Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Araraquara

URI Permanente para esta coleçãohttps://hdl.handle.net/11449/151790

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Estudo da interação in vitro de peptídeos sintetizados a partir da região RBD do SARS-CoV-2 com o receptor ECA-2
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-09-29) Borges, Anna Carolina Toledo ; Costa, Paulo Inácio da
O SARS-CoV-2 surgiu em 2019 na China e rapidamente se espalhou pelo mundo causando uma pandemia com mais de três anos de duração e com quase 15 milhões de mortes, segundo a estimativa da Organização Mundial da Saúde (OMS, 2022). Responsável por causar a COVID-19, uma nova forma de síndrome respiratória aguda e grave, abalou o mundo economicamente e demograficamente. Graças aos avanços tecnológicos o genoma viral foi rapidamente sequenciado e identificado 4 importantes proteínas estruturais: a glicoproteína de superfície (S) – responsável pela entrada no vírus na célula do hospedeiro; a glicoproteína de membrana (M); a fosfoproteína do nucleocapsídio (N); e, a proteína do envelope (E). A descoberta da região da proteína S capaz de promover a ligação do vírus ao receptor na célula alvo, denominado de RBD (Receptor-Binding Domain), permitiu por meio de estudos in sílico o desenho e síntese de peptídeos para o entendimento da interação vírus-célula. Neste sentido, este trabalho teve como proposta a análise da sequência predita da proteína S correspondente ao RBD para a síntese dois peptídeos denominados E7 selvagem (E7w) e E7 com a mutação L452R (E7mut). A síntese manual foi feita em suporte sólido de rink-amida com grau de substituição de 04-06mesh/g, usando a estratégia Fmoc/tBu. Os peptídeos sintetizados foram caracterizados pela espectrometria de massas e suas qualidades avaliadas por HPLC. O estudo da interação dos peptídeos com a ECA-2 foi realizado em um novo sistema proposto neste trabalho usando sensores eletroquímicos para imobilização da enzima e análise das interações pela inibição da transdução do sinal eletrônico na superfície do eletrodo de trabalho. Como resultado, ambos os peptídeos apresentaram excelentes interações com o receptor ECA-2 nas concentrações de 1 e 10ng. Entretanto, a mutação L452R no peptídeo E7 revelou maior eficiência de interação quando comparada com a forma selvagem. Portanto, conclui-se que o modelo de plataforma proposto para o estudo de binding vírus-receptor é de grande relevância e que a mutação estudada permitiu corroborar no entendimento da eficiência do SARS-CoV-2 (variante P.4 da linhagem B.1.1.28) na infecção das células possuindo o receptor EAC-2 e consequentemente sugerir que as variantes com maior transmissibilidade possam apresentar aspectos semelhantes a esse, avaliado neste trabalho.
Influência da idade nos efeitos do estresse psicossocial sobre a ansiedade e cognição em camundongos fêmeas
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-07-12) Souza, Fernanda Victorino de ; Souza, Ricardo Luiz Nunes de ; Souza, Lucas Canto de ; Souza, Daniela Baptista de
Estudos pré-clínicos indicam que o estresse pode estar associado ao desenvolvimento de doenças neuropsiquiátricas como ansiedade, depressão e prejuízo cognitivo. Os transtornos de ansiedade apresentam alta prevalência e acometem majoritariamente as mulheres em meia-idade. Entretanto, ainda são limitados os estudos na neurociência básica em que fêmeas são utilizadas e, especificamente, na investigação da influência da idade sobre as consequências do estresse. Dessa maneira, esse trabalho busca avaliar a influência da idade sobre as respostas defensivas e cognitivas em camundongos fêmeas adolescentes e adultas submetidas ao estresse psicossocial induzido através do Estresse de Testemunho de Derrota Social (ETDS). Camundongos Swiss-Webster fêmeas adolescentes e adultas foram expostas a 10 dias de EDTS. Após a última sessão foram realizados os seguintes testes comportamentais relacionados à (i) ansiedade: Teste de Interação Social (TIS); Labirinto em Cruz Elevado (LCE) e Campo Aberto (CA); (ii) avaliação da memória de curta duração: Teste de Reconhecimento de Objetos (RO), e (iii) depressão: Teste de Esguicho de Sacarose (TES). O protocolo ETDS induziu aumento de evitação social e de respostas relacionadas à ansiedade (TIS e LCE), além de prejuízo cognitivo (RO) apenas nas fêmeas adultas, sem alterar o perfil das respostas comportamentais relacionadas à depressão (TES). Frente aos dados obtidos, verifica-se que o modelo de estresse de testemunha da derrota social se mostra como uma importante ferramenta na investigação das consequências emocionais e cognitivas relacionadas ao estresse psicossocial em camundongos fêmeas. Adicionalmente, nosso estudo demonstrou que a idade exerce uma importante influência sobre estas respostas, uma vez que apenas as fêmeas adultas apresentaram aumento de respostas relacionadas à ansiedade e prejuízo cognitivo como consequência do estresse psicossocial.
Planejamento, síntese e avaliação farmacológica de derivados de ácidos borônicos como inibidores da protease principal de SARS-COV-2
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-03-28) Lopes, Juliana Romano ; Santos, Jean Leandro dos
O SARS-CoV-2, causador da COVID-19, é um vírus do gênero β-coronavírus identificado em 2019. Até o mês de Agosto de 2023 estima-se mais de 769 milhões de casos confirmados de COVID-19 e mais de 6 milhões de mortes relacionadas a infecção por esse novo coronavírus no mundo. Com aprovação das vacinas, a letalidade da COVID-19 diminuiu consideravelmente atingindo atualmente um patamar de 1,9%, mas a infecção pelo vírus ainda é comum mesmo em pessoas com esquema vacinal completo. A grande circulação do vírus causa também o aparecimento de diferentes cepas, que pode representar uma preocupação futura. Poucas intervenções terapêuticas são possíveis para o tratamento da COVID-19. O Paxlovid, um dos únicos medicamentos efetivos contra o vírus foi aprovado recentemente no Brasil, mas ainda apresenta incertezas frente ao seu uso no tratamento de casos severos. O planejamento e desenvolvimento de novos compostos antivirais frente a SARS-CoV-2 e outros coronavírus é de grande importância para que haja diferentes alternativas para o tratamento da COVID-19, bem como, no aparecimento de novos vírus desse gênero. A protease principal desses coronavírus (3CLpro) é essencial para as etapas de replicação viral e constituí um alvo potencial para o planejamento de compostos ativos. O composto FL-166, identificado em estudos frente ao vírus SARS-CoV, demonstrou um valor potente de Ki = 40 nM. Com base em sua estrutura química, derivados de ácidos borônicos foram planejados com uso de docking molecular e sintetizados. Dos 34 compostos sintetizados, 16 foram avaliados em estudos de inibição enzimática frente as proteases 3CLpro e PLpro de SARS-CoV-2 e apresentaram atividade de inibição <5%, com isso, não foram selecionados para determinação de IC50. Dessa forma, conclui-se que os derivados de ácidos borônicos neste estudo foram inativos frente a inibição do alvo proposto.
