Análise do perfil glicoproteômico do veneno da vespa social Polybia paulista

Abstract

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Polybia paulista é uma vespa social muito agressiva, e clinicamente relevante por causar muitos acidentes por ferroadas todos os anos no sul e sudeste brasileiro. O seu veneno é composto por uma mistura complexa de moléculas bioativas - compostos de baixas massas moleculares, peptídeos e proteínas alergênicas como fosfolipases A1 e A2, hialuronidase, fosfatase ácida e antígeno 5. Em nosso laboratório, esse veneno tem sido investigado por abordagens proteômicas e peptidômicas, além de análises de estudos de alérgenos, o que significativamente tem contribuído para a identificação dos compostos do veneno e uma melhor compreensão do processo de envenenamento. No entanto, muitas proteínas não foram identificadas ainda. Os resultados obtidos com a análise proteômica bottom-up, realizada anteriormente em nosso laboratório, demonstraram que somente as proteínas mais abundantes foram identificadas, e algumas dessas proteínas motraram-se imunoreativas e glicosiladas. Nesse estudo foi utilizado o kit Pro-Q Emerald 300 glycoprotein gel (GE Healthcare) para detecção de carboidratos totais presentes nos spots proteicos diretamente no gel, no entanto as proteínas menos abundantes, e com menores valores de massas deixaram de ser detectadas. Possivelmente isso se deve não só a complexidade da composição bioquímica do veneno, mas também devido às limitações técnicas da abordagem utilizada, durante o período em que o estudo foi realizado. Sendo assim, decidimos por analisar o proteoma do veneno da P. paulista através da abordagem proteômica do tipo shotgun. Com essa estratégia foi possível aumentarmos o número de identificações de proteínas presentes no veneno, além da possibilidade de utilizarmos métodos de enriquecimento das proteínas N-glicosiladas, utilizando o kit Glycoprotein Isolation, ConA (Thermo Scientific™), permitindo a análise e identificação das moléculas que apresentam esse tipo de modificação...