitando de estudos complementares para determinar de forma segura esses fatores influenciadores e prever com segurança a fertilidade dessas fêmeas nas estações reprodutivas subsequentes.
  • ItemTese de doutorado
    Helmintos parasitas de javalis (Sus scrofa Linnaeus, 1758) selvagens na região norte do Estado de São Paulo.
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020-07-17) Lapera, Ivan Moura [UNESP]; Hoppe, Estevam Guilherme Lux [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Javalis são uma das principais espécies invasoras do planeta, causando impactos à biodiversidade nativa, danos ao ambiente, lavoura e pecuária e são um conhecido reservatório de doenças infecciosas e parasitárias importantes. Considerando-se o desconhecimento do status parasitológico de javalis selvagens no Brasil, o objetivo deste trabalho foi identificar e analisar as helmintoses de javalis (Sus scrofa) de vida livre da região norte do Estado de São Paulo, e avaliar possível interferência sobre a suinocultura local. Para tal, foram necropsiados 35 javalis de vida livre e 18 suínos domésticos, todos provenientes da região de Monte Azul Paulista/SP, área com alta densidade desses animais. Nas amostras de suínos domésticos, provenientes de estabelecimento de suinocultura tecnificada, não foram encontrados macroparasitas. A partir das amostras de javalis de vida livre foram coletados 13.262 espécimes de helmintos de dez espécies diferentes, sendo nove espécies pertencentes ao Phylum Nematoda: Globocephalus urosubulatus (94,3%), Metastrongylus salmi (82,9%), Stephanurus dentatus (71,4%), Strongyloides ransomi (59,3%), Ascarops strongylina (28,6%), Metastrongylus pudendotecus (11,4%), Trichuris suis (8,6%), Ascaris suum (2,9%) e Oesophagostomum dentatum (2,9%); e uma ao Phylum Acantocephala, Macracanthorhynchus hirudinaceus (5,7%). Em exames coproparasitológicos foram identificados ovos de 3 morfotipos diferentes, estrongilídeo, metastrongilídeo e Strongyloides, e a prevalência de parasitismo foi de 86% (19/22). Também foram observados oocistos de Eimeria spp. A contagem de ovos variou de 100 a 1800 ovos por grama de fezes. Os resultados permitem inferir que nematódeos dos gêneros Globocephalus, Metastrongylus, Stephanurus e Strongyloides são predominantes na comunidade parasitária de javalis selvagens da região norte do Estado de São Paulo. Na população estudada não houve influência do sexo nos indicadores de infecção. Apesar do potencial patogênico dos parasitas encontrados, os animais avaliados apresentavam bom escore corporal. Para a amostragem de suínos domésticos analisada, as práticas de biossegurança adotadas pelo estabelecimento de criação foram eficazes em prevenir possível introdução de parasitas a partir de javalis selvagens.