Aspectos afetivos, cognitivos e volitivos da atitude alimentar
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-02-22) Martins, Bianca Gonzalez ; Campos, Juliana Alvares Duarte Bonini
Introdução: A atitude alimentar representa o relacionamento do indivíduo com sua alimentação e pode ser investigado a partir de aspectos afetivos que se referem à influência das emoções no processo alimentar, cognitivo, que envolve o processamento de informações (motivação, satisfação, percepção) no âmbito da alimentação e comportamentais/volitivos que abordam a predisposição ao consumo alimentar propriamente dito. Objetivos: i) avaliar o apetite emocional em três amostras de adultos brasileiros, obtidas antes e após o início da pandemia de COVID-19; ii) apresentar a versão em português e avaliar as propriedades psicométricas da Motivation for Dietary Self-control Scale (MDSC), da Satisfaction with Dietary Behavior Scale (SWDB) e da Dietary Goal-Desire Incongruence Scale (DG-DI) para amostra de adultos; iii) investigar a incongruência desejo-meta, motivação para autorregulação da ingestão alimentar e satisfação com o comportamento alimentar desses indivíduos de acordo com características amostrais; e iv) avaliar aspectos sociais e a autopercepção dos participantes de seus hábitos alimentares na pandemia de COVID-19. Métodos: Trata de estudo transversal. O apetite emocional foi investigado a partir do Emotional Appetite Questionnaire (EMAQ), aplicado antes (2019) e após início da pandemia (2020-2021). As escalas MDSC, SWDB e DG-DI foram utilizadas para investigação da motivação para autorregulação da ingestão alimentar, satisfação com o comportamento alimentar e incongruência desejo-meta na alimentação, respectivamente. Os instrumentos psicométricos passaram por adaptação transcultural e avaliação das evidências de validade e confiabilidade dos dados. O apetite emocional foi investigado com base no modelo circumplexo que considera valência e ativação das emoções. Os escores das escalas MDSC, SWDB e DG-DI foram comparados pelo teste t-Student ou Análise de Variância (ANOVA) a dois fatores, com pós-teste de Bonferroni (α=5%). A autopercepção dos hábitos alimentares foi investigada a partir de questão aberta, avaliada por análise de similitude. Resultados: A amostra foi composta por 323 adultos antes da pandemia (média de idade=19,7 [desvio-padrão(DP)=1,5] anos; 75,2% mulheres) e 1.921 adultos após seu início (média de idade=24,9 (DP=4,6) anos; 74,2% mulheres]. Emoções negativas e pouco ativadas (ex., deprimido, aborrecido) foram associadas à redução do consumo alimentar, enquanto emoções negativas e altamente ativadas (ex., ansiedade) foram relacionadas a seu aumento. Não houve diferença no apetite emocional antes e após o início da pandemia. Maior incongruência desejo-meta foi observada entre mulheres, praticantes de dietas, indivíduos com sobrepeso/obesidade e aqueles que avaliam a própria alimentação como ruim. Indivíduos que se alimentam acompanhados, não praticam dietas e não possuem excesso de peso apresentaram maior satisfação com seu comportamento alimentar. Durante a pandemia, os participantes relataram realizar as refeições em casa e perceberam impacto da ansiedade sobre sua alimentação. Indivíduos com sobrepeso/obesidade também relataram preocupação com o peso. Conclusões: os dados obtidos com os instrumentos foram válidos e confiáveis. O sexo, a prática de dietas, a autoavaliação da alimentação e o estado nutricional antropométrico foram relevantes para avaliação de aspectos afetivos e cognitivos da alimentação. Houve alterações percebidas nos hábitos alimentares das pessoas durante a pandemia, sendo relevante acompanhar essas no contexto pós-pandêmico.
Mecanismo de ação e atividade in vitro e in vivo do complexo tris(1,10-fenantrolina)ferro(II) frente a Mycobacterium tuberculosis
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-02-26) Demarqui, Fernanda Manaia ; Pavan, Fernando Rogério
O tratamento disponível contra a tuberculose é composto por uma combinação de medicamentos antimicobacterianos, isoniazida, rifampicina, etambutol e pirazinamida para casos de tuberculose sensível a medicamentos. No entanto, o regime de tratamento é longo, com duração de seis meses ou mais, e associado a efeitos colaterais tóxicos. Este trabalho busca, baseado em trabalhos anteriores do grupo, aprofundar o estudo sobre o Complexo ([Fe(fen)3]2+) como um possível candidato a fármaco contra a tuberculose e outras micobactérias não tuberculosas (MNT). Para tanto, experimentos in vitro foram realizados para avaliação da atividade do complexo frente as diferentes micobactérias; o mecanismo de ação foi determinado através do Sequenciamento Completo do Genoma de mutantes espontaneamente resistentes e a eficácia in vivo foi avaliada em modelo experimental de camundongos BALB/C. Para M. tuberculosis os resultados obtidos mostram que o Complexo ([Fe(fen)3]2+) possui sinergismo a fármacos de primeira linha além de ter melhora em sua atividade em concentrações fisiológicas de NaCl. Mutações encontradas no genoma de mutantes resistentes apontam que o Complexo atua em processos relacionados a síntese de parede bacteriana, resultado que foi corroborado pela avaliação da morfologia celular após exposição ao tratamento por microscopia eletrônica de varredura (MEV). In vivo, o Complexo mostrou-se altamente efetivo não sendo observado crescimento bacteriano após tratamento de camundongos infectados com M. tuberculosis. Os casos de doenças, causadas pelas chamadas MNT vem aumentando a cada ano. O tratamento dessas infecções é por vezes mais longo do que da tuberculose. O Complexo ([Fe(fen)3]2+) foi ativo contra três isolados clínicos de MNT. No ensaio de cinética bacteriana, ele teve comportamento bactericida contra a cepa padrão de M. abscessus. Em síntese, os resultados obtidos sugerem que o Complexo ([Fe(fen)3]2+) pode representar uma alternativa promissora no arsenal terapêutico contra a tuberculose e infecções por micobactérias não tuberculosas, oferecendo uma abordagem inovadora e potencialmente mais eficaz para o tratamento dessas doenças.
