Extrato e produtos comerciais à base de macroalgas no controle in vitro do fungo Colletotrichum gloeosporioides

Abstract

O fungo Colletotrichum gloeosporioides é o agente causal da podridão floral dos citros. Controlar a doença não é fácil, pois o controle convencional muitas vezes não é eficiente, havendo a necessidade de se realizar estudos com métodos alternativos. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito antifúngico in vitro de produtos comerciais à base de algas e de extrato aquoso à base da macroalga Kappaphycus alvarezii no crescimento micelial, esporulação e germinação de conídios de C. gloeosporioides. Nos experimentos de crescimento micelial e esporulação (realizados duas vezes para cada isolado fúngico) foram utilizados sete tratamentos com cinco repetições cada: testemunha; fungicida do grupo dos triazóis (10 µL mL-1), quatro concentrações do extrato aquoso da macroalga K. alvarezii (100, 1000, 10000, 50000 µL mL-1) e dois produtos comerciais à base de macroalgas (100 µL mL-1). Os tratamentos foram incorporados ao meio de cultura BDA (Batata-Dextrose-Ágar) e foram vertidos em placas de cultivo celular contendo seis “poços” de fundo chato. Diariamente, imagens foram obtidas do crescimento fúngico em cada “poço”. Considerou-se como último dia de avaliação, aquele em que o micélio na testemunha se desenvolvesse até a borda de 50 % + 1 dos poços. A porcentagem da área do poço coberta pelo micélio foi analisada pelo software Quant. Ao final, foi realizada a avaliação da esporulação, adicionando-se 3 mL de água destilada esterilizada em cada poço. A suspensão de esporos obtida foi transferida para câmara de Neubauer (três alíquotas individuais de 100µL por repetição) para contagem dos esporos. Para a germinação de conídios utilizou-se duas placas por tratamento, com três alíquotas de suspensão de esporos ( 104 esporos mL-1) depositadas sobre meio ágar-água fundido aos tratamentos, totalizando seis repetições por isolado. Posteriormente, as placas foram levadas a BOD dentro de uma caixa plástica tipo ´´Gerbox`` com papel filtro umedecido. As caixas foram mantidas durante 9 horas de luz constante e temperatura de 23 ºC e, após esse período, aplicou-se 20 µL de lactoglicerol em cada alíquota para cessar a germinação dos conídios, o qual foi avaliado 100 esporos germinados, ou seja, esporos em que o tubo germinativo seja maior ou igual ao seu comprimento. A inibição do crescimento micelial, da esporulação e da germinação de conídios (% em relação à testemunha) versus a concentração dos extratos (log10) foram submetidos à análise de regressão (p<0,05) porém, não foi possível estimar a concentração efetiva capaz de inibir 50% do desenvolvimento fúngico (CE50). Em relação aos produtos comerciais, não houve diferença estatística em relação à testemunha , tanto para o crescimento micelial quanto para a esporulação.

The fungus Colletotrichum gloeosporioides is the causal agent of postbloom fruit drop (PFD). Controlling the disease is not easy, as conventional control is often not efficient, and, therefore, there is a need to carry out studies with alternative control methods. The objective of this work was to evaluate the in vitro antifungal effect of commercial products based on algae and an extract based on the macroalgae Kappaphycus alvarezii on mycelial growth, sporulation, and germination of C. gloeosporioides. In the mycelial growth and sporulation experiments (carried out twice for each fungal isolate), seven treatments were used with five replications each, as follows: control; fungicide one from the triazole group (10 µL.mL-1), four concentrations of the aqueous extract of the macroalgae K. alvarezii (100, 1000, 10000,50000 µL.mL-1) and two commercial algae-based products (100 µL .mL-1). The treatments were incorporated into the Potato-Dextrose-Agar medium and poured into bottles containing six. Daily images were obtained of fungal growth in each well. The last day of evaluation was the day on which the mycelia in the control developed to the edge of 50% + 1 of the wells. The percentage of the well area covered by mycelium was analyzed by Quant software. Finally, sporulation was assessed by adding 3 mL of sterilized distilled water to each well. The spore suspension obtained was transferred to a Neubauer chamber (three individual aliquots of 100µL per repetition) for spore counting. For the germination of conidia, two plates were used per treatment, with three aliquots of spore suspension (104 spores mL-1) deposited on water agar medium mixed with the treatments, totaling six replicates per isolate. Subsequently, the plates were taken to BOD inside a ´´Gerbox`` plastic box with moistened filter paper. The boxes were kept for 9 hours of constant light and a temperature of 23 ºC and, after this period, 20 µL of lactoglycerol was applied to each aliquot to stop the germination of conidia, which was evaluated 100 germinated spores, i.e. spores in which the germ tube is greater than or equal to its length. The inhibition of mycelial growth, sporulation, and conidial germination (% in relation to the control) versus the concentration of extracts (log10) were subjected to regression analysis (p<0.05) and it was not possible to estimate the effective concentration capable of inhibiting 50% of fungal development (EC50). In relation to commercial products, there was no statistical difference in relation to the control, both for mycelial growth and for sporulation.