Desenvolvimento de solução de desinfecção cavitária a base denisina e suas implicações na interface adesiva

Abstract

Este trabalho desenvolveu uma solução de desinfecção cavitária à base de Nisina, um peptídeo utilizado para conservação de alimentos, avaliou a consequência dessa aplicação nas propriedades mecânicas e biológicas da interface adesiva. Utilizou-se 100 dentes humanos hígidos e recém-extraídos, divididos em 2 grupos: I (Corte Imediato), C (Ciclagem Termomecânica). Os espécimes foram submetidos envelhecimento mecânico (120.000 ciclos) e térmico (5.000 ciclos) para avaliar os resultados da resistência de união de maneira imediata e pós ciclagem. Foram subdivididos de acordo com a concentração de Nisina aplicada (n=10): controle (sem aplicação de solução de Nisina – SB), controle positivo (aplicação de Digluconato de Clorexidina 0,12% - CP), solução de Nisina com concentração 0,5% (N05), solução de Nisina com concentração 1,0% (N1) e solução de Nisina com concentração 1,5% (N1,5). A superfície de esmalte foi removida dos espécimes, expondo a superfície dentinária. A Nisina, assim como a Clorexidina, foi aplicada após condicionamento ácido e antes da aplicação do adesivo (Single Bond). A resina composta (Filtek Z250) foi aplicada através da técnica incremental. Foram avaliadas a resistência de união, através de teste de microtração, de maneira imediata e longitudinal, e a atividade antibacteriana através do teste de difusão em ágar. Uutilizou-se a microscopia confocal laser para avaliar a penetrabilidade da Nisina modificada por Rodamina na dentina e a atividade gelatinolítica por meio da zimografia in situ. Os espécimes resultantes da microtração foram avaliados em microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os resultados obtidos foram submetidos ao teste estatístico de normalidade, e ao teste ANOVA, seguido do teste de Tukey (5%). Os resultados do teste de microtração (p=0,0016) foram, em Mpa: I 26,04±2,11A e C 25,24±1,08B. Nos subgrupos foram: SB 26,69±3,56AB, CP 25,09±3,43ª, N0525,09±3,43A,N125,54±2,24A, N1,524,44±1,49. Na microscopia confocal laser, foi confirmada a penetrabilidade da Nisina no substrato a partir da análise das imagens. Os resultados obtidos foram submetidos à análise estatística, sendo eles: CP119,98±12,17ª, N05 124,13±12,47ª, N1 176,37±7,04B, N1,5 233,50±9,87C. A inibição de MMPs foi submetida a teste estatístico: SB2226,70±14,85D, CP171,78±4,97C, N05 129,96±3,97B, N1 120,31±3,74B e N1,5 109,54±4,21ª. Observou-se que a Nisina não causou diminuição significativa da resistência de união, enquanto o grupo C apresentou resultados menores comparados ao grupo I. Observou-se que a Nisina possui capacidade de inibição de Streptococcus através do teste de difusão em ágar. A Nisina também foi capaz de penetrar no substrato e inibir metaloproteinases, sem alterar o modo de fratura das restaurações. Sendo assim, os resultados obtidos demonstram que a Nisina possui características interessantes para a evolução de estudos posteriores envolvendo desinfecção cavitária.

This work developed a cavity disinfection solution based on Nisin, a peptide used for food preservation, evaluated the consequence of this application on the mechanical and biological properties of the adhesive interface. 100 healthy and recently extracted human teeth were used, divided into 2 groups: I (Immediate Cutting), C (Thermomechanical Cycling). The specimens underwent mechanical aging (120,000 cycles) and thermal aging (5,000 cycles) to evaluate bond strength results immediately and after cycling. They were subdivided according to the applied Nisin concentration (n=10): control (no application of Nisin solution - SB), positive control (application of 0.12% Chlorhexidine Digluconate - CP), Nisin solution with 0 concentration .5% (N05), Nisin solution with 1.0% concentration (N1) and Nisin solution with 1.5% concentration (N1.5). The enamel surface was removed from the specimens, exposing the dentin surface. Nisin, like Chlorhexidine, was applied after acid etching and before application of the adhesive (Single Bond). Composite resin (Filtek Z250) was applied using the incremental technique. The bond strength was evaluated through microtensile test, immediately and longitudinally, and the antibacterial activity through the agar diffusion test. Confocal laser microscopy was used to assess the penetrability of Nisin modified by Rhodamine in dentin and the gelatinolytic activity by means of in situ zymography. The specimens resulting from microtraction were evaluated in scanning electron microscopy (SEM). The results obtained were submitted to the statistical test of normality, and to the ANOVA test, followed by the Tukey test (5%). The results of the microtensile test (p=0.0016) were, in Mpa: I 26.04±2.11A and C 25.24±1.08B. The subgroups were: SB 26.69±3.56AB, CP 25.09±3.43ª, N0525.09±3.43A N125.54±2.24A, N1.524.44±1.49. In confocal laser microscopy, the penetrability of Nisin in the substrate was confirmed based on image analysis. The results obtained were submitted to statistical analysis, as follows: CP119.98±12.17ª, N05 124.13±12.47ª, N1 176.37±7.04B, N1.5 233.50±9.87C. The inhibition of MMPs was submitted to a statistical test: SB2226.70±14.85D, CP171.78±4.97C, N05 129.96±3.97B, N1 120.31±3.74B and N1.5 109.54 ±4.21a. It was observed that Nisin did not cause a significant decrease in bond strength, while group C showed lower results compared to group I. It was observed that Nisin has the ability to inhibit Streptococcus through the agar diffusion test. Nisin was also able to penetrate the substrate and inhibit metalloproteinases, without altering the fracture mode of the restorations. Thus, the results obtained demonstrate that Nisin has interesting characteristics for the evolution of further studies involving cavity disinfection.