  • ItemTese de doutorado
    Proteoma salivar e microbiomas dental e ruminal de bovinos mantidos em dieta com suplemento proteico
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-12-06) Saraiva, Júlia Rebecca [UNESP]; Dutra, Iveraldo dos Santos [UNESP]; Borsanelli, Ana Carolina; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A boca é um ambiente ecologicamente dinâmico composto por elementos estruturais que lhe conferem uma identidade fisiológica específica, como a deposição de biofilmes dentais e a expressão de proteínas salivares associadas a processos locais e sistêmicos. As doenças periodontais afetam bovinos e outros ruminantes causando impactos na produção e bem-estar animal, e acredita-se que sua etiologia esteja associada ao manejo alimentar dos animais. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito de dieta suplementar proteica e feno de Panicum cultivado em áreas recém-reformadas no proteoma salivar e integridade periodontal, e microbioma dental e ruminal de bezerros em fase de dentição decídua. Foram utilizados 12 bovinos divididos aleatoriamente em dois grupos: dieta base feno (F) e dieta suplementar proteica (SP) durante 60 dias. A saliva foi coletada aos 20 e 60 dias para análise proteômica por espectrometria de massas nanoAcquity UPLC-Xevo QTof MS, software ProteinLynx Global Server (PLGS) e o número de acesso as proteínas foi fornecido pelo banco de dados UniProt para espécie Bos taurus. O exame clínico bucal foi realizado semanalmente pela inspeção da cavidade bucal e sondagem periodontal dos incisivos. Já para o sequenciamento, coletou-se biofilme subgengival e 15mL de conteúdo ruminal no início e término do experimento (0 e 60 dias) para análise de sequenciamento de última geração do gene 16S rRNA. A análise de interação entre tempo e dieta demonstrou significância na incidência de episódios de gengivite entre os dois grupos aos 20 dias e aos 60 e 20 dias da dieta exclusiva de feno. Aos 60 dias da experimentação, mais processos biológicos (9) e imunológicos (11) estiveram alterados na saliva dos bovinos. Proteínas com múltiplas funções foram detectadas na saliva dos animais, principalmente de função antimicrobiana e anti-inflamatória. No microbioma dental, Filos já reconhecidos em bovinos foram identificados, como Proteobacteria, Bacteroidetes, Fusobateria. Os gêneros Moraxella, Neisseria e Lautropia destacaram-se em ambos os momentos. No rúmen, Filos considerados centrais dentro desse ambiente como Bacteroidetes e Firmicutes foram os mais representativos. Não foram observadas diferenças significativas de riqueza e diversidade do microbioma bucal e ruminal dos animais, entretando houve dissimilaridade na composição do microbioma bucal dos bovinos que receberam dieta base feno entre período inicial e final (p= 0.007), e no microbioma ruminal no grupo dieta base feno (p= 0.004) e nos bovinos do grupo dieta suplementar proteica (comparações entre os períodos inicial e final, p= 0.004) bem como entre as duas dietas no momento final (p= 0.005). Aparentemente, dietas com suplemento proteico estimulam a expressão de proteínas salivares com papel protetivo em bovinos, e interferem na modulação dos microbiomas (que ocorre inicialmente no rúmen) e provavelmente refletirá na boca dos animais.
  • ItemTese de doutorado
    Avaliação da perfusão abdominal e biomarcadores para diagnóstico precoce de sepse e lesão hepática em cadelas com piometra
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-01-06) Gasser, Beatriz [UNESP]; Feliciano, Marcus Antonio Rossi [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A sepse ocasiona alta morbimortalidade, principalmente devido ao desenvolvimento da síndrome de disfunção multiorgânica (MODS), complicação decorrente principalmente de má perfusão tecidual. As técnicas utilizadas atualmente para o diagnóstico precoce destas alterações são pouco acuradas, invasivas, de alto risco ou não têm sido provadas em animais. Por estes motivos, este projeto de doutorado objetivou avaliar a perfusão abdominal e intestinal, pelas técnicas de ultrassonografia contrastada (CEUS) e Doppler, os parâmetros físicos, hematológicos e os biomarcadores inflamatórios, de função hepática e renal em cadelas saudáveis e cadelas com piometra, comparar estas variáveis entre os grupos, pacientes em sepse ou não determinada pelos critérios da síndrome da resposta inflamatória sistêmica (SIRS) ou Sequential Organ Failure Assessment (SOFA); correlacionar estas variáveis com os achados do exame histopatológico hepático; com o intuito de desenvolver critérios acurados para o diagnóstico da sepse, das alterações de perfusão intestinal e lesão hepática na espécie canina. Assim, foram utilizadas 17 cadelas com piometra de origem espontânea e 10 cadelas saudáveis, em cada uma delas foram avaliados os parâmetros de perfusão