Meio de cultura condicionado, rico em fatores de crescimento secretado por células tronco mesenquimais, para o enriquecimento dos biocurativos.

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Data

2018-02-26

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Universidade Estadual Paulista (Unesp)

Resumo

As células tronco mesenquimais tem por definição a autorrenovação, fonte de proliferação e a diferenciação celular em várias linhagens, sendo cartilagem, osso e tecido adiposo. Quanto características funcionais destacam-se cinco características: Suporte estrutural ou arcabouço, controle da inflamação, inibição da apoptose, ação anti-fibrose e por fim a diferenciação, cada um sendo responsável por secretar citocinas e hormônios de crescimento. As plaquetas, os hormônios de crescimento e fase de remodelamento de feridas crônicas abrangem várias etapas, começando pela fase da hemostasia e terminando na fase do remodelamento que vai garantir a força e o fechamento da ferida. Cada fase tem sua importância e secretam também inúmeros fatores de crescimento e citocinas importantes. A linha de curativos biológicos vem sendo desenvolvida há 15 anos no Laboratório de Engenharia Celular. Os resultados com o uso destes biocurativos têm sido excelentes, no entanto observa-se que quanto mais antiga é a lesão, ou maior a idade, maior é também a dificuldade no fechamento da área, e o risco de infecção secundária aumenta. Diante disto, encontrou-se uma oportunidade de melhoria do produto com os avanços no cultivo de células tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo, esta técnica propicia a obtenção de diferentes fatores de crescimento que modulam o fechamento de feridas. Uma das etapas do projeto foi avaliar pacientes idosos com feridas crônicas acima de três anos, a média obtida dos hormônios de crescimento comparados com indivíduos saudáveis foi maior em todos os casos, destacando-se o FGF-2 e o PAI-1. Na etapa seguinte Identificou-se maior dificuldade técnica para a quantificação fenotípica das células quando na presença de HDP comparado com SFB, pela formação de macroagregados formados, no entanto, nenhuma modificação do fenótipo esperado foi identificado. A dosagem das citocinas presentes no meio condicionado das CTMh em ambos os grupos estudados: SFB e HDP, mostraram desempenho diferentes, foi realizado pool da triplicata experimental realizada para o processamento das amostras. Das seis citocinas dosadas IL1- β, IL-6, IL-8 IL-10, TNF, e IL-12p70, somente as IL-6 e IL-8 tiveram níveis significativos detectados.
Mesenchymal stem cells are by definition self-renewal, a source of proliferation and cell differentiation in various strains, being cartilage, bone and adipose tissue. As for functional characteristics, five characteristics stand out: structural support or framework, inflammation control, inhibition of apoptosis, anti-fibrosis action and finally differentiation, each one being responsible for secreting cytokines and growth hormones. Platelets, growth hormones and chronic wound remodeling phase span several stages, beginning with the hemostasis phase and ending at the remodeling phase that will ensure strength and wound closure. Each phase has its importance and also secrete countless important growth factors and cytokines. The line of biological dressings has been developed for 15 years in the Laboratory of Cellular Engineering. The results with the use of these bio-curatives have been excellent, however, it is observed that the older the lesion, or the greater the age, the greater the difficulty in closing the area, and the risk of secondary infection increases. In view of this, there was an opportunity to improve the product with advances in the cultivation of mesenchymal stem cells derived from adipose tissue, this technique provides the achievement of different growth factors that modulate the closure of wounds. One of the steps of the project was to evaluate elderly patients with chronic wounds over three years, the average obtained from growth hormones compared to healthy individuals was higher in all cases, especially FGF-2 and PAI-1. In the next step was identified greater technical difficulty for the phenotypic quantification of the cells when in the presence of HDP compared to FBS, by the formation of macroaggregates formed, however, no modification of the expected phenotype was identified. The dosage of the cytokines present in the conditioned medium of the MHT in both groups studied: SFB and HDP, showed different performance, a pool of experimental triplicate was realized for the processing of the samples. Of the six cytokines dosed IL-6, IL-6, IL-8 IL-10, TNF, and IL-12p70, only IL-6 and IL-8 had significant levels detected.

Descrição

Palavras-chave

Curativo, Citocinas, Técnica de cultura de células, Healing, Cytokines, Cell culture technique

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