Programa de pós-graduação: Biociências e Biotecnologia Aplicadas à Farmácia
Carregando...
Sigla
BBAF
Código CAPES
33004030081P7
Unidades
Faculdade de Ciências Farmacêuticas
FCF
Campus: Araraquara
12 resultados
Resultados da pesquisa de publicação
Agora exibindo 1 - 10 de 12
PublicaçãoTese de doutorado The role of chemical signaling and gut mucosal immunity during Citrobacter rodentium infection(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-12-01) Melchior, Karine
; Moreira, Cristiano Gallina ; Raffatellu, Manuela ; University of California San Diego (UCSD) The human pathogens enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) and enterohemorrhagic E. coli (EHEC) are transmitted by the fecal-oral route and cause severe diseases worldwide. Due to their potential to induce pathological lesions in the gut epithelium, they are commonly known as attaching and effacing pathogens (A/E pathogens). To date, effective strategies to manage EPEC and EHEC infections beyond standard supportive measures are lacking. Therefore, preclinical studies to better understand the mechanisms of infection of EPEC and EHEC are required. Because these bacteria are poorly pathogenic in mice, Citrobacter rodentium has been broadly used as an alternative in vivo model pathogen to study EHEC and EPEC disease. Similarly, to human pathogens, C. rodentium causes A/E lesions in mice without requiring antibiotic pretreatment to establish infection. Studies have shown that the membrane-bound histidine sensor kinase QseC promotes A/E pathogen colonization in vivo. However, whether QseC signaling is essential for A/E pathogens to resist and evade immune responses to establish disease remains unknown. On the host side, interleukin IL-22 is critical to resolve C. rodentium-mediated disease, although the exact mechanism(s) of IL-22-mediated protection are not well understood. Here, we aimed to investigate the role of chemical signaling through the QseC sensor for establishing disease and resistance to the host immune response. Furthermore, we studied the downstream mechanisms that mediate the mucosal immune protection conferred by IL-22 during C. rodentium infection. Our data suggest that the QseC sensor is directly involved in triggering intestinal inflammation and promoting transmissible colonic crypt hyperplasia, a hallmark pathological feature of C. rodentium-mediated disease. Moreover, QseC-mediated signaling enhanced C. rodentium’s resistance to neutrophil antimicrobial responses, resulting in the pathogen’s systemic dissemination in vivo. We identified changes in the lipopolysaccharide membrane modulated by the QseC sensor as a potential mechanism. Furthermore, we found that the IL-22-mediated resolution of C. rodentium infection was independent of the induction of several downstream responses, including calprotectin, Reg3β, Reg3γ, lipocalin-2, and C3. Instead, the susceptibility of IL-22 deficient mice to C. rodentium was primarily associated with increased intestinal permeability. Together, our data show that C. rodentium depends on chemical signaling mediated by QseC for disease establishment and to resist the immune responses conferred by neutrophils. Upon infection, IL-22 plays an essential role in host protection, which was independent of a single deficiency of either antimicrobial peptide regulated by this cytokine; instead, protection was related to IL-22’s regenerative properties by promoting the epithelial barrier integrity. Overall, our work expands the knowledge of the in vivo mechanisms triggered by A/E pathogens during infection.PublicaçãoTese de doutorado 