abdominal e intestinal, por meio das técnicas CEUS e Doppler espectral, os parâmetros fisiológicos e laboratoriais rotineiramente utilizados para a monitoração da sepse, função hepática e renal, assim como análise histopatológica de biopsia hepática por Trucut. Após realizar todas estas avaliações, observou-se que a piometra causa redução no volume do fluxo sanguíneo, no pico da velocidade sistólica e no índice de resistividade da aorta abdominal avaliados pelo Doppler espectral; que os pacientes em sepse identificados pelo SOFA apresentaram apenas menor pressão arterial sistólica (PAS), enquanto que os animais em sepse identificados pelo escore SIRS apresentaram menor PAS, picos de velocidade sistólica, volume de fluxo sanguíneo e índices de resistividade da aorta abdominal, assim como na avaliação CEUS maiores intensidades do pico de contraste em pixels do parênquima duodenal. As variáveis identificadas como marcadores de sepse foram: baixa temperatura, leucocitose, neutrofilia, hipoalbuminemia, hiperglobulinemia, aumento da fosfatase alcalina, da relação creatinina-proteína urinária e redução da relação PaO2/FiO2, com estas variáveis o critério diagnóstico foi alteração de no mínimo quatro parâmetros resultando em sensibilidade de 92%, especificidade 87%, valor preditivo positivo 85% e valor preditivo negativo 93%, sendo estes resultados similares aos critérios SIRS com infecção confirmada (75%, 93%, 90% e 82%; respetivamente) e superiores a escala SOFA (75%, 100%,100% e 63%; respetivamente), e a SIRS sem infecção confirmada (75%, 33%, 47%, 63%; respetivamente). Diante disso, determinou-se que a infecção e em pior grau a sepse ocasiona redução do fluxo sanguíneo abdominal, com aumento da perfusão intestinal, adicionalmente que o critério proposto permite a identificação acurada da sepse, o que possibilita uma abordagem mais assertiva da sepse na espécie canina.
  • ItemTese de doutorado
    Desenvolvimento de estratégia profilática para controle de Streptococcus agalactiae e Aeromonas hydrophila em Tilápias do Nilo (Oreochromis Niloticus), vacinadas com bacterinas em veículo de Poli (ácido lático)
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-12-12) Conde, Gabriel [UNESP]; Belo, Marco Antonio de Andrade [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A criação de Tilápias no território nacional tem se destacado dentre as demais espécies cultivadas. A tilapicultura gerou 2,30 bilhões de reais, dentre o montante de 5,96 bilhões faturado pelo setor aquícola. Dentro desta atividade, a biomanipulação do ecossistema aquático é fundamental para maximização de recursos e incremento da produção. Entretanto, o controle sanitário dos peixes é considerado ponto crítico pelo elevado adensamento no processo de criação resultando no aumento de estresse, causando imunossupressão. A diminuição do sistema imunológico causado pelo estresse aumenta a possibilidade da ocorrência de bacterioses responsáveis por elevada mortalidade e consequentemente grande prejuízo econômico ao setor aquícola. A estratégia para evitar surtos causados por bactérias como Aeromonas hydrophila e Streptococcus agalactiae é a vacinação. Nesse contexto, a utilização de adjuvantes (compostos químicos, orgânicos ou poliméricos) na composição vacinal é importante por incrementarem a resposta imunológica e tornar essa resposta mais longeva abrangendo todo o período de criação. Diante disso, o Poli(ácido lático) (PLA), vem sendo estudado como adjuvante (micropartículas e nanopartículas carreadoras) em formulação vacinais combinado inúmeros antígenos. O interesse nesse biomaterial está na capacidade de liberação lenta do antígeno vacinal por longos períodos e por causar reação inflamatória no locus de implantação. Após a implantação, a presença do biomaterial ativa a cascata de coagulação, recrutando polimorfonucleares (PMN) que se aderem ao biomaterial, liberando mediadores inflamatório como interleucina que são quimiotáticos para macrófagos, monócitos, células dendríticas. Embora o PLA desencadeie reação inflamatória, essa não é exacerbada indicando biocompatibilidade. A assimilação e fagocitose das macromoléculas poliméricas, as transformam em monômeros que são convertidos em água e dióxido de carbono no ciclo de Krebs denota o biomaterial como bioabsorvível. Ainda, pode ser incorporado ao PLA substâncias orgânicas como a vitamina E que auxilia a resposta imunológica dos peixes. À vista disso, a incorporação de Aeromonas hydrophila e Streptococcus agalactiae em dispositivo de PLA como veículo vacinal de longa duração, determinar a segurança clínica (biocompatibilidade) após implantação intraperitoneal (IP) e subcutânea (SC), início e duração da resposta imunológica por implantação IP e por fim biodegradação do PLA é útil como estratégia no controle de bacterioses na criação de Tilápias.