Obtenção de acetato de isoamila a partir de óleo fúsel oriundo da destilação alcoólica em usinas sucroalcooleiras
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-12-19) Tavares, Leandro Vitorino ; Masarin, Fernando
O Brasil se destaca como um dos maiores produtores de biocombustíveis do mundo. Em relação à produção de etanol, o Brasil ocupa a segunda posição no ranking global, ficando atrás apenas dos Estado Unidos. Somente na safra 2020/2021, segundo dados da Companhia Nacional de Abastecimento (CONAB) foram produzidos aproximadamente 30 bilhões de litros de etanol. Um dos subprodutos obtidos na destilação do etanol é o óleo fúsel que é uma mistura de álcoois com pesos moleculares superiores ao etanol que se concentra em uma determinada região da coluna de retificação e precisa ser removida do processo para evitar que ocorra perdas de etanol no processo de destilação. Dentre os componentes do óleo fúsel, o que possui a maior concentração é o álcool isoamílico ou 3-metil-1-butanol, alcançado valores próximos de 40% (massa/massa) da composição do óleo fúsel. A maioria das usinas do Brasil dosam este subproduto no etanol hidratado produzido por não possuir ou desconhecer uma forma de se reutilizar o mesmo, visto que possui valor comercial muito baixo. O presente estudo tem como objetivo de produzir acetato de isoamila com elevada pureza a partir da reação de álcool isoamílico (previamente obtido de óleo fúsel) com um ácido carboxílico, no caso o ácido acético, em presença de um ácido forte como catalisador. Este éster obtido com alto teor de pureza é utilizado como flavorizante na indústria de alimentos por conferir aroma de banana aos produtos e possui alto valor agregado. O rendimento alcançado na purificação de álcool isoamílico foi de aproximadamente 80%. Já em relação à síntese de acetato de isoamíla, obteve-se rendimento médio de 60,6%. O rendimento global da produção de acetato de isoamila a partir de óleo fúsel concentrado foi de 22,5%, indicando ser uma alternativa tecnicamente viável para aproveitamento do óleo fúsel.
Sistemas de liberação de fármacos baseados em nanosuspensão de mesalazina e complexos polieletrolíticos para potencial aplicação na colite ulcerativa
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2022-01-20) Pereira, Amélia Aparecida Rocca ; Gremião, Maria Palmira Daflon ; Ferreira, Leonardo Miziara Barbosa ; Universidade Estadual Paulista (Unesp)
A retocolite ulcerativa (RU) é uma das doenças inflamatórias intestinais (DII) que afetam parte da população mundial por causarem intensa inflamação do TGI (trato gastrintestinal). A terapia consiste em manter a remissão da doença inibindo a ativação da cascata inflamatória, sendo a MSZ (mesalazina) eficaz em casos leves e moderados, no entanto, é um desafio no tratamento manter uma concentração adequada do fármaco na mucosa do cólon, uma vez que o fármaco requer várias administrações diárias (>2g/dia) por apresentar rápida absorção no estômago e intestino delgado e consequentemente dispondo de uma concentração insuficiente no cólon. Atualmente, o avanço da tecnologia farmacêutica tem proporcionado diversos sistemas promissores para vetorização de fármacos direcionados à sítios específicos, buscando superar as limitações das formulações convencionais. Neste trabalho, desenvolveu-se nanosuspensões (NS) incorporadas em complexos polieletrolíticos (PECs) como potencial estratégia para vetorização da MSZ ao cólon. Os PECs foram compostos por quitosana (QS), alginato (ALG) e ftalato de hidroxipropilmetilcelulose (HP), polímeros naturais e mucoadesivos, propriedades que contribuem em manter uma maior permanência do fármaco na mucosa inflamada. Para obtenção dos sistemas nanoestruturados foi utilizado o método de complexação polieletrolítica, a qual se incorporou o fármaco em sua forma solubilizada e em nanosuspensões (obtida pelo método de Bottom-up). As nanosuspensões consistem em dispersões coloidais submicrométricas com intuito de aumentar a solubilidade de fármacos pouco solúveis em água, como a MSZ, aumentando suas taxas de dissolução, viabilizando a transposição às barreiras biológicas e retenção a tecidos específicos. Foi avaliado a influência do pH em diferentes proporções de policátion (QS) e poliânions (ALG/HP) para obtenção das nanoestruturas. As amostras apresentaram resultados favoráveis (427nm/0,5/+30,5mV-pH4) (227nm/0,5/+24,8mV-pH6) e verificou-se que a concentração de 1,66mg/ml foi a mais adequada para a incorporação do fármaco. Além disso, as nanosuspensões foram comparadas com o fármaco disperso molecularmente e o percentual de eficiência de associação apresentou resultados significativos (59 e 61%). A microscopia de varredura ilustrou a forma esférica das partículas com uma distribuição uniforme. Avaliando a estabilidade dos sistemas, houve redução significativa no diâmetro com menor proporção de CS em pH 4, no PDI a adição de HPMC e maiores proporções de CS proporcionou obtenção de partículas monodispersas e no potencial zeta, houve um aumento significativo na densidade de carga com maior proporção de CS. Assim, a utilização de nanosuspensões pode ser uma estratégia promissora para aumentar o teor de encapsulação de fármacos pouco lipofílicos.
Sistema de desinfecção por ultravioleta-C para controle de infecções hospitalares
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-03-22) Cunha, Tiago Azevedo ; Almeida, Ana Marisa Fusco
A expansão da demanda por novas soluções para o controle de infecções hospitalares tem acontecido de forma mais acelerada após o início da pandemia causada pelo vírus SARS-CoV-2. Todos os problemas gerados por esse tipo de doença em ambiente hospitalar passaram a ser avaliados com maior rigor. Dessa forma, o surgimento de novas tecnologias para auxiliar nesse problema foi impulsionado, dentre as soluções que tem ganhado evidência, a que mais tem destaque é a tecnologia da radiação ultravioleta-C (UVC), principalmente por sua conhecida e estabelecida capacidade de inativação e eliminação de qualquer microrganismo, seja bactéria, fungo ou vírus. Este trabalho busca comprovar a eficácia dessa tecnologia no controle de infecções hospitalares em ambiente real por meio do desenvolvimento de dois equipamentos de desinfecção, o primeiro por exposição direta em superfícies e o segundo por redução da carga microbiológica do ar por recirculação e desinfecção. Para este estudo de validação da dose de radiação fungicida e bactericida, foram utilizados microrganismos de importância para a saúde como o fungo Candida albicans e bactérias das espécies P. aeruginosa e K. pneumonae. Os ensaios para o equipamento de exposição direta demonstraram a capacidade de eliminação total das amostras contendo C. albicans em 20 minutos, ou seja, obteve-se a esterilização. Para as bactérias obteve-se valores superiores a 99% no mesmo tempo. Nos ensaios com o equipamento de desinfecção do ar em ambiente hospitalar obtiveram-se resultados de redução de carga biológica do ar de 99,15% para UTI de isolamento e 95,6% para UTI neonatal, em unidades formadoras de colônias (UFC). Ao final do trabalho foram validados os equipamentos de desinfecção que se tornaram produtos para serem inseridos no mercado, o primeiro sendo uma câmara de desinfecção capaz de ser aplicada para jalecos, EPIs e instrumentos médicos e o segundo uma unidade autônoma de recirculação e desinfecção do ar.
