Avaliação da funcionalidade molecular de MICA e MICB em indivíduos saudáveis

Abstract

As moléculas MICA e MICB são expressas constitutivamente em fibroblastos, monócitos e células epiteliais, no entanto, sua expressão é estimulada em condições como o câncer, infecções e doenças autoimunes, agindo como marcador de estresse celular. Os genes MICA e MICB estão codificados no cromossomo 6 na região do Complexo Principal de Histocompatibilidade (MHC), a região mais variável do genoma humano. Variantes desses genes parecem estar associadas a um perfil diferencial de expressão das moléculas na superfície das células e à liberação de moléculas solúveis, modulando o sistema imunológico ao interagir com o receptor NKG2D, presente em células natural killer e subpopulações de linfócitos T. Esse projeto visa avaliar a funcionalidade molecular de MICA e MICB em indivíduos saudáveis, identificando marcadores genéticos que modificam o perfil transcricional dos genes, seus padrões de edição e produção de moléculas solúveis, em células mononucleares em situações fisiológicas e após estímulo. Para isso, selecionamos amostras com um perfil genético característico após sequenciamento de segunda geração (e.g., portadoras de variantes não sinônimas), para realização de cultura de células mononucleares. Em seguida, quantificamos a expressão de MICA e MICB em diferentes níveis (mRNA, proteína de membrana e forma solúvel) antes e após estímulo com peróxido de hidrogênio ou LPS. Os dados de expressão foram correlacionados com o perfil genético das amostras. Os estímulos utilizados não foram capazes de estimular significativamente os níveis de MICA e MICB na superfície celular de monócitos e de moléculas solúveis circulantes no plasma. No entanto, a porcentagem de células monocíticas expressando MICA na superfície foi significativamente maior em individuos portadores do alelo MICA*008 em homozigose e em heterozigose em relação aos outros alelos. Os indíviduos portadores do genótipo MICB*002 apresentaram uma porcentagem significativa de monócitos expressando MICB na superfície. Portanto, demonstrar a heterogeneidade de expressão dessas moléculas na superfície celular de indivíduos saudáveis e/ou liberadas de maneira solúvel no sobrenadante e plasma pode servir de base para compreender a dinâmica entre as moléculas MICA e MICB em diversas situações patológicas ou transplantes, além de auxiliar em estudos de associações com doenças.