  • ItemTese de doutorado
    Elastografia arfi na avaliação da articulação coxofemoral e musculaturas do quadril em cães com displasia coxofemoral
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-12-09) Carneiro, Rafael Kretzer; Feliciano, Marcus Antônio Rossi [UNESP]; Minto, Bruno Watanabe [UNESP]; Uscategui, Ricardo Andrés Ramirez; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A displasia coxofemoral é caracterizada por proporcionar instabilidade do quadril em animais jovens e doença articular degenerativa nos adultos. Desde a primeira descrição em 1935, a radiologia tem sido o principal método diagnóstico em cães. As diferentes projeções do quadril, além de diagnosticar a doença articular, auxiliam na escolha adequada do tratamento e na triagem do paciente, mas não possibilita avaliar características capsulares e musculares, atributos esses que podem ser examinados no exame de ultrassonografia. O objetivo deste estudo foi avaliar a acurácia da ultrassonografia modo-B e elastografia ARFI na avaliação da cápsula articular e musculaturas periarticulares de cães associadas a avaliação Fundação Ortopédica dos animais (OFA) e índice de distração (ID) para o diagnóstico tardio e precoce da displasia coxofemoral. Além disso, objetivou-se propor um protocolo de avaliação ultrassonográfica das estruturas do quadril. Verificou-se que o aumento da rigidez do pectíneo (valor de corte >2,77 m/s) pela elastografia e a espessura da cápsula (valor de corte >0,9mm), ao modo-B, foram associados à animais jovens com índice de distração >0,5 e ambos possuindo correlação positiva. Na avaliação ultrassonográfica modo-B, a presença de sinais de doença articular degenerativa como irregularidades da borda cranial do acetábulo e cabeça femoral foram associados a animais com índice de distração >0,5 com especificidade de 94%. Nos adultos, os achados de doença articular degenerativa pela ultrassonografia foram associados com pacientes classificados como doentes pela OFA (P<0,05). A mensuração da cápsula articular >1,10mm foi diagnóstica para displasia em cães não saudáveis pela OFA. Concluiu-se que os métodos ultrassonográficos podem ser utilizados como adjuvante no diagnóstico da displasia coxofemoral em associação com a avaliação radiográfica em animais jovens e adultos.
