Estafilococos não-aureus e sua influência no crescimento de S. aureus

Abstract

A mastite é uma doença importante nos rebanhos bovinos, tratada com antibióticos, promovendo preocupações quanto ao aumento de bactérias resistentes e a busca por novas alternativas de prevenção. Este estudo avaliou a ação antimicrobiana de 44 isolados de Staphylococcus não-aureus (NAS) contra S. aureus meticilina resistentes (n=5) e sensíveis (n=5). Os NAS foram inoculados em uma linha central em meio ágar sangue e incubados por 24h/37C. Após incubação, o ágar foi invertido na placa de Petri e a cultura de cada Staphylococcus aureus foi espraiada com ajuda de um swab em todo o ágar. As placas foram incubadas por 24h/37oC e foi medido em milímetros o halo de inibição de cada NAS. Dos 44 NAS, 14 (31,8%) inibiram S. aureus, sendo 7 (50%) S. chromogenes, 3 (21,42%) S. haemolyticus, 3 (21,42%) S. simulans e 1 (7,14%) S. warneri. Destes, 5 (35,71%) inibiram S. aureus meticilina resistente (MRSA) e 9 (64,28%) contra S. aureus meticilina sensível (MSSA). Em seguida, determinou-se a curva de crescimento de 10 cepas que mostraram maior inibição no teste anterior, incubando-os em caldo BHI e medindo a densidade óptica a cada 30 minutos por 20 horas. Cepas de NAS foram incubadas, lavadas, diluídas e semeadas em ágar TSA. No dia seguinte, isolados de S. aureus foram lavados e inoculados em placas contendo NAS e após 18 horas de incubação, calculou-se o número de unidades formadoras de colônias (UFC)/mL. Essa etapa quantitativa confirmou a ação dose-dependente dos NAS, com concentrações mais altas (≥10⁵ UFC/mL) mostrando maior eficácia na inibição do patógeno. Por último, isolados de S. aureus foram diluídos e adicionados em placas de Petri com TSA, X-Gal e eritromicina a fim de avaliar a influência dos sobrenadantes de NAS sobre a expressão dos fatores de virulência de S. aureus. Após a adição de sobrenadantes, as placas foram incubadas a 37°C. Formou-se halos de coloração azul, cujo diâmetro indicou a expressão gênica, demonstrando que alguns sobrenadantes de NAS modularam a expressão do gene hla::lacZ (PC322). Através dos resultados obtidos, podemos concluir que os isolados de NAS avaliados neste estudo tem potencial de inibir S. aureus causadores de mastite, evidenciando um possível papel de prevenção da mastite bovina.

Mastitis is an important disease in bovine herds, treated with antibiotics, raising concerns about the increase of resistant bacteria and the search for new prevention alternatives. This study evaluated the antimicrobial action of 44 non-aureus Staphylococcus (NAS) isolates against methicillin-resistant S. aureus (n=5) and methicillin-sensitive S. aureus (n=5). NAS were inoculated in a central line on blood agar medium and incubated for 24h/37°C. After incubation, the agar was inverted onto a Petri dish, and each S. aureus culture was spread with a swab over the entire agar. Plates were incubated for 24h/37°C, and the inhibition halo of each NAS was measured in millimeters. Of the 44 NAS, 14 (31.8%) inhibited S. aureus, with 7 (50%) being S. chromogenes, 3 (21.42%) S. haemolyticus, 3 (21.42%) S. simulans, and 1 (7.14%) S. warneri. Of these, 5 (35.71%) inhibited methicillin-resistant S. aureus (MRSA) and 9 (64.28%) inhibited methicillin-sensitive S. aureus (MSSA). Subsequently, the growth curve of 10 strains showing the greatest inhibition in the previous test was determined by incubating them in BHI broth and measuring optical density every 30 minutes for 20 hours. NAS strains were incubated, washed, diluted, and plated on TSA agar. The next day, S. aureus isolates were washed and inoculated onto plates containing NAS. After 18 hours of incubation, the number of colony-forming units (CFU)/mL was calculated. This quantitative stage confirmed the dose-dependent action of NAS, with higher concentrations (≥10⁵ CFU/mL) showing greater efficacy in pathogen inhibition. Finally, S. aureus isolates were diluted and added to Petri dishes with TSA, X-Gal, and erythromycin to assess the influence of NAS supernatants on the expression of S. aureus virulence factors. After adding the supernatants, plates were incubated at 37°C. Blue-colored halos formed, whose diameter indicated gene expression, demonstrating that some NAS supernatants modulated the expression of the hla::lacZ gene (PC322). From the results obtained, we can conclude that the NAS isolates evaluated in this study have the potential to inhibit mastitis-causing S. aureus, indicating a possible role in the prevention of bovine mastitis