Estudo da inibição da neurotransmissão glutamatérgica no hipocampo ventral sobre os parâmetros comportamentais e cardiovasculares basais induzidos pelo estresse crônico repetido
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-09) Scarambone, Bianca Meneghetti ; Santiago, Cristiane Busnardo ; Crestani, Carlos Cesar
A tecnologia quimiogenética de Receptores projetados ativados exclusivamente por medicamentos projetados (DREADD) foi utilizada para silenciamento neuronal induzido por Clozapina-N-Óxido (CNO). Foram utilizados DREADD+ que é DREADD hM4D Gi-acoplado, fundido com mCherry sob o controle do promotor CaMKIIa (neurônio glutamatérgico) e DREADD- que é a proteína verde fluorescente sob controle do promotor CaMKIIa. Os resultados demonstraram que os animais DREADD+ tratados com veículo e submetidos ao estresse crônico de restrição repetido (CRS) apresentaram um aumento na PAM basal sem alterações na FC basal quando comparados com os animais que não foram estressados (naive). Os animais DREADD+ tratados com veículo ou CNO e submetidos ao CRS não apresentaram alterações nas atividades simpática e parassimpática cardíacas, e na FC intrínseca quando comparados com os animais naive. Além disso, os animais DREADD- tratados com veículo ou CNO e submetidos ao estresse agudo de restrição (RS) não apresentaram alterações na PAM e FC basais, atividades simpática e parassimpática cardíacas, e na FC intrínseca quando comparados com os animais naive. Os resultados mostraram também que os o animais DREADD+ tratados com veículo e que foram submetidos ao CRS apresentaram um aumento do tempo de permanência no centro da arena no teste do campo aberto bem como um queda do tempo na periferia da arena, sugerindo um efeito do tipo ansiolítico nos animais cronicamente estressados. O tratamento com CNO nos animais DREADD+ que foram submetidos ao CRS reverteu esse efeito no teste do campo aberto, sugerindo que a neurotransmissão glutamatérgica do hipocampo ventral (HV) medeia esse efeito do tipo ansiolítico nos animais cronicamente estressados. Os animais DREADD+ tratados com veículo ou CNO que foram submetidos ao CRS não apresentaram alterações no teste do labirinto em cruz elevado (LCE), no teste de esguicho de sacarose ou no teste do nado forçado (TNF) quando comparados com os animais naive. Os dados do presente estudo mostraram também que os animais DREADD- tratados com veículo e submetidos ao RS apresentaram uma redução no número de entradas nos braços abertos no teste do LCE quando comparados com os animais naive, sugerindo um efeito do tipo ansiogênico nos animais agudamente estressados. Os animais DREADD- tratados com veículo ou CNO submetidos ao RS não apresentaram alterações dos testes do campo aberto, do esguicho de sacarose e no TNF quando comparados com os animais naive. Diante dos presentes resultados, pode-se concluir que a neurotransmissão glutamatérgica do HV tem um papel facilitatório do efeito ansiolítico induzido pelo CRS. Além disso, também pode-se concluir que o estresse crônico causa um aumento da PAM basal e o estresse agudo causa um efeito do tipo ansiogênico.
Avaliação da eficácia da Taurina na Dermatite Seborreica: estudo clínico piloto fase I e II
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-12-15) Cacoci, Érica Savassa Pinto ; Chin, Chung Man
A dermatite seborreica é uma alteração crônica, não contagiosa e recorrente, em que ocorre inflamação da pele e apresenta-se na forma de placas eritematosas e descamativas, localizadas em áreas mais oleosas como couro cabeludo, face, colo e dorso. O tratamento convencional pode ser realizado com o uso de medicamentos antifúngicos e anti-inflamatórios, e, em muitos casos de forma contínua. A taurina que é um aminoácido sulfurado, vem sendo estudada devido alto poder antioxidante e anti-inflamatório e neste estudo piloto inédito investigamos os efeitos da solução de taurina em couro cabeludo de pacientes com dermatite seborreica. Um total de 30 pacientes foram selecionados entre setembro de 2022 e fevereiro de 2023 após aprovação do comitê de ética CAAE número 57093622.5.0000.5426. A fase I do estudo piloto foi realizada em dez (10) voluntários sadios para verificar a ocorrência de efeitos adversos. Na fase II, trinta (30) pacientes com dermatite seborreica no couro cabeludo foram divididos em dois grupos de 15 pacientes cada. O primeiro grupo foi tratado com a solução taurina e o grupo controle com a solução sem taurina, em homecare e submetidos a avaliação durante 4 semanas consecutivas. Os pacientes foram avaliados por tricoscopia com luz polarizada e não polarizada, considerando 3 níveis de eritema, descamação e prurido. Os resultados mostraram que 100 % dos pacientes do grupo tratado com a solução de taurina observaram melhora no prurido desde a primeira semana de uso, além de melhora no eritema e na descamação nas primeiras semanas de tratamento. Todos os participantes ficaram satisfeitos com os resultados, enquanto o grupo controle não teve melhora significativa, após o final do período de tratamento. O estudo demonstrou também que não houve relação entre Fototipo e a dermatite seborreica nesses pacientes. Assim, os resultados do estudo piloto permitem concluir que a taurina reduz os sinais de eritema, descamação e prurido apresentados no couro cabeludo de pacientes com dermatite seborreica, sem efeitos adversos. O estudo proporciona oportunidades para sua continuidade em ensaios clínicos mais robustos.
Desenvolvimento, caracterização e ensaios biológicos in vitro de nanocápsulas de quinizarina para uso em terapia fotodinâmica com potencial de aplicação em doenças inflamatórias
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-12-13) Amaral, Stéphanie Rochetti do ; Primo, Fernando Lucas
A psoríase consiste em uma doença cutânea inflamatória crônica, com mecanismos imunopatogênicos complexos, sendo caracterizada pela da hiperproliferação de queratinócitos, responsáveis pelo desenvolvimento das lesões cutâneas características. Contudo, os tratamentos utilizados atualmente não proporcionam ação direcionada, sendo desejável o desenvolvimento de terapias mais específicas. No presente trabalho foram desenvolvidas nanocápsulas contendo Quinizarina (NC/QZ) avaliando sua ação em modelo de processo inflamatório in vitro com ação da TFD. Os nanomateriais foram desenvolvidos através da técnica da deposição interfacial e caracterizados através da técnica de Espalhamento Dinâmico de Luz, os quais apresentaram características físico-químicas características e estáveis durante o período de análise. A incorporação da Quinizarina não provocou alterações no perfil fotofísico do fotossensibilizador, sendo possível a observação dos grupamentos químicos da molécula por meio da espectroscopia de FTIR. A quantificação realizada mostrou uma taxa de incorporação de 99% para o ativo associado ao nanocarreador. Os estudos de viabilidade preliminares com células NIH/3T3 mostraram ausência de citotoxicidade para a formulação de NC/QZ nas concentrações de 2,5, 5 e 15 μg.mL-1, QZ livre (50 e 70 μg.mL-1) e na NC/Vazia a 50% (v/v). A permeação do nanomaterial observada em modelo de matriz extracelular e pele de porco apresentou resultados promissores, permeando todas as camadas analisadas. O estudo de uptake celular mostrou uma maior internalização celular no composto nanoencapsulado quando comparado com a sua forma livre. O estudo de viabilidade celular com células HaCaT apresentou toxicidade apenas na concentração mais elevada (50 μg.mL-1). A indução do processo inflamatório in vitro foi desenvolvida adequadamente, onde foi possível observar a expressão de citocinas importantes no processo inflamatório. O tratamento realizado com TFD foi altamente eficiente quando comparado com a ledterapia e nanofármacos isolados. A partir dos resultados obtidos é possível indicar que o nanomaterial desenvolvido apresenta parâmetros físico-químicos satisfatórios, além de não apresentar citotoxicidade nas concentrações citadas, evidenciando sua biocompatibilidade in vitro, sendo observado que a nanotecnologia proporcionou uma maior internalização celular do ativo, resultando em uma ação direcionada, ainda, a TFD se mostrou um potencial candidato no tratamento de doenças autoimunes, diminuindo a concentração de citocinas no modelo inflamatório in vitro, possibilitando assim, experimentos subsequentes direcionados à terapias específicas.
