Avaliação in vitro da capacidade antitumoral do extrato bruto e frações da folha de Garcinia brasiliensis no glioblastoma humano
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Data
Autores
Orientador
Girol, Ana Paula 
Coorientador
Pós-graduação
Biociências (Genética) - IBILCE
Curso de graduação
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Tese de doutorado
Direito de acesso
Acesso restrito
Resumo
Resumo (português)
O glioblastoma (GBM) é o tumor maligno mais comum e agressivo do sistema nervoso central em adultos. Cresce rapidamente, infiltra o tecido cerebral e apresenta alta taxa de recidiva. O tratamento padrão inclui cirurgia, radioterapia e quimioterapia com temozolomida, mas enfrenta limitações devido à natureza invasiva do tumor, efeitos adversos e baixa sobrevida média dos pacientes. Diante da limitação terapêutica atual e da necessidade de novas abordagens compostos de origem natural têm sido investigados como potenciais agentes antitumorais. Entre as fontes promissoras de compostos bioativos destacam-se espécies vegetais ricas em metabólitos secundários com potencial antitumoral, como Garcinia brasiliensis (bacupari), estudada por suas propriedades anti-inflamatórias, antioxidantes e citotóxicas. Portanto, o presente estudo teve como objetivo caracterizar o extrato etanólico bruto (EB) e frações acetato de etila (FAE) e clorofórmio (FC) das folhas de Garcinia brasiliensis e avaliar seu potencial efeito antitumoral em linhagens de glioblastoma humano. A caracterização do extrato incluiu análises qualitativas e quantitativas, cromatografia em camada delgada de alta performance (HPTLC) e cromatografia líquida de ultra-alta eficiência (UHPLC-MS/MS), além da avaliação da atividade antioxidante pelo método do DPPH (2,2-difenil-1-picril-hidrazila). Para os ensaios in vitro, foram utilizadas duas linhagens tumorais de glioblastoma humano (A172 e U87MG) e uma linhagem não tumoral endotelial (EA.hy926). O EB e FAE foram testados em diferentes concentrações 50, 100, 150, 200, 250, 300 e 350 μg/mL e tempos 24, 48 e 72 horas para análise de proliferação e viabilidade celular pelo ensaio de MTT. Apenas a FAE atingiu valores de IC₅₀, sendo a concentração de 150 μg/mL em 24 horas selecionada para os experimentos posteriores. Com essa condição, foram realizados experimentos para análise de morfologia, ciclo celular, apoptose além da quantificação de citocinas (INF-γ, TNF-ꭤ e IL-6), ensaio de migração (wound healing), e análise da expressão dos genes (mTOR, PTEN, TP53 e STAT3). Os dados obtidos demonstraram que a FAE reduziu a proliferação e viabilidade de células tumorais além de promover apoptose. O ensaio de migração demonstrou que a FAE interfere de maneira dependente do tipo celular, mantendo a migração celular da linhagem não tumoral EA.hy926, enquanto reduziu significativamente a migração das linhagens tumorais, com maior efeito observado na U87MG. A análise de expressão gênica mostrou modulação diferencial dos genes mTOR, PTEN, TP53 e STAT3: na linhagem EA.hy926 houve redução de mTOR e PTEN e aumento de STAT3 e TP53, enquanto na A172 ocorreu o oposto. Já a U87MG apresentou alterações mais discretas, com leve aumento de mTOR, PTEN e STAT3 e redução moderada de TP53. Esses achados indicam que a FAE reduz a proliferação e viabilidade das células tumorais, induz apoptose e modula processos de migração e expressão gênica de forma dependente do tipo celular. Esses achados sugerem que compostos bioativos presentes na FAE de Garcinia brasiliensis apresentam efeitos antitumorais e moduladores do microambiente inflamatório em células de glioblastoma, abrindo novas oportunidades para estudos futuros em abordagens terapêuticas para o tratamento do glioblastoma.
Resumo (inglês)
Glioblastoma (GBM) is the most common and aggressive malignant tumor of the central nervous system in adults. It grows rapidly, infiltrates brain tissue and has a high recurrence rate. The standard treatment includes surgery, radiotherapy and chemotherapy with temozolomide, but it faces limitations due to the invasive nature of the tumor, adverse effects and the low average survival of patients. Given the current therapeutic limitations and the need for new approaches, naturally derived compounds have been investigated as potential antitumor agents. Among the promising sources of bioactive compounds are plant species rich in secondary metabolites with antitumor potential, such as Garcinia brasiliensis (bacupari), which has been studied for its anti-inflammatory, antioxidant and cytotoxic properties. Therefore, the present study aimed to characterize the crude ethanolic extract (EE) and the ethyl acetate (EAF) and chloroform (CF) fractions from the leaves of Garcinia brasiliensis and to evaluate their potential antitumor effect on human glioblastoma cell lines. Extract characterization included qualitative and quantitative analyses, high-performance thin-layer chromatography (HPTLC), ultra-high-performance liquid chromatography (UHPLC-MS/MS), and assessment of antioxidant activity using the DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) method. For the in vitro assays, two human glioblastoma tumor cell lines (A172 and U87MG) and one non-tumor endothelial cell line (EA.hy926) were used. EE and EAF were tested at different concentrations—50, 100, 150, 200, 250, 300 and 350 μg/mL—and at 24, 48, and 72 hours to analyze cell proliferation and viability using the MTT assay. Only the EAF reached IC₅₀ values and the concentration of 150 μg/mL at 24 hours was selected for subsequent experiments. Under these conditions, experiments were carried out to analyze morphology, cell cycle, apoptosis, quantification of cytokines (IFN-γ, TNF-α, and IL-6), a migration (wound healing) assay and gene expression analysis (mTOR, PTEN, TP53, and STAT3). The data showed that EAF reduced tumor cell proliferation and viability and promoted apoptosis. The migration assay demonstrated that EAF interferes in a cell-type–dependent manner, maintaining the migration of the non-tumor EA.hy926 cell line while significantly reducing migration in the tumor lines, with the greatest effect observed in U87MG. Gene expression analysis revealed differential modulation of mTOR, PTEN, TP53 and STAT3: in EA.hy926 cells there was a reduction in mTOR and PTEN and an increase in STAT3 and TP53, whereas in A172 cells the opposite occurred. U87MG showed more subtle changes, with a slight increase in mTOR, PTEN and STAT3 and a moderate reduction in TP53. These findings indicate that EAF reduces proliferation and viability of tumor cells, induces apoptosis and modulates migration processes and gene expression in a cell-type–dependent manner. The results suggest that bioactive compounds present in the EAF of Garcinia brasiliensis possess antitumor and inflammatory microenvironment-modulating effects in glioblastoma cells, opening new opportunities for future studies in therapeutic approaches for glioblastoma treatment.
Descrição
Palavras-chave
Tumor cerebral, Bacupari, Extrato vegetal, Proliferação celular, Citotoxicidade, Brain tumor, Plant extract, Cell proliferation, Cytotoxicity
Idioma
Português
Citação
BALIE, Mariana. Avaliação in vitro da capacidade antitumoral do extrato bruto e frações da folha de Garcinia brasiliensis no glioblastoma humano. (Doutorado em Biociências (Genética)). 2025. Universidade Estadual Paulista (Unesp), Instituto de Biociências Letras e Ciências Exatas (Ibilce), São José do Rio Preto, 2025.