Acesso Aberto Uso da técnica phage display para identificação e avaliação de peptídeos capazes de reduzir a taxa de infecção em macrófagos(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-11-17) Verga, Juliane Buzzon Meneghesso; Graminha, Márcia Aparecida Silva ; Pinto, Mara Cristina Diante da alta incidência e gravidade das leishmanioses, especialmente a leishmaniose visceral (LV), e reconhecendo as limitações dos métodos convencionais de controle e tratamento, nosso projeto de pesquisa buscou contribuir para o combate e prevenção dessas doenças. Tivemos como principal objetivo deste projeto a identificação de peptídeos capazes de reduzir a taxa de infecção de células THP-1 diferenciadas a macrófagos pelas espécies Leishmania amazonensis, Leishmania mexicana e Leishmania infantum. A identificação de tais peptídeos se deu via aplicação da técnica de phage display como um meio para selecionar fagos recombinantes que expressassem peptídeos com alta afinidade à superfície das diferentes espécies de Leishmania. O processo de seleção de sequências peptídicas de interesse se deu com base em três critérios i) análise da frequência de sequências identificadas por meio de sequenciamento, ii) análise qualitativa da interação fago-Leishmania via ensaios de fluorescência, e iii) ensaios de inibição da taxa de infecção em macrófagos utilizando fagos recombinantes. O fago selecionado a partir de ensaios de phage display frente à L. infantum, A9, reduziu a taxa de infecção de macrófagos em 51.5% e 53.6% para L. infantum e L. amazonensis, respectivamente. Já o fago, H1, selecionado via interação com L. amazonensis, apresentou reduções significativas da taxa de infecção, 47%, apenas da própria espécie. Partindo da sequência peptídica expressa por tais fagos, foram sintetizados os peptídeos La1 e Li1, derivados dos fagos H1 e A9, respectivamente. Análises dos ensaios de inibição de infecção com peptídeos sintéticos mostraram que o peptídeo La1 inibe em 45% a taxa de infecção de macrófagos por L. amazonensis, enquanto o peptídeo, Li1, reduziu a taxa de infecção de macrófagos tanto para L. infantum (42%) quanto para L. mexicana (39%). Estudos in vivo, utilizando o modelo murino BALB/c infectado com L. infantum, mostraram uma redução da carga parasitária em 84%, demonstrando o potencial terapêutico do peptídeo Li1. A descoberta de dois peptídeos, um capaz de inibir a infecção por duas espécies e um espécie-específico, abre a possibilidade de uma continuidade deste trabalho com capacidade de impacto em ciência básica. Futuros trabalhos, podem utilizar das sequências peptídicas e resultados apresentados nessa tese para identificar proteínas de superfície responsáveis pela interação parasita-hospedeiro das diferentes espécies. Além disso, a significativa redução da infecção in vivo também mostra a capacidade deste trabalho em contribuir com futuras estratégias de combate às leishmanioses.PublicaçãoTese de doutorado Mecanismo de ação e atividade in vitro e in vivo do complexo tris(1,10-fenantrolina)ferro(II) frente a Mycobacterium tuberculosis(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-02-26) Demarqui, Fernanda Manaia; Pavan, Fernando Rogério O tratamento disponível contra a tuberculose é composto por uma combinação de medicamentos antimicobacterianos, isoniazida, rifampicina, etambutol e pirazinamida para casos de tuberculose sensível a medicamentos. No entanto, o regime de tratamento é longo, com duração de seis meses ou mais, e associado a efeitos colaterais tóxicos. Este trabalho busca, baseado em trabalhos anteriores do grupo, aprofundar o estudo sobre o Complexo ([Fe(fen)3]2+) como um possível candidato a fármaco contra a tuberculose e outras micobactérias não tuberculosas (MNT). Para tanto, experimentos in vitro foram realizados para avaliação da atividade do complexo frente as diferentes micobactérias; o mecanismo de ação foi determinado através do Sequenciamento Completo do Genoma de mutantes espontaneamente resistentes e a eficácia in vivo foi avaliada em modelo experimental de camundongos BALB/C. Para M. tuberculosis os resultados obtidos mostram que o Complexo ([Fe(fen)3]2+) possui sinergismo a fármacos de primeira linha além de ter melhora em sua atividade em concentrações fisiológicas de NaCl. Mutações encontradas no genoma de mutantes resistentes apontam que o Complexo atua em processos relacionados a síntese de parede bacteriana, resultado que foi corroborado pela avaliação da morfologia celular após exposição ao tratamento por microscopia eletrônica de varredura (MEV). In vivo, o Complexo mostrou-se altamente