  • ItemTese de doutorado
    Efeito da deleção do gene mgtC sobre a patogenicidade de Salmonella Gallinarum em aves susceptíveis
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-05-31) Alves, Lucas Bocchini Rodrigues [UNESP]; Berchieri Junior, Angelo [UNESP]; Freitas Neto, Oliveiro Caetano de [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Salmonella Gallinarum (SG) causa o tifo aviário, doença infecciosa de curso clínico agudo que acomete galináceos de qualquer idade e que resulta em elevada taxa de mortalidade. Durante a infecção sistêmica do quadro tifoide causado por Salmonella Typhimurium (STM) em camundongos, a bactéria expressa o gene mgtC, presente na Ilha de Patogenicidade de Salmonella – 3 (SPI-3). Sua função está aparentemente ligada à multiplicação bacteriana no interior de macrófagos e sua inativação atenua o patógeno. Dessa forma, hipotetizou-se que sua deleção do genoma de SG alteraria a patogenicidade do microrganismo em aves comerciais susceptíveis visto que a infecção sistêmica cumpre papel crucial para o patógeno. Assim, o presente estudo objetivou elucidar a importância do gene mgtC para a patogenicidade de SG. Para isso, foi construída uma estirpe mutante de Salmonella Gallinarum defectiva para o gene mgtC (SG ∆mgtC). Posteriormente, foi avaliada sua capacidade de multiplicação em meio de cultivo que mimetiza o ambiente intracelular dos macrófagos e também nesses tipos de células imunes. Além disso, foi conduzida a infecção com SG ∆mgtC e pela estirpe selvagem de aves susceptíveis para comparar a patogenicidade, infecção sistêmica e a resposta imune induzidas por meio da mensuração de mRNA das citocinas IFN-γ e LITAF por RT-qPCR e pela quantificação da população de macrófagos e linfócitos T CD4+ e CD8+ por imunohistoquímica. Foi observado que mgtC foi necessário na multiplicação de Salmonella Gallinarum em meio acidificado com baixa concentração de Mg2+ e em macrófagos. Porém, só houve menor contagem bacteriana na fase tardia da infecção, sem afetar a citotoxicidade. Experimentos in vivo demonstraram que a deleção de mgtC não alterou a capacidade de invasão bacteriana e nem a contagem microbiana em fígado e baço e a mortalidade total das aves. Entretanto, ao realizar a curva de sobrevivência e analisar a evolução do quadro clínico-patológico notou-se uma progressão mais lenta da doença em aves infectadas com SG ∆mgtC em comparação com aquelas desafiadas com a estirpe selvagem. Além disso, foi necessário 1,36 Log10 de UFC/mL a mais de bactérias mutantes para causar 50 % de mortalidade em comparação com a estirpe selvagem. Ademais, a expressão de mRNA de IFN-γ e LITAF foi semelhante entre grupos infectados, mas maior em relação aos não-infectados. O mesmo foi observado nas populações de macrófagos e linfócitos T CD4+. Por outro lado, a presença de linfócitos T CD8+ foi maior na fase inical da doença provocado pela estirpe selvagem. O papel de mgtC no tifo aviário difere para infecções tifoides em mamíferos, visto que sua deleção atenuou outros sorovares. Assim, a deleção do gene mgtC do genoma de Salmonella Gallinarum não afeta a patogenicidade, mas altera levemente a patogênese.
  • ItemTese de doutorado
    Avaliação dos metabólitos do triptofano e perfil de resposta imune na pele de cães com leishmaniose visceral
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-05-03) Jacintho, Ana Paula Prudente [UNESP]; Vasconcelos, Rosemeri de Oliveira [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A Leishmaniose Visceral (LV) é uma antropozoonose causada pelo protozoário Leishmania infantum, cuja pele é o sítio inicial da infecção, antes da visceralização do parasita. Os efeitos imunopatológicos da resposta imune sistêmica interferem com a função dos órgãos injuriados. A enzima IDO é responsável pelo catabolismo do triptofano e esgota o L-Triptofano do microambiente local, resultando na produção de metabólitos da via quinurenina, comprometendo a função de linfócitos T e resultando em imunossupressão. Existem poucos estudos que correlacionam os metabólitos de triptofano à imunopatogenia da LV canina. Portanto, o objetivo deste estudo foi comparar as lesões cutâneas com a carga parasitária, a imunodetecção de subprodutos do triptofano da via da quinurenina (ácido quinurênico e ácido quinolínico), dos linfócitos Treg, das células dendríticas imaturas e maduras (CD11 e CD83 respectivamente), IL-10 e de macrófagos M1 e M2. Para isso foram utilizados fragmentos de pele (ponta de orelha e plano nasal) de 30 cães com LV (grupo infectado) e de 05 cães não infectados (grupo controle), que foram submetidas à análise imuno-histoquímica. Todas estas variáveis estavam aumentadas no grupo infectado, exceto M1 e CD83, que não diferiram estatisticamente entre os grupos, tanto na orelha quanto no plano nasal. No grupo infectado houve maior proporção de macrófagos M2, de células dendríticas imaturas, ácido quinolínico e quinurênico, IL10 e linfócitos Treg, o que indica a predominância de uma resposta imune Th2, inibição da ativação de linfócitos T e da apresentação eficiente de antígenos. Os metabólitos do triptofano no microambiente cutâneo tiveram um papel imunossupressor durante a infecção por Leishmania infantum, possivelmente contribuindo para a persistência da infecção na pele e com a distribuição sistêmica do parasita.
