Influência de extratos vegetais nos fatores de virulência de Candida albicans em biofilme: estudo in vitro

Abstract

Cepas isoladas de infecções graves por Candida albicans expressam inúmeros fatores de virulência e a compreensão destes fatores permite esclarecer os mecanismos inerentes ao patógeno no processo infeccioso, assim como ferramentas terapêuticas que modulem a expressão destes fatores e permitam o controle de infecções persistentes. O objetivo deste estudo foi analisar a influência de 4 extratos vegetais no crescimento deste fungo quando em bifilme, assim como na expressão dos fatores de virulência (proteinase, fosfolipase e hemolisina) de C. albicans. Para isso, biofilmes de 48 horas de C. albicans (ATCC 18804) foram expostos a diferentes concentrações dos extratos glicólicos de Hamamelis virginiana, Persea. americana, Cynara scolymus L e Stryphnodendro barbatiman M, por 5 minutos e 24 h, para verificar a atividade antifúngica (redução em relação ao controle), e a secreção de proteinase, fosfolipase e hemolisina, utilizando meios especificos. Todos os extratos testados foram efetivos na redução do biofilme de C. albicans. Quando em contato por 5 min os extratos foram capazes de reduzir o biofilme em 50% em média, reduções mais expressivas foram encontradas depois de 24 h de exposição. O extrato de P. americana (25 mg/mL) reduziu o biofilme em 90%, em relação ao controle, seguido de C. scolymus (100 mg/mL), que reduziu em 85%. A secreção de proteinase foi alterada, tanto em 5 min como em 24 h, sendo a Pz (atividade enzimática) média de 0,69, em relação ao controle Pz= 0,49. Cynara scolymus foi o extrato que induziu a maior Pz média na concentração de 100 mg/mL, 0,73 e 0,78, quando tratados por 5 min e 24 h, respectivamente, em relação ao controle (Pz=0,48) (p<0,0001). A secreção de fosfolipase sofreu alteração depois do tratamento, sendo o extrato de S. barbatiman (100 mg/mL) o mais efetivo em 24 h, com Pz de 0,74 em relação ao controle (Pz= 0,50) (p<0,0001). A secreção de hemolisina foi alterada pela exposição ao extrato de H. virginiana (12,5 mg/mL) em 5 min de exposição. Em 24 h todos os extratos foram capazes de alterar o padrão hemolítico da cepa testada, sendo o extrato de H. virginiana (12,5 mg/mL) a apresentar Pz= 0,70. Os extratos vegetais testados demostram potencial antifúngico; e influenciam negativamente a secreção dos fatores de virulência testados, podendo ser apontados como ferramentas terapêuticas alternativas visando a redução da morbidade das infecções causadas por este patógeno.

Strains isolated from severe Candida. albicans infections express numerous virulence factors, which suggest the understanding of these factors allows to clarify the mechanisms inherent to the pathogen in the infectious process, as well as therapeutic tools that modulate the expression of these factors and allow the control of persistent infections. Biofilms of 48 hours of C. albicans (ATCC 18804) were exposed to different concentrations of the glycolic extracts of Hamamelis virginiana and Persea. americana, Cynara. scolymus L and Stryphnodendron. barbatiman M, for 5 minutes and 24 h, to verify the antifungal activity, and secretion of proteinase, phospholipase and hemolysin. All extracts tested were effective in reducing the biofilm of C. albicans. When in contact for 5 min the extracts were able to reduce the mean of 50% of the biofilm. More significant reductions were found after 24 h of exposure. The extract of P. americana (25 mg/ml) reduced biofilm by 90% compared to control, followed by C. scolymus (100 mg/ml), which reduced by 85%. The enzymatic activiti (Pz) of proteinase was altered, both in 5 min and 24 h, the mean Pz being 0.69, in relation to the control Pz = 0.49. C. scolymus was the extract with the highest mean Pz at the concentration of 100 mg/ml, 0.73 and 0.78, when treated for 5 min and 24 h, respectively, in relation to the control (Pz = 0.48) (p <0,0001). Phospholipase secretion was altered after treatment, with S. barbatiman (100 mg/ml) being the most effective in 24 h, with Pz of 0.74 in relation to the control (Pz = 0.50) (p <0,0001). Hemolysin secretion was altered by exposure to H. virginiana (12.5 mg/ml) in 5 min of exposure. In 24 h all the extracts were able to change the hemolytic pattern of the tested strain, being the H. virginiana extract (12.5 mg/ml) to present Pz = 0,70. The tested plant extracts show antifungal potential; and negatively influence the secretion of the virulence factors tested, and can be indicated as alternative therapeutic tools aiming at reducing the morbidity of the infections caused by this pathogen