efetivo não sendo observado crescimento bacteriano após tratamento de camundongos infectados com M. tuberculosis. Os casos de doenças, causadas pelas chamadas MNT vem aumentando a cada ano. O tratamento dessas infecções é por vezes mais longo do que da tuberculose. O Complexo ([Fe(fen)3]2+) foi ativo contra três isolados clínicos de MNT. No ensaio de cinética bacteriana, ele teve comportamento bactericida contra a cepa padrão de M. abscessus. Em síntese, os resultados obtidos sugerem que o Complexo ([Fe(fen)3]2+) pode representar uma alternativa promissora no arsenal terapêutico contra a tuberculose e infecções por micobactérias não tuberculosas, oferecendo uma abordagem inovadora e potencialmente mais eficaz para o tratamento dessas doenças.PublicaçãoDissertação de mestrado Desenvolvimento e avaliação de peptídeos análogos da plectasina: síntese, conjugação a nanopartículas de sílica mesoporosas e avaliação biológica contra o Mycobacterium tuberculosis(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-03-19) Carnero Canales, Christian Shleider; Sabio, Rafael Miguel A resistência antimicrobiana representa um dos maiores desafios para a saúde pública mundial, exigindo o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos eficazes contra patógenos resistentes a múltiplos fármacos. Neste contexto, os peptídeos antimicrobianos (PAMs) emergem como promissores candidatos devido à sua especificidade e mecanismo de ação diferenciado. Este estudo focou na avaliação de análogos da Plectasina, particularmente o peptídeo DC05, para explorar sua atividade antimicrobiana, biocompatibilidade e capacidade de inibir bombas de efluxo em Mycobacterium tuberculosis (Mtb) e outras bactérias patogênicas. Os resultados demonstraram que o DC05 possui atividade antimicrobiana notável contra Mtb, com uma concentração inibitória mínima (CIM) de 12 µM, além de eficácia contra Pseudomonas aeruginosa e Salmonella Typhi. Este perfil sugere a aplicabilidade do DC05 como um amplo espectro de agente antimicrobiano, com um foco particular em bactérias gram-negativas e micobactérias. Além disso, a análise da biocompatibilidade em diversas linhas celulares confirmou um perfil de segurança favorável, permitindo o uso terapêutico dos peptídeos sintetizados sem causar danos celulares significativos. Um achado crucial foi a capacidade do DC05 de aumentar o acúmulo de brometo de etídio em Mtb, indicando uma inibição efetiva das bombas de efluxo. Este mecanismo propõe o uso potencial de peptídeos como adjuvantes em terapias combinadas com antibióticos tradicionais, potencializando sua eficácia. A variabilidade na estabilidade dos peptídeos em diferentes modelos biológicos in silico ressalta a necessidade de otimização das sequências para aumentar sua meia-vida e eficácia terapêutica.PublicaçãoTese de doutorado Identificação e caracterização de espécies de triatomíneos e de tripanossomatídeos coletados em região de fronteira (Brasil – Bolívia)(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-11-30) Menezes, André Luiz Rodrigues; Rosa, João Aristeu ; Oliveira, Jader de Em 1909, o pesquisador Carlos Ribeiro Justiniano Chagas identificou e descreveu o ciclo completo da doença de Chagas (DC). Essa enfermidade, que leva seu nome, é uma doença negligenciada e confinada, principalmente, aos países latinos – que, de forma geral, são considerados endêmicos. Os triatomíneos são insetos hematófagos vetores da DC e a maioria das espécies ocorre nas Américas. Esses insetos foram notificados, pela primeira vez, no século 15. Atualmente, existem 160 espécies descritas (agrupadas em 18 gêneros), das quais, cerca de 65 espécies foram notificadas no Brasil e 32 na Amazônia brasileira. O agente etiológico da DC é o protozoário flagelado Trypanosoma cruzi. Neste estudo, foi realizada a identificação e caracterização de espécies de triatomíneos e de tripanossomatídeos coletados em região de fronteira (Brasil – Bolívia). Coletas de triatomíneos foram realizadas em seis regiões do município de Guajará-Mirim, Rondônia, Brasil e Guayaramerín, Beni, Bolívia. As coletas foram feitas por buscas