  • ItemTese de doutorado
    Estratégias para seleção de variáveis em diferentes modelos preditivos para tuberculose animal
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-05-06) Pereira, Leyde Emanuelle Costa; Mathias, Luís Antônio [UNESP]; Arcêncio, Ricardo Alexandre; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    O objetivo deste estudo foi usar diferentes metodologias estatísticas para seleção de variáveis para predizer a presença da tuberculose bovina em um rebanho, e desta forma encontrar as estratégias que identificassem variáveis associadas com a presença de pelo menos um animal positivo dentro de um rebanho. Este procedimento foi aplicado a um banco de dados resultante de um questionário e de testes de tuberculinização aplicados por médicos veterinários da Coordenadoria de Defesa Agropecuária do Estado de São Paulo (CDA). Com base na combinação de métodos clássicos de regressão, foram utilizadas, no capítulo 2, três estratégias de seleção para que se obtivesse uma redução gradativa do número de variáveis com base no conhecimento da epidemiologia da doença. A partir dos dados originais, algumas variáveis foram mantidas e outras criadas, sendo o rebanho a unidade de observação. O capítulo 3 apresenta as etapas relacionadas à utilização de algoritmos de “machine learning” para análises preditivas em saúde animal. A variável resposta foi o rebanho com pelo menos um animal positivo no teste diagnóstico de tuberculose
  • ItemTese de doutorado
    Pré-maturação in vitro de oócitos bovinos com NPPC e vesículs extracelulares obtidas em diferentes fases da onda de crescimento folicular
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-02-17) Nunes, Giovana Barros [UNESP]; Mingoti, Gisele Zoccal [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Oócitos bovinos submetidos à maturação in vitro (MIV) retomam espontaneamente a maturação nuclear, no entanto, este padrão não é observado em relação às maturações citoplasmática e molecular. Desta forma, tais oócitos constituem uma população heterogênea em relação aos eventos que compõem a maturação oocitária para aquisição de competência. Este estudo propôs avaliar os efeitos de um sistema de pré-maturação in vitro (préMIV) de complexos cumulus oócitos (CCOs) bovinos com o uso do bloqueador precursor do peptídeo natriurético tipo C (NPPC) e com vesículas extracelulares (VEs) obtidas de folículos em diferentes fases do desenvolvimento [pré-desvio ~ 7 mm (PreDev); desvio ~8,5 mm (DevF1); pós-desvio ~12 mm (PostDev) e; pré-ovulatório > 12 mm (PreOv)], sobre: (1) a captação das VEs pelas células dos CCOs; (2) a transferência de RNA das VEs para os oócitos; (3) o padrão de compactação da cromatina e aquisição de competência oocitária para o desenvolvimento embrionário e; (4) parâmetros de qualidade dos embriões provenientes deste sistema. Ao final do período de 8 horas do sistema de préMIV foi possível evidenciar, em todos os grupos tratados com VEs (PreDev, DevF1, PostDev e PreOv), a captura das mesmas pelas células dos CCOs, bem como a transferência de RNA proveniente destas vesículas para o ooplasma, sendo que os oócitos do grupo DevF1 apresentaram concentração de RNA aumentada no ooplasma, quando comparados aos oócitos dos demais grupos (P<0.05). Em relação ao padrão de compactação da cromatina (vesícula germinativa – VG – de 0 a 3) dos CCOs, independente do grupo avaliado (Imaturo – imediatamente após a remoção do folículo ovariano, Controle – meio de préMIV sem adição de VEs, PreDev, DevF1, PostDev e PreOv), não houve diferença (P>0.05) quanto às categorias VG0 e VG2; já as categorias de VG1e VG3 diferiram entre os grupos (P<0.05), sendo que o grupo Imaturo apresentou maior taxa de oócitos em VG1 (61,9%), em relação a todos os grupos, e menor taxa de oócitos em VG3 (5,7%) quando comparado aos grupos PreDev (45,4) e PostDev (48,1%) (P<0.05). O cultivo de préMIV associado