Caracterização dos parâmetros espermáticos do sêmen asinino (Equus asinus) criopreservado com a utilização de diferentes crioprotetores e concentrações
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Data
Autores
Orientador
Segabinazzi, Lorenzo Martini Garrido Teixeira 
Coorientador
Monteiro, Gabriel Augusto
Pós-graduação
Biotecnologia Animal - FMVZ
Curso de graduação
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Tipo
Dissertação de mestrado
Direito de acesso
Acesso restrito
Resumo
Resumo (português)
O declínio das populações globais de jumentos tem intensificado a necessidade de aprimoramento das técnicas de criopreservação de sêmen. No entanto, os resultados de fertilidade do uso do sêmen congelado nesta espécie são insatisfatórios. Nesse contexto, busca-se melhorar os resultados do sêmen congelado asinino, contribuindo com a conservação da espécie. O objetivo do presente estudo foi avaliar: (Experimento 1) os efeitos de diferentes crioprotetores permeáveis — glicerol (GLY), etilenoglicol (ETI), metilformamida (MF) e dimetilformamida (DMF) — na qualidade espermática do sêmen criopreservado de jumentos; (Experimento 2) comparar a eficácia da combinação GLY:DMF (1:4) em relação ao crioprotetor comercial (GLY:MF; 1:4); e (Experimento 3) investigar o impacto da redução das concentrações desses crioprotetores (GLY:MF; 1:4) a 5%, 3% e 2% sobre as características espermáticas. Foram utilizados 35 ejaculados de jumentos da raça Pêga em cada um dos experimentos. No Experimento 1, as amostras foram criopreservadas utilizando meio base BotuCrio® (sem crioprotetor e com 10% de gema de ovo) adicionado de 5% de GLY, ETI, MF ou DMF; o BotuCrio® comercial (BC, 1% GLY e 4% MF) foi utilizado como controle. No Experimento 2, utilizou-se a associação 1:4 de GLY:DMF, comparada ao Botucrio® (GLY:MF; 1:4). No Experimento 3, empregou-se meio à base de BotuCrio® contendo 5%, 3% ou 2% da combinação crioprotetora BC (GLY:MF; 1:4;). As palhetas foram congeladas em uma curva de congelamento média (~25°C/min) e armazenadas em nitrogênio líquido. A cinética espermática foi analisada pelo sistema computadorizado CASA. A integridade de membrana plasmática foi avaliada por microscopia de fluorescência (PMI), enquanto a estabilidade da membrana plasmática (PMS), integridade da membrana plasmática e acrossomal (PMAI), o potencial mitocondrial (HMMP), e a produção de superóxido intracelular (O2-), por citometria de fluxo. Os dados foram analisados por modelo misto/Bonferroni (dados paramétricos) e Kruskal-Wallis/Dunn (dados não paramétricos), considerando P<0,05. No Exp. 1, o parâmetro de motilidade total (TM) foi melhor preservado nos grupos BC e DMF (P<0,05). No entanto, BC apresentou maior motilidade progressiva (PM) (P<0,05). BC e DMF também mantiveram maior PMI. A PMAI, PMS e HMMP foram superiores com o uso de DMF (P<0,05). No Exp. 2, a PM foi superior no grupo controle em comparação ao GLY:DMF (P<0,05). No Exp. 3, TM e PMI não foram afetados pelas diferentes concentrações testadas (P>0,05), enquanto PM e RAP foram superiores na concentração de 5% em relação à de 2% (P<0,05), mas semelhantes à de 3% (P>0,05). A PMI, PMAI e a produção de O2- permaneceram estáveis, independentemente da concentração utilizada (P>0,05). Por outro lado, a concentração de 5% resultou em menores valores de PMS e HMMP em comparação aos grupos 3% e 2% (P<0,05), que não diferiram entre si.
Resumo (inglês)
The decline of global donkey populations has intensified the need to improve semen cryopreservation techniques. However, fertility outcomes following the use of frozen-thawed semen in this species remain unsatisfactory. In this context, enhancing donkey semen cryopreservation could contribute to the conservation of the species. The aim of the present study was to evaluate: (Experiment 1) the effects of different permeable cryoprotectants—glycerol (GLY), ethylene glycol (ETI), methylformamide (MF), and dimethylformamide (DMF)—on the quality of cryopreserved donkey semen; (Experiment 2) the efficacy of GLY:DMF (1:4) compared with the commercial cryoprotectant (GLY:MF; 1:4); and (Experiment 3) the impact of reducing the concentrations of this cryoprotectant combination (GLY:MF; 1:4) to 5%, 3%, and 2% on sperm characteristics. A total of 35 ejaculates from Pêga donkeys were used in each experiment. In Experiment 1, samples were cryopreserved using BotuCrio® base medium (without cryoprotectant and with 10% egg yolk) supplemented with 5% GLY, ETI, MF, or DMF; commercial BotuCrio® (BC; 1% GLY and 4% MF) was used as control. In Experiment 2, the association GLY:DMF (1:4) was compared with BC. In Experiment 3, BotuCrio®-based extender was supplemented with 5%, 3%, or 2% of the BC cryoprotectant combination (GLY:MF; 1:4). Straws were frozen using a medium-rate curve (~25°C/min) and stored in liquid nitrogen. Sperm motility was assessed by computer-assisted sperm analysis (CASA). Plasma membrane integrity (PMI) was evaluated by fluorescence microscopy, while plasma membrane stability (PMS), plasma and acrosomal membrane integrity (PMAI), high mitochondrial membrane potential (HMMP), and intracellular superoxide production (O2–) were analyzed by flow cytometry. Data were analyzed using mixed model/Bonferroni (parametric data) and Kruskal–Wallis/Dunn (non-parametric data), with significance set at P<0.05. In Experiment 1, total motility (TM) was better preserved in BC and DMF groups (P<0.05), although BC showed higher progressive motility (PM) (P<0.05). BC and DMF also maintained higher PMI, while DMF showed superior PMAI, PMS, and HMMP (P<0.05). In Experiment 2, PM was higher in the control compared with GLY:DMF (P<0.05). In Experiment 3, TM and PMI were not affected by the different concentrations (P>0.05), whereas PM and RAP were superior at 5% compared with 2% (P<0.05), but similar to 3% (P>0.05). PMI, PMAI, and O2– production remained stable across concentrations (P>0.05). Conversely, the 5% concentration resulted in lower PMS and HMMP compared with 3% and 2% (P<0.05), which did not differ from each other.
Descrição
Palavras-chave
Jumento, Espermatozoide, Sêmen congelado, Cinética espermática
Idioma
Português
Citação
SANTOS, CZ. Caracterização dos parâmetros espermáticos do sêmen asinino (Equus asinus) criopreservado com a utilização de diferentes crioprotetores e concentrações. 2025. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia Animal) – - Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista (UNESP), Botucatu, 2025.