ativas em palmeiras, assim como, por meio de armadilhas luminosas e capturas de insetos que invadiram ambientes considerados domiciliares. Para identificação das espécies, utilizou-se de caracteres morfológicos, por intermédio de chaves dicotômicas. A identificação de tripanossomatídeos foi efetuada em microscopia ótica (MO) e por biologia molecular, pelo método Fluorescent Fragment Length Barcoding (FFLB). Foram capturados 1.232 espécimes de triatomíneos, dos seguintes estágios evolutivos: NI- 72; NII-94; NIII-128; NIV-146; NV-190 e adultos (602), para isso utilizamos chaves ditocômicas. Os triatomíneos coletados em palmeiras encontravam-se, predominantemente, em Attalea speciosa, embora, também em A. maripa e Oenocarpus bataua. Após as coletas, os triatomíneos foram examinados por MO, para investigar a presença de tripanossomatídeos. Posteriormente, foi extraído o DNA, para as análises moleculares. As espécies capturadas foram P. lignarius, P. geniculatus, R. montenegrensis, R. pictipes, R. robustus e R. stali. Por MO, cerca de 13% foram positivos à presença de tripanossomatídeos. No entanto, a taxa de infecção para tripanossomatídeos, por meio de PCR foi de 58,29% (549 insetos adultos examinados). Desses, 45% estavam infectados, somente por T. cruzi e 39,81% com infecção mista com T. rangeli. Com relação à genotipagem, 32,81% foram positivos para TcI, 21,25% para infecção mista (TrA+TcI), 15,63% para TrA e 15% para infecção mista (TrA+TcI+TcIV). O estudo possibilitou detalhar as distribuições dos triatomíneos e tripanossomatídeos em regiões de fronteira (Brasil – Bolívia), o que poderá subsidiar ações de vigilância na região estudada.PublicaçãoDissertação de mestrado Síntese de ésteres de geraniol catalisada por micélio de Aspergillus tubingensis com elevada atividade lipolítica(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-04-11) Gonçalves, Rhyan Lelis Nubile; Paula, Ariela Veloso de ; Carvalho, Ana Karine Furtado de Nos últimos anos, o micélio de fungos filamentosos tem emergido como um protagonista promissor na área da biotransformação. Essa rede intricada de filamentos, conhecida como micélio, desempenha um papel crucial na absorção de nutrientes do ambiente e, mais recentemente, tem sido explorado por sua capacidade catalítica. Uma das áreas de interesse é a esterificação de terpenos, componentes aromáticos encontrados em muitas plantas e presentes em óleos essenciais, utilizados desde a antiguidade para o tratamento de diversas doenças. Descobriu-se que a esterificação de terpenos resulta em uma molécula mais estável, menos tóxica e com propriedades similares aos seus álcoois constituintes. Aliado a isso, a esterificação enzimática catalisada por lipases é mais sustentável, pois reduz drasticamente o uso de reagentes químicos e processos pouco sustentáveis. Assim, neste estudo, utilizaram-se lipases ligadas ao micélio de Aspergillus tubingensis em um reator de tanque agitado operando em modo batelada, para síntese de éster terpênico. Os substratos utilizados foram geraniol (álcool) e ácido acético (acil doador). O objetivo deste trabalho foi desenvolvimento do micélio de A. tubingensis a fim de se obter uma biomassa com maior potencial catalítico, e a otimização da produção de acetato de geranila. A partir dos tratamentos efetuados no micélio, a priori foram obtidos resultados elevados de atividade hidrolítica 955,73 ± 31,65 U/g e de esterificação 989,08 ± 30,33 U/g. Em seguida, o micélio foi caracterizado com relação aos valores de pH e temperatura ótimos, resultando em pH ótimo de 7,0 e temperatura ótima de 37 ºC. Com relação aos parâmetros cinéticos, foram obtidos Km de 280,2 Mm e Vmáx de 2000 U/g, demonstrando que o micélio segue a cinética de Michaelis-Menten. Visando à otimização da produção de acetato de geranila, realizaram-se planejamentos fatoriais, com as variáveis independentes: temperatura, razão molar e carga enzimática. A produção do acetato de geranila foi otimizada, alcançando 100% m/m de conversão nas condições razão molar 1:5 (geraniol/ácido acético), temperatura 45 ºC e carga enzimática 