Padronização, caracterização e potencial atividade biológica do óleo vegetal de girassol ozonizado
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-12-15) Vieira, Matheus Henrique ; Chin, Chung Man
A molécula de ozônio é formada por três átomos de oxigênio com elevado poder oxidante, sendo amplamente empregada para diversas finalidades, inclusive para tratamento terapêutico que inclui a administração de ozônio medicinal no combate a diversas doenças. Desde 2018, a utilização de ozônio medicinal foi incorporada como uma prática de medicina complementar e integrativa no Sistema Único de Saúde (SUS). Contudo, é crucial destacar que a eficácia do ozônio está intimamente ligada à sua concentração, uma vez que concentrações inadequadas podem resultar em efeitos deletérios ou ineficácia no tratamento. Neste contexto, a padronização do óleo ozonizado se torna indispensável para assegurar a segurança do paciente. O objetivo principal deste trabalho consistiu em desenvolver protocolos para a padronização e caracterização, com isso foram utilizadas técnicas como cromatografia em fase gasosa acoplada a espectrometria de massas, ensaios microbiológicos e citotóxicos. Os resultados obtidos indicaram que após 480 minutos de ozonização em 100 mL de óleo vegetal de girassol (OG), ocorreu um significativo potencial antimicrobiano, resultando na formação de ozonídeos. Esse processo provocou alterações físico-químicas no aspecto, cor, odor e na produção de subprodutos no óleo, conforme evidenciado pela cromatografia, sendo esta última dependente da atividade citotóxica/antibacteriana. Os ensaios de atividade antibacteriana e antifúngica, conduzidos por meio dos métodos de "time kill", difusão em ágar e Concentração Inibitória Mínima (CIM), revelaram atividade contra Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella choleraesuis, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Aspergillus brasiliensis e Malassezia furfur. Estes resultados demonstram o potencial terapêutico do óleo ozonizado no tratamento de doenças infecciosas. Em síntese, a padronização do processo de ozonização do óleo vegetal de girassol revelou-se promissora, proporcionando um produto com marca da atividade antimicrobiana e potencial terapêutico, abrindo perspectivas para sua aplicação em diversas áreas da medicina.
Co-encapsulação de ácido 5-aminosalicílico e probióticos em micropartículas cólon-específicas de amido retrogradado/pectina e otimizadas com nanofibras de celulose para o tratamento de colite ulcerativa
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-12-12) Lopes, Silvio André ; Meneguin, Andréia Bagliotti
A retocolite ulcerativa (RCU) é uma doença inflamatória intestinal (DII) crônica que acomete o cólon e o reto, cuja causa ainda não é completamente conhecida. Redução do pH, aceleração do trânsito colônico, diarreia e desequilíbrio na microbiota intestinal (disbiose) são os principais sintomas. Os probióticos (PROB), quando sobrevivem ao ambiente estomacal ácido e alcançam o intestino, podem ajudar a minimizar a disbiose e modular a resposta imunológica local. O tratamento medicamentoso convencional da RCU é baseado no anti-inflamatório mesalazina (5-ASA), o qual é rápida e extensamente absorvido no trato gastrointestinal (TGI) superior, causando diversos efeitos colaterais e baixa concentração no órgão-alvo (cólon), reduzindo sua eficácia terapêutica. Dessa maneira, a co-encapsulação de PROB e 5-ASA em micropartículas (MPs) para liberação cólon-específica através da técnica de secagem por pulverização (spray-drying) deve oferecer proteção aos compostos encapsulados e vetorização da sua liberação no cólon, visando tratamento localizado. O amido retrogradado (AR), uma fração do amido que escapa da digestão nas porções superiores do TGI e é degradado pela microbiota colônica, tem sido utilizado com sucesso para o desenvolvimento de sistemas cólon-específicos. Além disso, a pectina (P) e nanofibras de celulose (NFC) foram usadas para garantir resistência em meio ácido e evitar o burst de liberação do 5-ASA. O objetivo desse trabalho foi co-encapsular o PROB Lactobacillus rhamnosus GG (Culturelle®) e 5-ASA por spray-drying usando AR/P/NFC. O AR foi obtido por retrogradação da alta amilose em associação à P. As dispersões obtidas foram acrescidas de NFC, PROB e 5-ASA, e submetidas a 18 diferentes condições de secagem (CS), variando-se a temperatura de entrada, taxa de aspiração e fluxo de alimentação. As MPs obtidas foram avaliadas quanto à eficiência de encapsulação (EE) por espectrofotometria UV/VIS, viabilidade probiótica por contagem de colônias em meio MRS e morfologia por microscopia eletrônica de varredura. Na sequência, avaliou-se as propriedades dos materiais por difração de raiosX (DRX), calorimetria exploratória diferencial (DSC), mucoadesão in vitro e perfil de liberação in vitro do 5-ASA. As MPs obtidas mostraram-se com forma aproximadamente esférica e com tamanho entre 1 e 10 µm. O ajuste fino das variáveis de processo, tais como temperatura de entrada e taxa de aspiração e fluxo de alimentação, permitiram a obtenção de MPs com elevada EE (até 81,5%) e manutenção da viabilidade do PROB (5,74 ± 0,01 log UFC/g de amostra), inclusive após 30 dias de estocagem a 4°C. As análises por DRX indicaram que as CS não alteraram as propriedades estruturais dos componentes da formulação, porém a análise por DSC mostrou uma redução no pico de fusão do 5-ASA, sugerindo uma diminuição de cristalinidade. O ensaio in vitro de mucoadesão revelou que a CS aplicada durante a síntese das MPs modula a força de mucoadesão, sendo essa maior com o emprego de menores temperaturas de secagem. Além disso, o perfil de liberação in vitro mostrou menores taxas de liberação (abaixo de 15%) em meio ácido, fazendo com que a maior massa de 5-ASA fosse liberada em meio intestinal e colônico. Assim, o desenvolvimento dessas MPs representa uma promissora estratégia para promover a liberação específica no cólon, minimizando os efeitos colaterais associados ao tratamento convencional e potencialmente melhorando a eficácia terapêutica no contexto da retocolite ulcerativa.