ou não às VEs não promoveu aumento das taxas de clivagem (Controle 82%, PreDev 81,5%, DevF1 75%, PostDev 76% e PreOv 76,9%) (P>0.05) e desenvolvimento embrionário (Controle 43,6%, PreDev 38,6%, DevF1 48,1%, PostDev 38,3% e PreOv 40,4%) (P>0.05). Em relação aos parâmetros de qualidade embrionária, o grupo PostDev apresentou maior número de blastômeros em relação ao grupo Controle (P<0.05), porém as avaliações de potencial de membrana mitocondrial e porcentagem de células apoptóticas não diferiram, independente do tratamento (P>0.05). Concluímos, portanto, através dos achados na literatura, que o trabalho aqui apresentado é o primeiro a utilizar um sistema de pré-maturação in vitro de complexos cumulus oócitos bovinos enriquecido com vesículas extracelulares e, evidenciamos, a partir dos resultados que o sistema permitiu a interação entre as células do complexo cumulus oócitos e vesículas extracelulares, independente da fase do desenvolvimento folicular em que as vesículas foram obtidas. Adicionalmente, foi possível evidenciar melhorias na qualidade dos embriões sugerindo efeitos benéficos deste sistema.
  • ItemTese de doutorado
    Marcadores de resistência a antimicrobianos em sistemas produtivos de bovinos
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-02-18) Ramos, Thamiris Naiasha Minari; Dutra, Iveraldo dos Santos [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    Nos sistemas produtivos de bovinos, as fezes e o solo representam dois componentes importantes no compartilhamento de bactérias resistentes a antimicrobianos. O objetivo do presente estudo foi o de avaliar a presença de marcadores de resistência a antimicrobianos em bactérias isoladas de amostras de solo e de fezes de bovinos. Foram avaliadas amostras de cinco propriedades rurais com diferentes manejos produtivos e com diferentes perfis na utilização de antibióticos: duas de produção leiteira, duas de criação de gado de corte e um confinamento. Amostras de fezes (n=276) e de solo (n=142) foram cultivadas em meios seletivos para a detecção de microrganismos pertencentes à ordem Enterobacterales e gênero Staphyloccocus sp e posteriormente analisada a concentração inibitória mínima para classe de beta-lactâmicos, quinolona, tetraciclina e macrolídeos. As amostras foram submetidas à extração de DNA para detecção dos principais grupos de marcadores de resistência a antimicrobianos relacionados às seguintes classes: aminoglicosídeos, beta-lactâmicos, estreptograminas, macrolídeos, tetraciclinas, sulfonamidas e vancomicina. Nas 50 amostras de fezes selecionadas para serem analisadas pela reação da cadeia da polimerase quanto a presença de marcadores de resistência aos principais antimicrobianos utilizados na medicina veterinária e humana, foram detectados os marcadores para beta-lactâmicos (ampC e blaSHV, blaTEM) e macrolídeos (ermB e ermC) em todos os sistemas produtivos, com exceção para blactx-m que foi detectado em 3 amostras (6%) no sistema de criação de corte e ermA em 1 amostra (2%) no sistema de criação de gado de leite. Nas 11 amostras composta de solo, somente foram detectadas na criação de gado de leite em 3 amostras (27%) com marcador de resistência para tetM (tetraciclina) e 2 amostras (18%) com marcador de resistência para sul2 (sulfonamida), respectivamente. Na análise fenotípica, foram isoladas nas amostras fecais e do solo bactérias da ordem Enterobacterales, com concentração inibitória mínima alta para amoxicilina, amoxicilina – ácido clavulânico e azitromicina (CIM > 8 mg/L), assim como para Imipenem e Tetraciclina (CIM > 0,5) com exceção ao ciprofloxacino, com crescimento em diluições ≤ 0,125 mg/L. A presença de bactérias resistentes aos beta-lactâmicos e macrolídeos nas fezes e no solo em sistemas produtivos de bovinos evidencia a sua importância como reservatórios de microrganismos resistentes e um potencial perigo no contexto da saúde única.