5% (% m/m) em 24 h de reação. Resultados obtidos revelam que as novas abordagens aplicadas ao micélio como biocatalisador aumentaram seu potencial de forma significativa. De forma notável, o micélio de A. tubingensis demonstrou boa resistência a ambientes ácidos. Além disso, sua capacidade de alcançar uma conversão de 100% de ésteres de geraniol é um marco significativo. Essa realização, até então inédita na literatura cientifica, abre novas perspectivas para a aplicação do micélio como um biocatalisador eficiente. A possibilidade de produzir moléculas bioativas com a conversão obtida é promissora e pode revolucionar a indústria biotecnológica e outras áreas de pesquisa.PublicaçãoDissertação de mestrado Produção recombinante do RBD do vírus SARS-CoV-2 e desenvolvimento de plataforma para bioprospecção de inibidores de fusão(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-04-09) Reis, Aline; Costa, Paulo Inácia da A COVID-19 é uma síndrome respiratória aguda grave de origem viral, tendo emergido em 2019 e evoluiu para uma pandemia global com cerca de 670 milhões de casos e 6,8 milhões de mortes registradas até 2023. Seus sintomas principais envolvem febre, tosse seca, fadiga, falta de ar, mialgia e distúrbios gastrointestinais, podendo ser fatal. O agente causador da COVID-19, denominado SARS-CoV-2, é um betacoronavírus envelopado de RNA positivo e dentre suas proteínas estruturais, a proteína Spike (proteína S) desempenha um papel crucial na infecção, ela possui o domínio de ligação ao receptor (RBD) que se liga à enzima conversora de angiotensina tipo 2 (ACE2), permitindo a fusão do vírus com as células hospedeiras. Apesar do rápido desenvolvimento e aplicação das vacinas, sua eficácia enfrenta desafios, como grupos não vacináveis, baixa adesão a doses de reforço, constante evolução do vírus e o aparecimento de sequelas pós infecção. Nesse cenário, é crucial investir em tecnologias além das vacinas, como antivirais, para combater a infecção e suas sequelas. Os inibidores de fusão são uma classe de antivirais que agem nas primeiras etapas da infecção, bloqueando a ligação e fusão do vírus as células hospedeiras, e desde o início da pandemia houve a busca intensa por esses fármacos. Uma das técnicas utilizadas para essa bioprospecção é a cultura de células com o vírus, que apesar de ser o padrão para testes de antivirais, é trabalhosa, de alto custo e que requer mão de obra especializada, além de representar riscos de biossegurança. Alternativas tecnológicas têm sido desenvolvidas para facilitar a triagem de antivirais, incluindo a plataforma proposta neste estudo. Baseada na atividade carboxipeptidase do receptor ACE2 e sua interação com o RBD, essa plataforma busca contribuir para a bioprospecção de inibidores de fusão contra o SARS-CoV-2, oferecendo uma abordagem, rápida, segura e mais barata. Através da produção recombinante do RBD em plataforma procariótica e ensaios fluorimétricos e enzimáticos o presente trabalho demonstrou que o RBD é capaz de aumentar a atividade enzimática da ACE2 em cerca de 6 vezes e que é possível utilizar essa modulação para realizar a triagem de inibidores de fusão bem como anticorpos neutralizadores.PublicaçãoTese de doutorado Acesso Aberto Avaliação do potencial de carreadores lipídicos nanoestruturados para co-encapsulação de curcumina e fluconazol dispersos em hidrogéis termorresponsivos no tratamento de candidíase vulvovaginal(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-08-11) Araujo, Victor Hugo Sousa; Chorilli, Marlus Candidíase vulvovaginal (CVV) é uma patologia que acomete boa parte da população de sexo feminino. O tratamento com agentes azólicos é amplamente prescrito e o número de isolados resistentes vem crescendo. Desta forma, se faz necessária a pesquisa de novas alternativas terapêuticas. Curcumina (CUR) demonstra ser uma alternativa promissora visto a sua bioatividade versátil e amplamente discutida na literatura. Em estudos, a associação de CUR com outros insumos farmacêuticos ativos (IFAs), como o fluconazol (FL) proporcionou otimização de atividade. Em virtude da baixa