Identificação e caracterização de espécies de triatomíneos e de tripanossomatídeos coletados em região de fronteira (Brasil – Bolívia)
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-11-30) Menezes, André Luiz Rodrigues ; Rosa, João Aristeu ; Oliveira, Jader de
Em 1909, o pesquisador Carlos Ribeiro Justiniano Chagas identificou e descreveu o ciclo completo da doença de Chagas (DC). Essa enfermidade, que leva seu nome, é uma doença negligenciada e confinada, principalmente, aos países latinos – que, de forma geral, são considerados endêmicos. Os triatomíneos são insetos hematófagos vetores da DC e a maioria das espécies ocorre nas Américas. Esses insetos foram notificados, pela primeira vez, no século 15. Atualmente, existem 160 espécies descritas (agrupadas em 18 gêneros), das quais, cerca de 65 espécies foram notificadas no Brasil e 32 na Amazônia brasileira. O agente etiológico da DC é o protozoário flagelado Trypanosoma cruzi. Neste estudo, foi realizada a identificação e caracterização de espécies de triatomíneos e de tripanossomatídeos coletados em região de fronteira (Brasil – Bolívia). Coletas de triatomíneos foram realizadas em seis regiões do município de Guajará-Mirim, Rondônia, Brasil e Guayaramerín, Beni, Bolívia. As coletas foram feitas por buscas ativas em palmeiras, assim como, por meio de armadilhas luminosas e capturas de insetos que invadiram ambientes considerados domiciliares. Para identificação das espécies, utilizou-se de caracteres morfológicos, por intermédio de chaves dicotômicas. A identificação de tripanossomatídeos foi efetuada em microscopia ótica (MO) e por biologia molecular, pelo método Fluorescent Fragment Length Barcoding (FFLB). Foram capturados 1.232 espécimes de triatomíneos, dos seguintes estágios evolutivos: NI- 72; NII-94; NIII-128; NIV-146; NV-190 e adultos (602), para isso utilizamos chaves ditocômicas. Os triatomíneos coletados em palmeiras encontravam-se, predominantemente, em Attalea speciosa, embora, também em A. maripa e Oenocarpus bataua. Após as coletas, os triatomíneos foram examinados por MO, para investigar a presença de tripanossomatídeos. Posteriormente, foi extraído o DNA, para as análises moleculares. As espécies capturadas foram P. lignarius, P. geniculatus, R. montenegrensis, R. pictipes, R. robustus e R. stali. Por MO, cerca de 13% foram positivos à presença de tripanossomatídeos. No entanto, a taxa de infecção para tripanossomatídeos, por meio de PCR foi de 58,29% (549 insetos adultos examinados). Desses, 45% estavam infectados, somente por T. cruzi e 39,81% com infecção mista com T. rangeli. Com relação à genotipagem, 32,81% foram positivos para TcI, 21,25% para infecção mista (TrA+TcI), 15,63% para TrA e 15% para infecção mista (TrA+TcI+TcIV). O estudo possibilitou detalhar as distribuições dos triatomíneos e tripanossomatídeos em regiões de fronteira (Brasil – Bolívia), o que poderá subsidiar ações de vigilância na região estudada.
Desenvolvimento de uma extrusora para fabricação de filamentos de biomateriais para manufatura de scaffolds por impressão 3D
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-05-26) Costa, Fabio Eduardo de Oliveira ; Guastaldo, Antônio Carlos ; Silva, Márcio Marques da
A manufatura aditiva, também conhecida como impressão 3D, é um processo de fabricação inovador que permite a criação de objetos por meio da adição sucessiva de material em camadas, com base em representações geométricas computacionais 3D. Essa tecnologia tem sido amplamente aplicada em diversas áreas de pesquisa, incluindo engenharia de tecidos e medicina regenerativa, devido à sua capacidade de produzir estruturas complexas que são difíceis de obter por métodos tradicionais. No campo da medicina, a impressão 3D tem sido utilizada para a fabricação de scaffolds e filamentos biocompatíveis. No entanto, o uso de hidrogéis na impressão 3D apresenta limitações em relação à dimensionalidade e homogeneidade do material produzido. Uma alternativa promissora é substituir os hidrogéis por filamentos de biomateriais, como por exemplo, combinar o PLA com fosfatos de cálcio e celulose bacteriana, que possuem propriedades favoráveis para aplicações biomédicas, como biocompatibilidade, bioatividade e capacidade de regeneração óssea. Nesse contexto, o presente projeto tem como objetivo desenvolver uma extrusora de filamento com rosca simples capaz de fabricar filamentos de biomateriais, combinando diferentes granulometrias de materiais. A extrusora construída consiste em um conjunto de três silos, sendo que dois alimentam a rosca principal por meio de roscas auxiliares. Essa configuração permite a produção de filamentos de biomaterial com polímeros como base e materiais adicionais com granulometrias diferentes e estabilidade dimensional por meio de um tracionador automático. A obtenção desses filamentos permitirá a produção de scaffolds por meio da impressão 3D, possibilitando avanços na engenharia de tecidos e medicina regenerativa. Além disso, essa abordagem inovadora de fabricação de filamentos de biomateriais contribuirá para a expansão das aplicações da manufatura aditiva na área biomédica, proporcionando soluções mais versáteis e personalizadas para a regeneração de tecidos.
Produção de triglicerídeos dietéticos obtidos por acidólise enzimática em reatores contínuos e avaliação do potencial antineoplásico
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-11-23) Miotti Junior, Rodney Helder ; Paula, Ariela Veloso de ; Primo, Fernando Lucas ; Pereira, Jorge Fernando Brandão ; Universidade de Coimbra
Um grande desafio na modificação de óleos e gorduras para a síntese de lipídios estruturados é a falta de seletividade dos catalisadores químicos quanto às posições dos ácidos graxos a serem substituídos no triacilglicerol, dificultando a formação de triglicerídeos compostos por ácido graxos de cadeias média (M) nas posições sn-1 e sn-3 e ácido graxo de cadeia longa (L) na posição sn-2 (MLM). Por outro lado, as lipases possuem a capacidade de catalisar posições específicas do grupo funcional da molécula de triacilglicerol. Deste modo, o presente trabalho teve como objetivo sintetizar triglicerídeos dietéticos do tipo MLM em reação de acidólise do óleo de semente de uva com ácido cáprico em diferentes configurações de reatores, os quais foram nanoemulsionadas usando um núcleo de óleo inovador, aplicado em ensaios de viabilidade celular com fibroblastos embrionários murinos (NIH-3T3 - ATCC® CRL-1658™) e células de câncer cervical (HeLa, ATCC® CCL-2), a fim de desenvolver a nanoemulsão como uma nova abordagem terapêutica. As reações foram catalisadas por lipase de Rhizopus oryzae imobilizada em estireno-divinilbenzeno (Diaion™ HP-20). Inicialmente foram desenvolvidos os biocatalisadores, sendo selecionado para a imobilização o carregamento de 0,3 gramas de pó enzimático para cada grama de suporte. Os ensaios preliminares para a síntese dos lipídios estruturado foram desenvolvidos em reatores de tanque agitado. Utilizando-se da técnica de planejamento de experimentos, as melhores condições reacionais foram de 1:8 (razão molar entre óleo: ácido cáprico) e 45 °C atingindo o grau de incorporação do ácido cáprico em 56 %GI. Com o intuído de melhora a eficiência do processo, seja reduzindo temperatura ou reduzindo a quantidade de ácido cáprico, foi utilizado inteligência artificial na forma de redes neuronais para melhorar o processo. Assim, a rede foi capaz de aumentar grau de incorporação do ácido cáprico na estrutura do triacilglicerol, atingindo valores de 61%GI para as condições reacionais de 41°C e razão molar de 1:6,7. A partir do melhoramento apresentado pela rede neuronal e a busca pela transição de um sistema reacional em batelada para um de sistema contínuo, as condições reacionais foram aplicadas em reatores de leito fixo. O sistema continuo operou ao longo de 192 horas, com incorporação do ácido cáprico atingindo os 61%GI em seu estado estacionário. Em busca de minimizar os efeitos de perda de pressão, o presente trabalho utilizou reator de leito fluidizado, o qual obteve o grau teórico máximo de incorporação do ácido cáprico (66%GI) quando aplicado as condições reacionais atribuídas pela rede neuronal em reciclo. O máximo teórico foi atingido com vazão de alimentação de 3 mL/min após 48 horas de reação, sendo utilizada o carregamento enzimático de 1,0 grama de pó enzimática para cada grama de suporte. A partir deste alto grau de incorporação, foram realizados testes de viabilidade celular com linhagens de fibroblastos murinos e linhagens de células de adenocarcinoma cervical humano. No que diz respeito aos ensaios de citotoxicidade, a concentração de MLM-SL de 1,75% e 2% v/v foi capaz de induzir a morte celular em 56% e 64% das células de adenocarcinoma, respectivamente. As células de adenocarcinoma cervical humano mostraram maior sensibilidade à indução de morte celular ao usar emulsões com MLM-SL > 1,75% v/v em comparação com emulsões com menor conteúdo, indicando um potencial no combate a células cancerígenas.
