Eficácia das terapias fotodinâmica e sonodinâmica como métodos para inativação de espécies de candida. Estudo in vitro e clínico.

Abstract

Este trabalho avaliou a eficácia das Terapias Fotodinâmica Antimicrobiana (aPDT) e Sonodinâmica (SDT) na inativação de espécies de Candida. O estudo 1 avaliou a efetividade da aPDT na inativação de biofilmes de Candida albicans susceptível e resistente ao fluconazol, bem como seus efeitos sobre os fatores de virulência das cepas. Para isso, biofilmes destas cepas foram tratados com aPDT mediada pelo Photodithazine e luz LED. Após a aPDT, as células foram recuperadas e os fatores de virulência avaliados. A capacidade de adesão foi analisada pelos testes de XTT (atividade metabólica) e UFC/mL (viabilidade celular). A capacidade de formar biofilme foi avaliada pelos testes de XTT, UFC/mL e biomassa total. A síntese de exoenzimas foi avaliada por testes fluorimétricos. Os dados foram analisados por ANOVA a 2 ou 3 critérios (p≤0,05). Verificou-se que a aPDT reduziu a viabilidade das cepas, entretanto não alterou os fatores de virulência. No estudo 2, foi avaliada a efetividade da aPDT no tratamento de pacientes com estomatite protética em comparação com a Nistatina (NIS). Os pacientes do grupo aPDT (n=30) foram submetidos a 6 sessões de aPDT (3 vezes/semana, 15 dias) e os pacientes do grupo NIS (n=35) utilizaram o antifúngico 4 vezes/dia, durante 15 dias. Coletas microbiológicas das próteses e palatos foram realizadas e cultivadas em ágar sangue e chromagar (UFC/mL). Fotografias dos palatos foram tomadas para avaliação clínica da lesão. Os dados foram analisados pelo Modelo Linear de Medidas Repetida (p≤0,05). Foi observado que a aPDT foi mais efetiva em reduzir a microbiota total do que a NIS. A aPDT foi tão eficaz quanto a NIS em reduzir Candida spp. do palato. A aPDT e a NIS apresentaram percentual de melhora clínica da lesão similar. O estudo 3 avaliou a eficácia da aPDT, SDT e a combinação de ambos os tratamentos na inativação de C. albicans. Suspensões foram tratadas com aPDT e SDT e a efetividade foi determinada por UFC/mL. Os biofilmes foram tratados com aPDT, SDT e a combinação de ambos os tratamentos (aPDT+SDT). Os tratamentos foram avaliados por UFC/mL, biomassa total e microscopia. Os dados foram analisados por ANOVA (p≤0,05). Embora a aPDT e SDT tenham erradicado suspensões, estes tratamentos tiveram pouco efeito sobre os biofilmes. A associação da aPDT+SDT reduziu a viabilidade celular e a biomassa total

This work evaluated the efficacy of Antimicrobial Photodynamic (aPDT) and Sonodynamics (SDT) Therapies in the inactivation of Candida species. The study 1 evaluated the efficacy of aPDT in the inactivation of susceptible and fluconazole resistant Candida albicans biofilms, as well as its effect on the virulence factors of the strains. For this, biofilms were treated with aPDT mediated by Photodithazine and LED light. After aPDT, cells were recovered and the virulence factors were evaluated. The adhesion capacity was assessed by XTT assay (metabolic activity) and CFU/mL (cell viability). The ability to form biofilm was evaluated by XTT, CFU/mL and total biomass. The synthesis of exoenzymes was evaluated by fluorimetric tests. Data were analyzed by ANOVA-2 or 3 way (p≤0.05). It was found that aPDT reduced the viability of the strains, however aPDT did not alter the virulence factors. The study 2, evaluated the effectiveness of aPDT in the treatment of patients with denture stomatitis in comparison with Nystatin (NYS). Patients of the aPDT group (n=30) underwent 6 sessions of aPDT (3 times/week, 15 days). Patients of the NYS group (n=35) rinsed the antifungal, 4 times/day, for 15 days. Microbiological collections of dentures and palates were performed and cultured on blood agar and chromagar (CFU/mL). Photographs of the palates were taken for clinical evaluation. Data were analyzed by the Linear Model of Repeated Measures (p≤0.05). It was observed that aPDT was more effective in reducing the total microbiota than NYS. The aPDT was as effective as NYS to reduce Candida spp. of the palate. aPDT and NYS showed similar clinical improvement percentage. The study 3 evaluated the efficacy of aPDT, SDT and the combination of both treatments in the inactivation C. albicans. Planktonic cultures were treated with aPDT and SDT. Cell survival was determined by CFU/mL. Biofilms were treated with aPDT, SDT and the combination of both treatments (aPDT+SDT). Efficacy in treating biofilms was evaluated by CFU/mL, total biomass and microscopy. Data were analyzed by ANOVA (p≤0.05). Although aPDT and SDT completely eradicated planktonic cultures, these treatments had no effect on biofilms. However, the combined treatment (aPDT+SDT) reduced the cell viability and total biomass