  • ItemTese de doutorado
    Leptospirose em Didelphis albiventris (gambá-de-orelha-branca) e em humanos em Minas Gerais no período de 2001 a 2017
    (Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2020-07-21) Silva, Talita Ribeiro [UNESP]; Mathias, Luis Antonio [UNESP]; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
    A leptospirose é uma zoonose causada por bactérias do gênero Leptospira. O objetivo deste trabalho foi estudar a ocorrência de Leptospira spp. em Didelphis albiventris (gambás-de-orelha-branca) na região Sul de Minas Gerais, avaliar a ocorrência de leptospirose em humanos no Estado de Minas Gerais no período de 2001 a 2017 e analisar a relação entre a precipitação pluviométrica e a taxa de incidência de leptospirose humana no Estado de Minas Gerais de janeiro de 2001 a dezembro de 2017. Com relação à pesquisa com os gambás-de-orelha-branca, foram testados na MAT sete amostras de soro mas não foram encontrados animais sororreagentes nem foi obtido isolamento das amostras de urina. Em humanos em Minas Gerais, no período de 2001 a 2017, foi realizado um estudo observacional do tipo ecológico. O número de casos de leptospirose variou de 53 a 112 por ano, a taxa incidência variou de 0,99 a 7,14 casos por 1.000.000 habitantes, a taxa de mortalidade variou de 1,10 a 11,43 óbitos por 10.000.000 habitantes e a taxa de letalidade variou de 8,22 a 20,99 óbitos por 100 casos. A distribuição anual demonstrou um padrão de sazonalidade dos casos de leptospirose. Ao longo dos meses, a maior ocorrência da doença foi observada nos períodos chuvosos, de outubro a março. Nos meses de transição entre a estação chuvosa e a seca (abril) e da estação seca para a chuvosa (setembro) ainda foi observado um número maior de casos que poderiam estar associados às chuvas do mês anterior ou ainda às chuvas de final e início de estação, respectivamente. Nos demais meses, os casos que ocorreram não apresentam relação direta com a precipitação, pois são meses com baixa pluviosidade. Analisando a série histórica verificou-se que picos da taxa de incidência de leptospirose ocorreram após picos de precipitação. Embora muitas pesquisas tenham demonstrado a ocorrência de anticorpos contra Leptospira spp. em gambá-de-orelha-branca em outras localidades, na região Sudoeste de Minas Gerais não se encontraram sororreagentes nem se obteve multiplicação em meio EMJH. No Estado, a doença ocorreu mais em homens, brancos, adultos, tendo o ambiente urbano e o domiciliar como os mais importantes para o contato com a bactéria. O presente estudo também demonstrou que no Estado de Minas Gerais a leptospirose é endêmica e que a sazonalidade dos casos está fortemente associada ao aumento da precipitação pluviométrica.