Nanoemulsão para co-encapsulação de anfotericina B e micafungina: desenvolvimento, caracterização e avaliação do potencial terapêutico contra Candida auris
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-11-30) Marena, Gabriel Davi ; Chorilli, Marlus ; Bauab, Taís Maria ; Ramos, Matheus Aparecido dos Santos
Infecções sistêmicas causadas por Candida sp, principalmente as novas espécies como C. auris, têm aumentado nos últimos anos. Dos potenciais fármacos que podem ser empregados no tratamento, destacam-se a anfotericina B (AmB) e a micafungina (MICA); no entanto, a resistência antifúngica apresentada pelos microrganismos e os efeitos colaterais que os antifúngicos possuem limitam o seu uso na terapia. Desta forma, novas estratégias podem ser exploradas, como a incorporação destes fármacos em nanoemulsões (NE), com o objetivo de melhorar o perfil terapêutico. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial antifúngico in vitro e in vivo da AmB e/ou da MICA incorporados em NE frente a Candida auris CDC B11903. As NEs foram compostas por 10% de óleo de girassol e colesterol (5:1) como fase oleosa, 10% de polioxietileno 20 cetil éter (Brij® 58) e fosfatodilcolina de soja (2:1) como tensoativo e 80 % de solução PBS como fase aquosa. As NE foram caracterizadas por ensaios de espalhamento dinâmico de luz (DLS), potencial zeta, análise de rastreamento de partículas (NTA) e microscopia eletrônica de transmissão (MET). A estabilidade das nanoemulsões foi acompanhada por 100 dias em DLS. Foi validada uma metodologia analítica por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) para quantificação de MICA e AmB e para os fármacos associados (MICAmB). Foi determinada a eficiência de encapsulação (EE) dos fármacos por HPLC e verificada a liberação in vitro das formulações. Posteriormente, realizou-se os ensaios biológicos in vitro utilizando a técnica de determinação da Concentração Mínima Inibitória (CMI90), Checkerboard, Time kill, ensaio de sorbitol e ergosterol e determinação do potencial anti-biofilme em diferentes tempos de formação. Foram realizados ensaios biológicos in vivo em modelo alternativo de Galleria mellonella para a determinação do potencial tóxico agudo e antifúngico e em camundongos com infecção sistêmica para a determinação da atividade antifúngica em tecidos. As NEs apresentaram diâmetro hidrodinâmico médio de 41,2 nm a 48,6 nm, índice de polidispersão (PDI) de 0,259 a 0,429 e o Potencial Zeta (PZ) de -4,7 mV a -3,6 mV. A concentração de partículas variou de 6,87 x 1013 a 1,98 x 1014 partículas /mL. A metodologia analítica foi desenvolvida e validada com sucesso, apresentando resultados satisfatórios de seletividade, linearidade, precisão, exatidão, limite de deteção e quantificação. A %EE para AmB, MICA em NE foram de 70 e 69 %, respectivamente e a EE de AmB e MICA em NEMA foi de 100 % e 44,7 %, respectivamente. A liberação dos fármacos incorporados nas NEs foi menor e mais lenta em comparação com o fármaco livre, variando de 62 a 100% de liberação após 24h de ensaio. Ensaios in vitro mostraram CMI90 mais baixo para fármacos livres. Houve sinergismo antimicrobiano entre MICA e AmB. Resultados promissores frente a biofilmes pré aderidos e formados foram observados após tratamento com os antifúngicos incorporados em NE, em especial frente aos biofilmes maduros. Ensaios de toxicidade aguda em larvas de G. mellonella mostraram que a NE diminuiu a toxicidade de AmB comparada com AmB livre. Os resultados de atividade antifúngica em modelo in vivo de G. mellonella mostraram que os fármacos incorporados em NE apresentaram melhor atividade terapêutica comparado aos fármacos livres. O ensaio em camundongos infectados evidenciou que as NEs potencializaram a ação antifúngica da AmB e MICAmB. Em conclusão, os resultados deste trabalham apontam o potencial das NE para incorporação de AmB e MICA no tratamento de infecções sistêmicas causada por C. auris.
The role of chemical signaling and gut mucosal immunity during Citrobacter rodentium infection
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-12-01) Melchior, Karine ; Moreira, Cristiano Gallina ; Raffatellu, Manuela ; University of California San Diego (UCSD)
The human pathogens enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) and enterohemorrhagic E. coli (EHEC) are transmitted by the fecal-oral route and cause severe diseases worldwide. Due to their potential to induce pathological lesions in the gut epithelium, they are commonly known as attaching and effacing pathogens (A/E pathogens). To date, effective strategies to manage EPEC and EHEC infections beyond standard supportive measures are lacking. Therefore, preclinical studies to better understand the mechanisms of infection of EPEC and EHEC are required. Because these bacteria are poorly pathogenic in mice, Citrobacter rodentium has been broadly used as an alternative in vivo model pathogen to study EHEC and EPEC disease. Similarly, to human pathogens, C. rodentium causes A/E lesions in mice without requiring antibiotic pretreatment to establish infection. Studies have shown that the membrane-bound histidine sensor kinase QseC promotes A/E pathogen colonization in vivo. However, whether QseC signaling is essential for A/E pathogens to resist and evade immune responses to establish disease remains unknown. On the host side, interleukin IL-22 is critical to resolve C. rodentium-mediated disease, although the exact mechanism(s) of IL-22-mediated protection are not well understood. Here, we aimed to investigate the role of chemical signaling through the QseC sensor for establishing disease and resistance to the host immune response. Furthermore, we studied the downstream mechanisms that mediate the mucosal immune protection conferred by IL-22 during C. rodentium infection. Our data suggest that the QseC sensor is directly involved in triggering intestinal inflammation and promoting transmissible colonic crypt hyperplasia, a hallmark pathological feature of C. rodentium-mediated disease. Moreover, QseC-mediated signaling enhanced C. rodentium’s resistance to neutrophil antimicrobial responses, resulting in the pathogen’s systemic dissemination in vivo. We identified changes in the lipopolysaccharide membrane modulated by the QseC sensor as a potential mechanism. Furthermore, we found that the IL-22-mediated resolution of C. rodentium infection was independent of the induction of several downstream responses, including calprotectin, Reg3β, Reg3γ, lipocalin-2, and C3. Instead, the susceptibility of IL-22 deficient mice to C. rodentium was primarily associated with increased intestinal permeability. Together, our data show that C. rodentium depends on chemical signaling mediated by QseC for disease establishment and to resist the immune responses conferred by neutrophils. Upon infection, IL-22 plays an essential role in host protection, which was independent of a single deficiency of either antimicrobial peptide regulated by this cytokine; instead, protection was related to IL-22’s regenerative properties by promoting the epithelial barrier integrity. Overall, our work expands the knowledge of the in vivo mechanisms triggered by A/E pathogens during infection.