solubilidade da CUR, sua incorporação em sistemas de liberação nanoestruturados, como carreador lipídico nanoestruturado (CLN) pode ser interessante, de forma a otimizar sua ação biológica. Considerando a alta fluidez de CLN e aplicação intravaginal, o estudo avaliou a sua dispersão em hidrogel termorresponsivo. Desta forma, este projeto buscou avaliar o potencial de CLN para co-encapsulação de CUR e FL dispersos em hidrogéis termorresponsivos no tratamento de CVV. O desenvolvimento do CLN foi realizado com a abordagem Quality by Design (QbD) com intuito de obter um desenvolvimento baseado na qualidade. Desta forma, um estudo Box-Behnken (3³) foi conduzido. Diferentes técnicas de caracterização físico-químicas foram abordadas e foi possível obter CLN monodispersa, com diâmetro hidrodinâmico médio de 142,5 nm, com alta eficiência de encapsulação de CUR e FLU, liberação prolongada, índice de cristalinidade reduzido e forma esférica. Os hidrogéis foram obtidos utilizando CLN como fase aquosa (H-CLN) e a avaliação das propriedades mecânicas de H-CLN demonstrou que cada hidrogel teve um comportamento diferente de acordo com a CLN utilizada. A atividade da combinação CUR e FLU, a nanoestruturada (CLNFC) e hidrogel (H-CLNFC) foi avaliada em modelos in vitro com células planctônicas. Avaliação in vitro com biofilmes de C.albicans e C.glabrata, in vivo em modelo de Galleria melonella e anti-inflamatória in vitro (doseamento de TNF-alfa, IL-6, IL-10, IL-2) foram realizados com CLNFC. Os resultados indicaram o potencial anti-cândida da combinação CUR + FL e a otimização da atividade quando em CLNFC. Os resultados de H-CLNFC demonstraram redução do potencial antifúngico demonstrado por CLNFC. A citotoxicidade das amostras foi avaliada indicando que CLNFC não se apresentou tóxica em linhagens de macrófagos murinos e de células epiteliais de mucosa vaginal, além de exercer atividade anti-inflamatória. Desta forma, o sistema desenvolvido tem potencial no tratamento de CVV, visto as atividades antifúngica e anti-inflamatória demonstradas.PublicaçãoDissertação de mestrado Acesso Aberto Implantação de projeto piloto IGRA-TB – Ministério da Saúde: padronização, otimização, epidemiologia e avanços na quantificação de IFN-ᵞ para inovações frente ao diagnóstico de tuberculose latente(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2024-04-18) Filardi, Eloise Trostdorf Monteiro; Costa, Paulo Inácio da A tuberculose continua sendo um importante desafio para a saúde pública mundial ao longo dos anos, com cerca de dez milhões de novos casos e 1,2 milhões de óbitos registrados. O Brasil está entre os 30 países com alta carga de coinfecção por tuberculose e HIV (Vírus da Imunodeficiência Humana), sendo está uma das principais causas de morte nesse grupo específico. Controlar a disseminação da doença é uma prioridade global estabelecida pela Organização Mundial da Saúde (OMS). A infecção pode se manifestar de forma ativa ou latente. No primeiro caso, o diagnóstico pode ser feito por meio de exames de imagem ou pela identificação direta do agente etiológico. A dificuldade reside no diagnóstico da tuberculose latente (ILTB), na qual o indivíduo contaminado não apresenta sintomas nem sinais clínicos evidentes, apesar de os bacilos de Koch permanecerem nos granulomas, onde o Mycobacterium tuberculosis (MT) prolifera e se desenvolve até a eventual manifestação da tuberculose ativa, especialmente em pacientes imunossuprimidos nos quais o bacilo escapa do sistema imunológico. A resposta imunológica ao MT ocorre após a prévia sensibilização dos linfócitos T, que são responsáveis pela produção e secreção da citocina interferon-gamma (IFN-γ). Essa citocina pode ser quantificada por meio de um ensaio clínico, como o teste IGRA-TB, que é uma alternativa para o diagnóstico da ILTB. No entanto, o teste pode apresentar limitações de sensibilidade em pacientes com linfopenia e redução nos valores absolutos de linfócitos CD4+ e CD8+, os quais são responsáveis pela secreção de IFN-γ após a apresentação de antígenos da tuberculose por monócitos, resultando em falsos negativos ou