Bioatividade dos ácidos retinoico e ascórbico e carregamento em hidrogel termossensível sintético para regeneração endodôntica

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dc.contributor.advisorHebling, Josimeri [UNESP]
dc.contributor.authorFernandes, Lídia de Oliveira
dc.date.accessioned2024-04-03T13:33:54Z
dc.date.available2024-04-03T13:33:54Z
dc.date.issued0024-03-01
dc.description.abstractEste estudo avaliou o potencial do ácido ascórbico (AA) e do ácido retinoico (AR) isolados e associados a hidrogéis de Pluronic F-127 (P) e colágeno (Col) para potencial aplicação para procedimentos de regeneração endodôntica. Células da papila apical humana (hAPCs) foram obtidas de terceiros molares humanos hígidos (N=4) e caracterizadas por citometria de fluxo. No Estudo 1, foi investigado o efeito bioativo dose-reposta do AR e AA sobre hAPCs. Os seguintes grupos experimentais foram estabelecidos: controle negativo – CN (α-MEM), controle veículo – CV (α-MEM + 0,17% DMSO), AR 0,1, 1 e 10 µM e AA 3, 30 e 300 µM (n=8). Foram realizados ensaios de viabilidade (alamarBlue, 1, 3 e 7d), formação de matriz mineralizada (Alizarin Red, 14d), síntese de colágeno total (Sirius Red, 1 e 7d) e expressão de genes relacionados à regeneração endodôntica (RT-qPCR, 1d e 7d). No Estudo 2, hidrogéis de P foram formulados e testados quanto à citocompatibilidade com hAPCs. Hidrogel de colágeno (Col) foi utilizado como controle positivo e testados hidrogéis de P (%m/v) P15%, P17,5%, P20%, P22,5%, P25% e P30% (n=8). As células foram cultivadas sobre ou sob hidrogéis recém-preparados ou armazenados por 4 meses e a viabilidade foi avaliada após 1, 3 e 7d, (alamarBlue e Live/Dead). No Estudo 3, AR 0,1 µM e AA 300 µM foram incorporados, isolados ou associados, ao hidrogel P25% e ao hidrogel de Col. Os grupos experimentais (n=10): Col, Col+AA, Col+AR, Col+AA+AR, P25%, P25%+AA, P25%,+AR, P25%+AA+AR foram avaliados em cocultura de hAPCs com células endoteliais (HUVECs) quanto à viabilidade celular (alamarBlue, 1, 3 e 7d), formação de matriz mineralizada (Alizarin Red, 14d), síntese de colágeno total (Sirius Red, 7 e 14d), migração celular ativa (Transwell, 1d), todos por contato indireto. A expressão de genes relacionados a regeneração endodôntica (RT-qPCR, 1d) foi avaliada inserindo os biomateriais em segmentos radiculares de incisivos bovinos para avaliação da regeneração pulpar in situ (n=6). Os dados foram analisados com testes t, ANOVAs e pós-testes específicos (α=5%). AR 10 µM apresentou citotoxicidade para hAPCs. AA 300 µM aumentou a viabilidade celular, síntese de colágeno total e formação de matriz mineralizada. AR 0,1 µM e AA 300 µM exerceram maior efeito sobre a modulação de genes relacionados à produção de matriz extracelular, angiogênese e quimiotaxia. O cultivo sobre o hidrogel aumentou a viabilidade em 1 e 3d, enquanto o cultivo sob o hidrogel aumentou a viabilidade em 1d e reduziu após 7d para todas as concentrações. A citocompatibilidade das hidrogéis armazenados por 4 meses foi semelhante à dos hidrogéis recém-preparados, exceto para P30%. Col+AA, Col+AR e Col+AA+AR aumentaram a viabilidade celular. P25%+AR aumentou a síntese de colágeno total e P25%+AA+AR aumentou a formação de matriz mineralizada. No modelo in situ, modulação da expressão gênica foi observada para Col+AA, Col+AR, PL25%+AR+AA e P25%+AR. Foi concluído que AR 0,1 µM e AA 300 µM bioestimularam hAPCs e a associação dessas moléculas a hidrogéis de P ou Col resultou em biomateriais com potencial aplicação para procedimentos de regeneração endodôntica.pt