Uso da técnica phage display para identificação e avaliação de peptídeos capazes de reduzir a taxa de infecção em macrófagos
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-11-17) Verga, Juliane Buzzon Meneghesso ; Graminha, Márcia Aparecida Silva ; Pinto, Mara Cristina
Diante da alta incidência e gravidade das leishmanioses, especialmente a leishmaniose visceral (LV), e reconhecendo as limitações dos métodos convencionais de controle e tratamento, nosso projeto de pesquisa buscou contribuir para o combate e prevenção dessas doenças. Tivemos como principal objetivo deste projeto a identificação de peptídeos capazes de reduzir a taxa de infecção de células THP-1 diferenciadas a macrófagos pelas espécies Leishmania amazonensis, Leishmania mexicana e Leishmania infantum. A identificação de tais peptídeos se deu via aplicação da técnica de phage display como um meio para selecionar fagos recombinantes que expressassem peptídeos com alta afinidade à superfície das diferentes espécies de Leishmania. O processo de seleção de sequências peptídicas de interesse se deu com base em três critérios i) análise da frequência de sequências identificadas por meio de sequenciamento, ii) análise qualitativa da interação fago-Leishmania via ensaios de fluorescência, e iii) ensaios de inibição da taxa de infecção em macrófagos utilizando fagos recombinantes. O fago selecionado a partir de ensaios de phage display frente à L. infantum, A9, reduziu a taxa de infecção de macrófagos em 51.5% e 53.6% para L. infantum e L. amazonensis, respectivamente. Já o fago, H1, selecionado via interação com L. amazonensis, apresentou reduções significativas da taxa de infecção, 47%, apenas da própria espécie. Partindo da sequência peptídica expressa por tais fagos, foram sintetizados os peptídeos La1 e Li1, derivados dos fagos H1 e A9, respectivamente. Análises dos ensaios de inibição de infecção com peptídeos sintéticos mostraram que o peptídeo La1 inibe em 45% a taxa de infecção de macrófagos por L. amazonensis, enquanto o peptídeo, Li1, reduziu a taxa de infecção de macrófagos tanto para L. infantum (42%) quanto para L. mexicana (39%). Estudos in vivo, utilizando o modelo murino BALB/c infectado com L. infantum, mostraram uma redução da carga parasitária em 84%, demonstrando o potencial terapêutico do peptídeo Li1. A descoberta de dois peptídeos, um capaz de inibir a infecção por duas espécies e um espécie-específico, abre a possibilidade de uma continuidade deste trabalho com capacidade de impacto em ciência básica. Futuros trabalhos, podem utilizar das sequências peptídicas e resultados apresentados nessa tese para identificar proteínas de superfície responsáveis pela interação parasita-hospedeiro das diferentes espécies. Além disso, a significativa redução da infecção in vivo também mostra a capacidade deste trabalho em contribuir com futuras estratégias de combate às leishmanioses.
Avaliação do potencial de carreadores lipídicos nanoestruturados para co-encapsulação de curcumina e fluconazol dispersos em hidrogéis termorresponsivos no tratamento de candidíase vulvovaginal
(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-08-11) Araujo, Victor Hugo Sousa ; Chorilli, Marlus
Candidíase vulvovaginal (CVV) é uma patologia que acomete boa parte da população de sexo feminino. O tratamento com agentes azólicos é amplamente prescrito e o número de isolados resistentes vem crescendo. Desta forma, se faz necessária a pesquisa de novas alternativas terapêuticas. Curcumina (CUR) demonstra ser uma alternativa promissora visto a sua bioatividade versátil e amplamente discutida na literatura. Em estudos, a associação de CUR com outros insumos farmacêuticos ativos (IFAs), como o fluconazol (FL) proporcionou otimização de atividade. Em virtude da baixa solubilidade da CUR, sua incorporação em sistemas de liberação nanoestruturados, como carreador lipídico nanoestruturado (CLN) pode ser interessante, de forma a otimizar sua ação biológica. Considerando a alta fluidez de CLN e aplicação intravaginal, o estudo avaliou a sua dispersão em hidrogel termorresponsivo. Desta forma, este projeto buscou avaliar o potencial de CLN para co-encapsulação de CUR e FL dispersos em hidrogéis termorresponsivos no tratamento de CVV. O desenvolvimento do CLN foi realizado com a abordagem Quality by Design (QbD) com intuito de obter um desenvolvimento baseado na qualidade. Desta forma, um estudo Box-Behnken (3³) foi conduzido. Diferentes técnicas de caracterização físico-químicas foram abordadas e foi possível obter CLN monodispersa, com diâmetro hidrodinâmico médio de 142,5 nm, com alta eficiência de encapsulação de CUR e FLU, liberação prolongada, índice de cristalinidade reduzido e forma esférica. Os hidrogéis foram obtidos utilizando CLN como fase aquosa (H-CLN) e a avaliação das propriedades mecânicas de H-CLN demonstrou que cada hidrogel teve um comportamento diferente de acordo com a CLN utilizada. A atividade da combinação CUR e FLU, a nanoestruturada (CLNFC) e hidrogel (H-CLNFC) foi avaliada em modelos in vitro com células planctônicas. Avaliação in vitro com biofilmes de C.albicans e C.glabrata, in vivo em modelo de Galleria melonella e anti-inflamatória in vitro (doseamento de TNF-alfa, IL-6, IL-10, IL-2) foram realizados com CLNFC. Os resultados indicaram o potencial anti-cândida da combinação CUR + FL e a otimização da atividade quando em CLNFC. Os resultados de H-CLNFC demonstraram redução do potencial antifúngico demonstrado por CLNFC. A citotoxicidade das amostras foi avaliada indicando que CLNFC não se apresentou tóxica em linhagens de macrófagos murinos e de células epiteliais de mucosa vaginal, além de exercer atividade anti-inflamatória. Desta forma, o sistema desenvolvido tem potencial no tratamento de CVV, visto as atividades antifúngica e anti-inflamatória demonstradas.

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