Efeito citotóxico da associação de brilacidina com células NK-92 expressando CAR específico para Candida albicans

Abstract

As infecções fúngicas invasivas causadas por Candida albicans representam um desafio clínico relevante em pacientes imunocomprometidos, devido à alta mortalidade e ao surgimento de cepas resistentes aos antifúngicos convencionais. Nesse contexto, terapias celulares baseadas em células NK-92 modificadas com receptores antigênicos quiméricos (CAR-NK) têm se mostrado uma abordagem promissora. Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito citotóxico de células CAR-NK específicas para C. albicans e investigar o potencial efeito combinado com o antifúngico brilacidina. As células NK-92 foram transduzidas com o construto scFvκ3-1-CAR, enriquecidas por cell sorting e co-cultivadas com C. albicans. A concentração inibitória mínima (MIC) da brilacidina foi determinada por microdiluição, revelando variação de atividade antifúngica conforme o meio de cultivo utilizado. Ensaios de viabilidade fúngica foram conduzidos para avaliar a citotoxicidade de células CAR-NK isoladas ou associadas à brilacidina em diferentes protocolos experimentais. Além disso, a sinergia entre brilacidina e equinocandinas (caspofungina, micafungina e anidulafungina) foi analisada pelo índice de concentração inibitória fracionária (FIC). Os resultados demonstraram que as células CAR-NK mantiveram alta viabilidade e exibiram efeito citotóxico específico contra C. albicans. A associação com brilacidina não apresentou sinergia clara com as células, embora tenha potencializado parcialmente a atividade citotóxica em condições específicas. A análise do índice FIC indicou que a combinação de baixas concentrações de brilacidina (2,5 µM) e caspofungina (1,75 ng/mL) apresentou efeito sinérgico, enquanto combinações com micafungina foram indiferentes e com anidulafungina foram antagônicas. Esses achados sugerem que a combinação entre brilacidina, caspofungina e células CAR-NK poderá representar uma estratégia terapêutica ainda mais eficaz, perspectiva que será explorada em estudos futuros, contribuindo para o desenvolvimento de estratégias de imunoterapia antifúngica.

Invasive fungal infections caused by Candida albicans represent a significant clinical challenge in immunocompromised patients, due to high mortality and the emergence of strains resistant to conventional antifungals. In this context, cell-based therapies using NK-92 cells modified with chimeric antigen receptors (CAR-NK) have emerged as a promising approach. This study aimed to evaluate the cytotoxic effect of CAR-NK cells specific to C. albicans and to investigate the potential combined effect with the antifungal brilacidin. NK-92 cells were transduced with the scFvκ3-1-CAR construct, enriched by cell sorting, and co-cultured with C. albicans. The minimum inhibitory concentration (MIC) of brilacidin was determined by microdilution, revealing variation in antifungal activity depending on the culture medium utilized. Fungal viability assayswere performed to assess the cytotoxicity of CAR-NK cells alone or in combination with brilacidin under different experimental protocols. In addition, the synergy between brilacidin and echinocandins (caspofungin, micafungin, and anidulafungin) was analyzed using the fractional inhibitory concentration index (FIC). Results showed that CAR-NK cells maintained high viability and exhibited specific cytotoxic activity against C. albicans. The combination with brilacidin did not show clear synergy with the cells, although it partially enhanced cytotoxic activity under particular conditions. FIC index analysis indicated that the association of low concentrations of brilacidin (2.5 µM) and caspofungin (1,75 ng/mL) exhibited a synergistic effect, while combinations with micafungin were indifferent and with anidulafungin were antagonistic. These results suggest that the combination of brilacidin, caspofungin, and CAR-NK cells may represent an even more effective therapeutic strategy. This perspective will be explored in future studies, contributing to the development of antifungal immunotherapy strategies.