Avaliação da estrutura e atividade biológica do mastoparano Polybia-MPII marcado com fluoróforo e visualização de sua ação em mastócitos através da microscopia de fluorescência

Abstract

Os venenos de vespas têm importantes ações farmacológicas e imunológicas durante os envenenamentos (HABERMANN, 1972). A liberação de histamina a partir da desgranulação dos mastócitos pode causar ativação de vários processos inflamatórios. As toxinas peptídicas destes venenos podem ainda causar lise de diferentes tipos celulares, quimiotaxia de macrófagos e leucócitos. Dentre os peptídeos mais comuns aos venenos de vespas sociais estão os mastoparanos, conhecidos por interagirem com membranas celulares, causando diferentes ações farmacológicas como, por exemplo, o Polybia-MPII isolado do veneno de Polybia paulista (DE SOUZA, 2005). Desta forma, a proposta deste trabalho foi de identificar possíveis locais de atuação deste peptídeo no interior dos mastócitos, através de fluorescência. A preparação do peptídeo para acoplamento de um grupo fluoróforo exigiu a cisteinilação do mesmo, e a caracterização do peptídeo modificado. Para obtenção dos peptídeos foi utilizada a técnica de síntese automática de peptídeos em fase sólida, com posterior purificação em cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC), e análise em espectrometria de massas para verificação da pureza, para assim serem realizados os ensaios de antibiose e desgranulação de mastócito. Além disso, foram realizadas análises de dicroísmo circular para verificar as alterações estruturais causados pela modificação na estrutura do Polybia-MPII, e experimento de microscopia de fluorescência, utilizando-se o peptídeo marcado com fluoróforo, em mastócitos do peritônio de camundongos Wistar fêmea. As formas sintéticas dos peptídeos Polybia-MPII e cisteinil-Polybia-MPII (C-Polybia-MPII) foram purificados sob condições isocráticas, utilizando-se acetonitrila 45% (v/v) e 42 % (v/v), respectivamente, como fase móvel. Posteriormente, as massas moleculares de ambos os peptídeos e o grau...