Avaliação da miotoxicidade e neurotoxicidade (com foco na junção neuromuscular) após aplicação de bupivacaina seguida de laser terapia

Abstract

A bupivacaina é um anestésico utilizado na prática médica e odontológica para bloqueio do nervo periférico e alívio da dor pré e pós-operatória devido à sua ação analgésica de longa duração. Suas principais limitações são a miotoxicidade, a neurotoxicidade e a inflamação. A laserterapia de baixa potência (LBP) tem sido utilizada para várias propostas terapêuticas, apresentando ação anti-inflamatória, regenerativa e analgésica. O objetivo do estudo foi avaliar o efeito do laser de Arseneto de Gálio (AsGa) sobre a morfologia das junções neuromusculares, fibras musculares e nervo associados ao músculo esternomastóideo de ratos após injeção de bupivacaina. 32 ratos Wistar machos adultos foram divididos em 2 grupos: Grupo Controle (C: n=16) e Grupo Laser (L: n= 16). Os grupos foram subdivididos seguindo os antímeros e substâncias injetadas: direito (bupivacaina 0,5%), esquerdo (Cloreto de sódio 0,9%). Após 24 horas houve aplicação de LBP (AsGa 904nm, 50mW, 4,8J) durante 5 dias consecutivos. A seguir, os animais foram eutanasiados, o sangue foi coletado para determinação da creatina kinase (CK); a porção superficial dos músculos esternomastóideos e os nervos associados foram dissecados, removidos e submetidos às seguintes análises: análise histopatológica e ultraestrutural; análises morfológica e morfométrica das JNMs (reação Esterase inespecífica), microscopia confocal de varredura a laser e análise ultraestrutural; e os nAChRs (alpha, beta e gama) e os níveis de TNF foram quantificados pelo Western Blotting; foi ainda realizada morfometria dos nervos e quantificação da CK muscular. Não foram observadas alterações no antímero que recebeu o cloreto de sódio com ou sem aplicação de laser. Os músculos que receberam bupivacaina apresentaram maiores níveis de inflamação, atrofia e necrose e dos valores de CK muscular; maior número de núcleos central e porcentagem de colágeno, o diâmetro máximo das junções foram menores quando comparado aos músculos que receberam cloreto de sódio, não havendo efeito neurotóxico. Após aplicação do laser terapia houve redução nos scores histopatológicos, no número de núcleos centrais, na porcentagem de colágeno, havendo aumento no diâmetro máximo das JNM. Ultraestruturalmente foi observada redução da mionecrose, havendo recuperação nas dobras juncionais e zona ativa. Através da microscopia confocal houve aumento no perímetro dos nAChR, bem como aumento na área relativa planar. A análise da expressão proteica do nAChR1 mostrou similaridade nos grupos estudados. Houve aumento da expressão proteica da subunidade  após aplicação de LLLT. Os valores de TNF mantiveram-se constantes. A LBP, na dose utilizada, reduziu a fibrose e mionecrose no músculo esternomastóideo desencadeada pela bupivacaina, acelerando o processo de regeneração muscular. Também reduziu as alterações estruturais da JNM e molecular dos nAChRs desencadeadas pela bupivacaina, fornecendo dados importantes para indicação da LBP em protocolos terapêuticos de lesões desencadeadas pelos anestésicos locais.