dc.description.abstractThis study evaluated the potential of ascorbic acid (AA) and retinoic acid (RA) alone and associated with Pluronic F-127 (P) and collagen (Col) hydrogels for potential application in endodontic regeneration procedures. Human apical papilla cells (hAPCs) were obtained from healthy human third molars (N=4) and characterized by flow cytometry. First, the dose-response bioactive effect of RA and AA on hAPCs was investigated. The following experimental groups were established: negative control - CN (α-MEM), vehicle control - CV (α-MEM + 0.17% DMSO), RA 0.1, 1 and 10 µM and AA 3, 30 and 300 µM (n=8). Cell viability (alamarBlue, 1, 3, and 7d), mineralized matrix formation (Alizarin Red, 14d), total collagen synthesis (Sirius Red, 1 and 7d), and the expression of genes related to endodontic regeneration (RT-qPCR, 1d and 7d) were evaluated. P-hydrogels were then formulated and tested for cytocompatibility with hAPCs. Collagen hydrogel (Col) was used as a positive control and P hydrogels (%m/v) P15%, P17.5%, P20%, P22.5%, P25% and P30% were tested (n=8). Cells were seeded on or under fresh or 4 months stored hydrogels, and viability was assessed (alamarBlue and Live/Dead; 1, 3, and 7d,). Finally, AR 0.1 µM and AA 300 µM were incorporated, alone or in combination, into the P25% hydrogel and the Col hydrogel. The experimental groups (n=10) Col, Col+AA, Col+RA, Col+AA+RA, P25%, P25%+AA, P25%,+RA, P25%+AA+RA were evaluated in coculture of hAPCs with endothelial cells (HUVECs) for cell viability (alamarBlue, 1, 3 and 7d), mineralized matrix formation (Alizarin Red, 14d), total collagen synthesis (Sirius Red, 7 and 14d), active cell migration (Transwell, 1d), all by indirect contact. Expression of genes related to endodontic regeneration (RT-qPCR, 1d) was evaluated by inserting the biomaterials into bovine root segments to assess pulp regeneration in situ (n=6). Data was analyzed using t-tests, ANOVAs and specific post-hocs (α=5%). AR 10 µM showed cytotoxicity for hAPCs. AA 300 µM increased cell viability, total collagen synthesis, and mineralized matrix formation. RA 0.1 µM and AA 300 µM had a greater effect on the modulation of genes related to extracellular matrix production, angiogenesis, and chemotaxis. hAPCs seeding on the hydrogel increased viability at 1 and 3d, while seeding under the hydrogel increased viability at 1d and decreased it after 7d for all concentrations. The cytocompatibility of hydrogels stored for 4 months was comparable to that of freshly prepared hydrogels, except for P30%. Col+AA, Col+RA, and Col+AA+RA increased cell viability. P25%+AR increased total collagen synthesis and P25%+AA+AR increased mineralized matrix formation. In the in situ model, modulation of gene expression was observed for Col+AA, Col+RA, PL25%+RA+AA and P25%+RA. It was concluded that AR 0.1 µM and AA 300 µM biostimulated hAPCs and the association of these molecules with P or Col hydrogels resulted in biomaterials with potential application in endodontic regeneration procedures.pt
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
dc.description.sponsorshipFundação de Amparo à Pesquisa do Espírito Santo (FAPES)
dc.description.sponsorshipIdFAPESP: 2022/07140-1
dc.description.sponsorshipIdCAPES: 001
dc.identifier.citationFernandes LO. Bioatividade dos ácidos retinoico e ascórbico e carregamento em hidrogel termossensível sintético para regeneração endodôntica [dissertação de mestrado]. Araraquara: Faculdade de Odontologia da UNESP; 2024.
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/11449/254933
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Estadual Paulista (Unesp)
dc.rights.accessRightsAcesso restrito
dc.subjectHidrogéispt
dc.subjectPolpa Dentáriapt
dc.subjectRegeneração Tecidual Guiadapt
dc.subjectTretinoínapt
dc.subjectÁcido ascórbicopt
dc.subjectHydrogelspt
dc.subjectDental Pulppt
dc.subjectGuided Tissue Regenerationpt
dc.subjectTretinoinpt
dc.subjectAscorbic Acidpt
dc.titleBioatividade dos ácidos retinoico e ascórbico e carregamento em hidrogel termossensível sintético para regeneração endodôntica
dc.title.alternativeBioactivity of retinoic acid and ascorbic acid and loading into synthetic thermoreversible hydrogels for endodontic regenerationen
dc.typeDissertação de mestradopt
unesp.campusUniversidade Estadual Paulista (Unesp), Faculdade de Odontologia, Araraquarapt
unesp.embargo24 meses após a data da defesa
unesp.examinationboard.typeBanca pública
unesp.graduateProgramOdontologia - FOAR 33004030059P1
unesp.knowledgeAreaEndodontia
unesp.researchAreaInovação biotecnológica aplicada à avaliação e desenvolvimentos de novos materiais e regeneração tecidual

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