Avaliação da influência da mutação L452R da glicoproteína Spike do SARS-COV-2, variante P.4, sobre a interação com anticorpos Anti-S

Abstract

No final de 2019, surgiu a COVID-19 na cidade de Wuhan, na China e esta se dispersou pelo mundo em poucos meses. Em março de 2020, a Organização Mundial da Saúde decretou estado de pandemia. Desde então, o mundo vem lutando contra a COVID-19. Em 2020, variantes do vírus original começaram a surgir, o que já era esperado. A falta de vacinas, a dificuldade na contenção da pandemia e a alta recombinação gênica do SARS-CoV-2, tornaram possíveis o surgimento de inúmeras variantes. Estas variantes vêm sendo estudadas quanto aos comportamentos analisados sob os aspectos imunológicos e desenvolvimento da doença. Dada a descoberta da mutação L452R no domínio RBD (Receptor-Binding Domain) da Spike (proteína S) do vírus SARS-CoV-2, em circulação no Estado de São Paulo, o presente trabalho teve como proposta o estudo in silico da RBD e a síntese peptídica correspondente à região contendo a mutação L452R e sua influência frente a anticorpos policlonais anti-Spike. O método empregado no processo de síntese do peptídeo com a mutação mostrou-se adequada, com excelente qualidade do produto final, observada após clivagem e precipitação. A solubilidade do peptídeo após tratamento com ácido acético também foi um fator importante, o que permitiu a confirmação da sequência e da pureza do peptídeo pela análise de espectroscopia de massa. Embora as análises pelo método de ELISA com soros policlonais não evidenciou uma reatividade que permitisse o emprego deste peptídeo sintetizado para o teste diagnóstico, novas modificações na imobilização deverão ser feitas para melhorar a reatividade imunoquímica.

In late 2019 COVID-19 emerged in the city of Wuhan in China, and it dispersed around the world within a few months. In March 2020, the World Health Organization declared a pandemic. Since then, the world has been fighting against COVID-19. In 2020, variants of the original virus began to appear, which was already expected. The lack of vaccines, the difficulty in containing the pandemic and the high gene recombination of SARS-CoV-2 made possible the emergence of numerous variants. These variants have been studied regarding their behavior under immunological aspects and disease development. Given the discovery of the L452R mutation in the RBD domain (Receptor-Binding Domain) of the Spike (S protein) of the SARS-CoV-2 virus circulating in the State of São Paulo, this study aimed at the in silico study of the RBD and the peptide synthesis corresponding to the region containing the L452R mutation and its influence against polyclonal anti-Spike antibodies. The methodology used in the process of peptide synthesis with the mutation proved to be adequate with an excellent quality of the final product, observed after cleavage and precipitation. The solubility of the peptide after treatment with acetic acid was also an important factor, which allowed confirmation of the sequence and purity of the peptide by analysis with mass spectrometry. Although the analysis by the ELISA method with polyclonal sera did not show a reactivity that would allow the use of this synthesized peptide for the diagnostic test, new modifications in the immobilization should be made to improve the immunochemical reactivity.