resultados inconclusivos, especialmente em casos de coinfecção com o vírus HIV. O método de RT-PCR foi proposto para dosagem de RNAm de IFN-γ na presença de antígenos específicos do MT, ESAT-6 e CPF-10, demonstrando resultados promissores, com uma maior frequência de RNAm expresso em amostras que foram positivas para ILTB. Além de descrever o processo de padronização, implementação e propostas para o refinamento da dosagem de IFN-γ, o presente estudo também analisou a epidemiologia dos casos de tuberculose em cinco regiões diferentes do estado de São Paulo. Os resultados revelaram uma taxa de 14,3% de casos positivos para ILTB nas seguintes regiões: DRS III - Araraquara/São Carlos, XIII - Ribeirão Preto, VIII - Franca, XV - São José do Rio Preto e V - Barretos, juntamente com uma análise descritiva das populações estudadas.PublicaçãoTese de doutorado Acesso Aberto Caracterização genômica, transcriptômica e infecção em diferentes modelos de Salmonella Typhimurium invasiva não-tifoidal (iNTS)(Universidade Estadual Paulista (Unesp), 2023-08-29) Martins, Isabela Mancini; Moreira, Cristiano Gallina A compreensão dos mecanismos pelos quais as bactérias intestinais se relacionam em comunidades complexas e com o hospedeiro são essenciais para o desenvolvimento de novas terapias. Estudos anteriores do grupo revelaram mecanismos de sinalização química relacionados à patogenicidade de Salmonella enterica sorovar Typhimurium que causam predominantemente gastroenterite em humanos no mundo todo. Porém, estudos recentes têm demonstrado que linhagens ST313 de S. Typhimurium são capazes de evadir do Trato Gastrointestinal (TGI) e atingir a corrente sanguínea de humanos com comorbidades por via de mecanismos ainda desconhecidos. Tais linhagens são denominadas invasive non typhoidal Salmonella (iNTS) e são descritas principalmente na África-subsaariana e no Brasil. O objetivo do presente trabalho foi auxiliar na compreensão da sobrevivência e colonização extra intestinal de linhagens de S. Typhimurium ST313. Foram utilizadas 13 linhagens de S. Typhimurium ST313 isoladas de hemoculturas humanas do Hospital Universitário da UNESP de Botucatu – SP entre os anos 1998-2011. O sequenciamento do genoma completo foi realizado para todas as linhagens pelo HiSeq e genes plasmidiais de virulência (pSLT) importantes para sobrevivência e multiplicação no hospedeiro e de resistência relacionados à produção de bombas de efluxo foram detectados na maioria das linhagens estudadas. Fenotipicamente foram observadas resistência apenas aos antimicrobianos estreptomocina, ampicilina e canamicina. A análise transcriptômica (RNA seq) de uma linhagem de S. Typhimurium ST313 cultivada em meio Luria-Bertani (LB) suplementado com sangue de carneiro a 37ºC evidenciou o aumento na expressão de genes relacionados ao metabolismo lipídico (oxidação de lipídeos) na linhagem invasiva, desempenhando um papel importante durante a infecção crônica e colonização tecidual. O gene fadA é necessário para oxidação do ácido graxo e o gene citX no metabolismo e transporte lipídico, ambos apresentaram aumento de expressão e até o dado momento essa via ainda não foi explorada em ST313. Foram realizados nocautes gênicos via Lambda Red para caracterização fenotípica e ensaios in vitro e in vivo para avaliar a patogênese de S. Typhimurium ST313. A interrupção dos genes alvos fadA e citX resultaram na diminuição da invasão em células HeLa e diminuição da replicação/sobrevivências em macrófagos J774. No ensaio in vivo no modelo alternativo de Galleria mellonella a porcentagem de larvas sobreviventes é superior as larvas inoculadas com linhagens mutantes durante o período de 72 horas, evidenciando a atenuação da virulência de S. Typhimurium ST313 em genes correlacionados ao metabolismo lipídico, também foi visualizado na análise histopatológica atenuação das lesões no tecido intestinal dos mutantes em comparação a linhagem selvagem. Portanto, os resultados obtidos até o momento contribuem para uma melhor caracterização da virulência deste tipo clonal e entendimento deste importante patógeno em nosso meio.